Method Article

Оценка синаптических кратности, используя поклеточного патч зажим электрофизиологии

DOI:

10.3791/59461

⸱

April 23rd, 2019

 , 
1Neuroscience Program, Schulich School of Medicine and Dentistry, University of Western Ontario, 2Robarts Research Institute, Schulich School of Medicine and Dentistry, University of Western Ontario, 3Department of Physiology and Pharmacology, Schulich School of Medicine and Dentistry, University of Western Ontario

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы представляем протокол для оценки функциональных синаптических кратности, используя патч поклеточного зажим электрофизиологии острого мозга ломтиками.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В центральной нервной системе пара нейронов часто образуют несколько синаптических контактов и/или функциональных нейромедиатора релиз сайтов (синаптических кратности). Синаптических многообразие является пластика и изменения на протяжении развития и различных физиологических условиях, будучи важным определяющим фактором эффективности синаптической передачи. Здесь мы приводим экспериментов для оценки степени кратности синапсы, прекращения на данной постсинаптических нейрон, используя патч поклеточного зажим электрофизиологии острого мозга ломтиками. В частности мембраной запись используется для сравнения разницы между амплитуда спонтанное возбуждающих постсинаптических токов (sEPSCs) и миниатюрные возбуждающих постсинаптических токов (mEPSCs). Теория позади этот метод является, что афферентные входов, которые демонстрируют многообразие покажет большой, потенциал действия зависимой sEPSCs благодаря синхронного выхода, что происходит на каждом синаптического контакта. В отличие от этого потенциал действия независимый релиз (которая является асинхронным) будет генерировать меньше амплитуда mEPSCs. Эта статья рассматривается ряд экспериментов и анализа характеризовать существование синаптических кратности и требования и ограничения метода. Этот метод может быть применен к расследованию как различные поведенческие, фармакологическим или экологических мероприятий в vivo влияют на организацию синаптических контактов в областях различных мозга.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Синаптической передачи является основным механизмом для связи между нейронами и следовательно, мозга функции. Синаптической передачи также лабильных и может изменить его эффективности на основе зависящих от деятельности, а также ответ модулирующее сигналы1. Таким образом рассмотрение синаптического функция был ключевым направлением исследований неврологии. Патч поклеточного зажим электрофизиологии — это универсальный метод, который позволяет нам понять, разработки экспериментальных проектов и анализ данных, углубленные биофизические и молекулярные механизмы синаптической передачи. Часто используемый подход, возможно благодаря простоте технику и....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты на животных утверждаются Комитетом животное уход из университета Западного Онтарио в соответствии с канадского Совета по животных уход Руководство (АУП #2014-031).

1. решения

  1. Нарезки решение
    1. Обратитесь к таблице 1 для состава нарезки раствора.
    2. Заранее подготовить 20 x Стоковый раствор и хранить его на 4 ° C до 1 месяца.
    3. 1 x нарезки решения Растворите3, глюкоза и сахароза в ddH2O NaHCO и добавьте бульон 20 x. Убедитесь, что между 315-320 мОсм осмолярности и сохранить решение для не более чем на 1 неделю при 4 ° C.
    4. За....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Вышеупомянутый Протокол описывает метод для использования электрофизиологии зажим поклеточного патч для изучения степени синаптических кратности, с помощью мыши нейронов гипоталамуса в качестве примера. Эта техника подготовки фрагмента следует дать здоровые жизнеспособных клеток, которые не имеют опухшие мембраны или ядро (рис. 1). Каждый шаг в протокол имеет важное значение для здоровья ткани и качество записи.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Одно из важных требований для успешного патч зажим электрофизиологии эксперимента является получение здоровых фрагменты/клеток. Наши описывается протокол оптимизирован для гипоталамуса фрагментов, которые содержат PVN нейронов. Другие мозга, которая районах может потребоваться изменение решения и нарезки методы21,,2223,24. Для записи, важно принимать только стабильные записи постоянно отслежива.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

И.с. получил стипендию аспирантов Онтарио. Новый следователь стипендии от психического здоровья исследований Канады получил В.И. Эта работа поддерживается операционной гранты для W.I от естественных наук и инженерных исследований Совет Канады (06106-2015 RGPIN) и в Канадский институт медицинских исследований (PJT 148707).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1 мл шприцBD309659
10 лезвийFisher Scientific/другие35698
22 лезвияVWR/другие21909-626
22 μ M шприцевые фильтрыMilipore09-719-000
Adson forecepsHarvard Instruments72-8547
Острые ножницы под угломHarvard Instruments72-8437
Clampex Molecular DevicespClamp 10
Лезвие с двойным лезвиемVWR74-0002
Фильтровальная бумагаSigma/другие1001090
Тонкая кистьFisher/разные15-183-35/разные
Газодисперсионная трубкаVWRLG-8680-120
ИзофлуранFresenius Kabi/другиеM60303
Крейзи клейразличные
различные Мини анализSynaptosoftMiniAnalysis 6
OsmomoterWescor IncМодель 5600
ПарапленкаSigmaPM-996
Пастеровская пипеткаVWR14672-200
ph метрMettler ToledoFE20-ATC
Резиновая грушаVWR82024-550
Ручка скальпеля No3Harvard Instruments72-8350
Ручка скальпеля No4Harvard Instruments72-8356
Лезвие с одной кромкойVWR55411-050
Вибратомный слайсерLeicaVT1200S
Система очистки водыMilliporeMilli-Q Academic A10
Крышка для колодцаFisher/different07-201-590/разные
<сильные>Химикаты/реактивы
4-APSigma275875
BAPTAмолекулярные зондыB1204
CaCl2*2H2OSigmaC7902
CdCl2202908
DNQXTocris189
EGTASigmaE3889
глюкозаSigmaG5767
HEPESSigmaH3375
K2-ATPSigmaA8937
KClSigmaP9333
K-глюконатSigmaG4500
MgCl2*6H2OSigmaM2670
Класс молекулярной биологии водаSigmaW4502-1L
Na3GTPSigmaG8877
NaClBioshopSOD001.1
Na-глюконатSigmaS2054
2PO4Sigma71504
NaHCO3SigmaS6014
ПикротоксинсигмаP1675
SrClСигма255521
сахарозыBioshop SUC507.1
TTXAlamone LabsT-550
yDGGTocris6729-55-1
sigma

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Abbott, L. F., Nelson, S. B. Synaptic plasticity: taming the beast. Nature Neuroscience. 3 (Supp), 1178-1183 (2000).
  2. Hsia, A. Y., Malenka, R. C., Nicoll, R. A. Development of Excitatory Circuitry in the Hippocampus. Journal of Neurophysiology. 79 (4), 2013-2024 (1998).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Synaptic MultiplicityWhole cell Patch clampSpontaneous EPSCsMiniature EPSCsAction Potential dependent ReleaseTTX Cadmium BlockadeStrontium ACSF ApplicationGamma DGG Antagonist TestAfferent Stimulation ProtocolAccess Resistance Monitoring

Related Articles