Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Расширенный murine модель безалкогольный стеатогепатит в ассоциации с сахарным диабетом 2 типа

6.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/59470

⸱

26 апреля 2019 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Endocrinology & Metabolism Charité - Universitätsmedizin Berlin, corporate member of Freie Universität Berlin, Humboldt-Universität zu Berlin, 2Berlin Institute of Health (BIH), 3Berlin-Brandenburg Center for Regenerative Therapies (BCRT), Charité - Universitätsmedizin Berlin, corporate member of Freie Universität Berlin, Humboldt-Universität zu Berlin, 4DZHK (German Centre for Cardiovascular Research), 5Institute of Medical Immunology, Charité - Universitätsmedizin Berlin, corporate member of Freie Universität Berlin, Humboldt-Universität zu Berlin, 6Julius Wolff Institute (JWI) and Center for Musculoskeletal Surgery, Charité - Universitätsmedizin Berlin, Berlin, Germany, corporate member of Freie Universität Berlin, Humboldt-Universität zu Berlin

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Простая и надежная диета индуцированной грызунов животных модель безалкогольного стеатогепатит (Нэш) описывается, достигается за счет не-SPF жилья животных и администрация конкретного высокого жира диета. Мы описываем определение печени и жировой подмножеств иммунных клеток, чтобы резюмировать человеческие иммунологические условия, подвергая мышей к экологическим ростков.

Аннотация

Ожирение связано с хроническим низкосортным воспалением и инсулинорезистентностью, способствуя увеличению распространенности хронических метаболических заболеваний, таких как диабет 2 типа и безалкогольный стеатогепатит (Нэш). Недавние исследования установили, что про-воспалительные иммунные клетки проникают ожирением гипертрофической жировой ткани и печени. Учитывая возникающим важность иммунных клеток в контексте метаболического гомеостаза, существует критическая потребность в количественной оценке и характеризуют их модификации во время развития диабета 2 типа и НЭГ. Однако, Животные модели, которые индуцируют Патофизиологические особенности, характерные для человеческого НЭША, редки.

В этой статье мы предоставляем подробный протокол для выявления иммунных подмножеств клеток, изолированных от печени и жировой ткани в надежной модели мыши НАСГ, установленных жилья с высоким содержанием жиров (HФД) мышей в неспецифической без патогена (SPF) условия, не барьер не менее семи недель. Мы демонстрируем обработку мышей в не-SPF условиях, переваривание тканей и выявление макрофагов, естественных киллеров (НК) клеток, дендритных клеток, B и т-клеток подмножеств потока цитометрии. Предоставляются репрезентативные потоки тометриметрии от мышей SPF и не-SPF. Для получения надежных и интерпретируя данных, использование антител, точных и точных методов для переваривания тканей и правильного стробирования в опытах цитометрии являются важнейшими элементами.

Вмешательство для восстановления физиологических воздействия антигена у мышей на жилье их в не-SPF условиях и неспецифическое воздействие микробных антигенов может обеспечить соответствующий инструмент для исследования связи между иммунологическими изменениями, диета индуцированной Ожирение и связанных с ними долгосрочных осложнений.

Введение

Ожирение является многофакторным расстройством и основным фактором риска развития сердечных заболеваний, инсульта, безалкогольного стеатогепатита (Нэш), диабета 2 типа (T2D) и некоторых видов рака. Распространенность ожирения стремительно возрастает во всем мире. Сегодня 2 100 000 000 человек — почти 30% населения мира — страдают ожирением или имеют избыточный вес1. Ожирение-ассоциированные инсулинорезистентность может привести к T2D, когда исчерпаны поджелудочной железы островок бета-клеток не в состоянии компенсировать повышенную потребность в инсулине для поддержания глюкозы гомеостаза2.

Жировая ткань состоит из различных типов клеток, включая адипоциты, эндотелиальные клетки, фибробласты и иммунные клетки. При прогрессировании ожирения изменения количества и активности иммунных клеток могут приводить к низкосортных воспалений гипертрофической жировой ткани3,4. В частности, было установлено, что чрезмерное потребление энергии, сопровождается хронически повышенный уровень глюкозы в крови, триглицеридов и свободных жирных кислот, приводит к адипоцита гипоксии, эндоплазматический ретикулум стресс, нарушение митохондриальной функции и усиление секреции цитокинов, приводящее к активации про-воспалительных жировой иммунной клетки5,6. Прошлые исследования в основном сосредоточены на врожденный иммунитет, но в последнее время адаптивные иммунные клетки (т и в клетки) появились как важные регуляторы гомеостаза глюкозы. Они обладают воспалительными (в том числе CD8+ т-клеток, Th1 и B-клеток) или в первую очередь нормативные функции (в том числе нормативных т (TREG) клетки, Th2 клетки) и может как усугубить или защитить от инсулинорезистентности7,8 , 9. в

Кроме того, несколько механизмов было предложено объяснить, как ожирение увеличивает стеатогепатит, в том числе увеличение производства цитокинов жировой ткани10. Нэш, Прогрессивная форма безалкогольного жирных заболеваний печени и основных бремени для здоровья в развитых странах, гистологически характеризуется раздутый гепатоциты, накопление липидов, фиброз и периклеклеточного воспаления и может прогрессировать до Цирроз, стадия заболевания печени на конечной стадии или гео-клеточная карцинома. Некоторые схемы (например, метионин и холин дефицит диета11), как известно, ИНДУЦИРОВАТЬ Нэш-подобный патологии печени в не-человеческого животных моделей, но большинство из этих подходов не резюмировать человеческие условия НЭО и его метаболические последствия, поскольку они либо требуют конкретных ген нокаутом, не физиологические диетические манипуляции или отсутствие резистентности к инсулину типичный человеческий Нэш. Кроме того, наше понимание основных механизмов метаболических заболеваний в настоящее время основывается на экспериментах, проведенных с лабораторными мышами, размещенный под стандартными конкретными патогеном свободными (SPF) условиями. Эти барьерные сооружения являются аномально гигиеничными и не учитывают микробное разнообразие, с которым приходится сталкиваться людям, что может учитывать трудности в процессе перевода исследований на животных к клиническим подходам12,13 , 14-ое.

Для исследования различных иммунных подмножеств клеток в жировой ткани и печени во время развития инсулинорезистентности и Нэш в продвинутой модели мыши воспроизводства человеческих иммунологических состояний, мышей были размещены в отдельных клетках в полу стерильных условия без барьера. Мыши, размещенный под антигеном подвергается условий развитых Нэш-подобных патологии печени уже после 15 недель с высоким содержанием жиров диеты (ДФД) кормления13. По сравнению с возрастом, сопрягаемом SPF мышей они разработали макровезикулярного стеатоза, печеночной инфильтрации и активации иммунных клеток.

Эта рукопись описывает надежный анализ расхода цитометрии для определения и подсчета подмножеств иммунных клеток из жировой ткани мыши и печени в модели НЭША. Анализ расхода цитометрии позволяет обнаруживать множественные параметры отдельных клеток одновременно, в отличие от подходов РТ-ЦР или иммуногистохимии.

Таким образом, наше исследование предлагает мышь модель краткосрочного HФД для исследования развития резистентности к инсулину и Нэш и основные механизмы, которые также экспонатов верность состояния человека.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Это исследование проводилось в соответствии с руководством по уходу и использованию лабораторных животных национальных институтов здравоохранения и закона о защите животных под наблюдением нашего институционального Комитета по уходу за животными и использованию. Животные протоколы были проведены в соответствии с институциональными этическими руководящими принципами Шарите Берлин, Германия, и были одобрены Ландесамт-Гешюнхайт и Содиалес и соблюдать правила прибытия.

1. диета индуцированной животных модель стеатогепатит

  1. Передача мышей (C57Bl/6J, мужчины), не-SPF жилья в возрасте 4 недель и подвергать их непрерывно широкий спектр экологических патогенов/антигенов. Гарантировать экспозицию при ежедневном обращении с лабораторными животными, так как антигены распространяются таким образом воздушным проходом.
  2. Поддерживайте мышей (C57Bl/6J, мужчина, 12 недель) в открытых системах останов с обычными фильтрами на 12 h:12 h свет/темный цикл при температуре 22 ° c. Не излучать или автоклав экспериментальной диеты и постельных принадлежностей. Доступ животных жилья объекта без маски или сетки для волос. Откройте двери между животными комнатами. Не используйте воздушный душ.
  3. Гарантировать ежедневное обращение с лабораторными животными и переключать помещения на регулярной основе, чтобы антигены распространялись воздушным проходом. Дополнить грязное жилье ежедневным неспецифическое микробное воздействие антигенов из постельных принадлежностей млекопитающих лабораторных животных, размещенных в комнатах рядом с лабораторными мышами.
  4. Измерить пропорции CD44-CD62L-эффекторной памяти CD4+ и CD8+ т- клеток в крови и селезенке с использованием потока цитометрии (как описано в refefence13).
    Примечание: В связи с этим мы определили увеличение на 20% эффекторной памяти CD8+ т-клеток от CD8+ т-клеток в качестве доказательства достаточной микробной экспозиции.
  5. Начало hфд (60 KJ% от жира, 19 KJ% от белков и 21 KJ% от углеводов и потребление AD вволю воды с 6% содержанием сахарозы с 5-недельного старого C57Bl/6J мужской мышей в течение 7-15 недель. HФД должен содержать 60% kJ из жира (как описано выше), чтобы вызвать развитие инсулинорезистентности в течение эксперимента.
    Примечание: Гематоксилин окрашивания должны быть выполнены и гистологических характеристик, как воздухоплавание гепатоцитов, Мэллори Денк органов, проникновение иммунной клетки и макровезикулярного стеатоз должны быть найдены, чтобы продемонстрировать Нэш-как патологии печени (как показано в ссылке 13).

2. Подготовка реагентов и растворов

  1. Подготовить 70% этанола, фосфатного буферного раствора (PBS, без кальция и магния), дополнить буфером лизиса с 0,5% ЗБТ и ACK (аммония-хлорида калия).
  2. Окрашивание буфера
    1. Растворите 10 мл сыворотки из фетального теленка (ФТС) в 500 мл PBS, чтобы получить 2% ФТС PBS. Место окрашивания буфера на льду перед использованием.
    2. Хранить раствор в пластиковой бутылке при температуре 4 °C.
  3. Коллагеназы раствор для пищеварения жировой ткани
    1. Растворите 2,5 г крупного рогатого скота сыворотки альбумина (БСА) в 500 мл PBS, чтобы получить 0,5% БСА/PBS.
    2. Растворите 74,5 g из КАГЛ2 в 10 мл 0,5% БСА/PBS, чтобы получить 10 мм раствор КАГЛ2 .
    3. Добавить 1 мг коллагеназы типа II (см. таблицу материалов) к каждому мл 0,5% БСА с 10 мм КАГЛ2 PBS.
    4. Подготовка 3 мл раствора коллагеназы дайджест на г жировой ткани образца. Подготовьте новое решение коллагеназы для каждой изоляции.
  4. Коллагеназы раствор для пищеварения ткани печени
    1. Растворите 2,5 г БСА в 500 мл сбалансированного солевого раствора Хэнка (ГБСС) для получения 0,5% БСА.
    2. Добавить 10 мл СУО в 500 мл 0,5% БСА/ГБСС для получения 2% СУО 0,5% БСА/ГБСС.
    3. Добавьте 0,5 мг коллагеназы типа IV (см. таблицу материалов) каждому мл 2% фтс 0,5% БСА/ГБСС.
    4. Добавить 0,02 мг Дназы на мл 2% СУО 0,5% ЗБТ/ГБСС раствор коллагеназы.
    5. Приготовьте 13 мл раствора для переваривания коллагеназы на образец ткани печени.
    6. Подготовьте новое решение коллагеназы для каждой изоляции.

3. Генерация одноклеточных суспензий

  1. Пищеварение жировой ткани
    1. Эвтаназии мышей через изофлуран анестезии следуют шейки дислокации. Спрей груди с 70% этанола. Осторожно сделать 5-6 cm центральный разрез через ангумент и брюшной стенки по всей длине грудной клетки подвергать плевральную полость и сердце.
      Примечание: Не повредить основные органы и сохранить ножницы советы вверх.
    2. Впрыснуть по крайней мере 10 мл 0,9% физиологического раствора в верхней части левого желудочка с помощью 26 G иглы.
      Примечание: Успешная перфузии отмечена бланширование печени.
    3. Откройте брюшной полости с ножницами и вырезать перигонадные жировые подушечки на каждой стороне с тонкой изогнутые ножницы. Вскрыть ткани гонадал с тонкой изогнутые ножницы и весят жировой ткани.
    4. Выполните механической диссоциации с помощью ножниц и вырезать жировой ткани на мелкие кусочки в чашке Петри на 4 ° c. Передача жировой ткани в 50 mL конические центрифуги и промыть чашку Петри с 1 мл 0,5% БСА/PBS.
    5. Добавьте 3 мл раствора дайджеста жировой ткани (как подготовлено в шаге 2,3) на грамм жировой ткани. Инкубировать раствор жировой ткани при температуре 37 ° c в течение 20 мин под нежным встряхивания (200 оборотов в минуту).
    6. Добавьте 5 мл 0,5% БСА/PBS на грамм жировой ткани и положите на лед. Triturate решение много раз с 10 мл серологических пипетки и передать его через стрейнер (100 мкм) с помощью поршень.
    7. Центрифуга при температуре 500 x g 10 мин при температуре 4 °c.
    8. Удалите плавающую фракцию адипоцита с помощью пипеттинга. Ресуспензируем ячейки гранул (стромальные сосудистые фракции) в 1 мл в буфер лизиса (см. таблицу материалов). Добавьте 10 мл 2% ФТС PBS.
    9. Центрифуга при температуре 500 x g 10 мин при температуре 4 °c.
    10. Decant супернатант и ресуспензируем Cell гранулы в 250 мкл 2% ФТС PBS.
    11. Подсчитайте количество жизнеспособных ячеек на хемоцитометер, используя синюю Трина-исключение.
  2. Пищеварение ткани печени
    1. Храните печень в конической центрифуге трубки заполнены PBS и транспорта на льду.
    2. Выполните механическую диссоциацию с помощью шприцев в чашке Петри при температуре 4 °C. Положите расчлененные ткани печени в 50 mL коническая центрифуга трубки, содержащие 10 мл теплого раствора дайджест печени. Промойте чашку Петри 3 мл раствора для переваривания печени.
    3. Инкубировать раствор ткани печени при температуре 37 ° c в течение 20 мин под нежным встряхивания (200 оборотов в минуту).
    4. Добавьте 20 мл ГБСС. Triturate решение много раз с 10 мл серологических пипетки и передать его через стрейнер (100 мкм) с помощью поршень.
    5. Центрифуга при температуре 500 x g 10 мин при температуре 4 °c. Decant супернатант и ресуспензируем ячейки гранул в 20 мл гбсс.
    6. Центрифуга при температуре 30 х g в течение 1 мин при комнатной температуры для удаления матрицы гепатоцитов. Выбросьте Пелле клетки.
    7. Центрифуга супернатант на 500 x g в течение 10 мин при температуре 4 °c. Ресуспензируем гранулы в 10 мл 33% низкой вязкостью градиент плотности среднего раствора (см. таблицу материалов) в ГБСС следуют центрифугирования (800 х г; 30 мин; комнатной температуре; без тормозов).
    8. Ресуспензируем гранулы в 1 мл из АК лизиса буфера и инкубировать в течение 4 мин при комнатной температуре. Затем добавьте 10 мл ГБСС.
      Примечание: Чтобы отказаться от супернатант АСК супернатант с интерфазой (гепатоциты) очень осторожно с передачей пипетки (как можно больше без принятия гранул с иммунными клетками и эритроцитов).
    9. Pass клетки через 30 мкм стрейнер в 15 mL коническая центрифуга трубки и центрифуги при 500 x g для 10 мин при 4 °c. Decant супернатант и ресуспензируем Cell гранулы в 250 мкл 2% ФТС PBS.
    10. Подсчитайте количество жизнеспособных ячеек на хемоцитометер, используя синюю Трина-исключение.

4. поверхностное окрашивание

  1. Подготовьте смесь антитела для т-клеток-подмножеств (панель 1) и врожденных иммунных клеток (панель 2), как описано в таблице 1 и таблице 2. Объемы оптимизированы для одного образца (100 мкл) в отношении концентраций антител.
    Примечание: Лимфоциты и врожденные иммунные клетки присутствуют различия в аутофлуоресценции и должны анализироваться отдельно.
  2. Используйте до 3 x 106 ячеек в 100 мкл в полистирол FACS трубки для окрашивания поверхности. Чтобы заблокировать рецепторы FC добавить 10 мкл анти-CD16/CD32 антитела (разбавленный 1:100) и инкубировать в течение 10 мин на льду. Используйте незапятнанный отрицательный образец управления, чтобы отрегулировать боковой разброс (ССК) и форвард-разброс (КФС) для определения местоположения отрицательной ячейки населения.
  3. Вихревые и добавить соответствующий объем антител смесь для группы 1 и группа 2. Добавьте 1 мкл красителя жизнеспособности для каждого образца, чтобы обеспечить живую и мертвую клеточную дискриминацию. Инкубировать для 20 мин при температуре 4 °C и защищен от света.
  4. Вымойте два раза с 2 мл 2% ФТС PBS и центрифуги на 300 x g в течение 5 минут при температуре 4 °c.
  5. Ресуспензируем ячейки гранулы в 300 мкл 2% ФТС PBS и хранить при температуре 4 °C до FACS анализа.
    Примечание: Перед началом измерения проходят ячейки через 30 мкм сетчатый фильтр в полистирол FACS трубки и вихря. Поток цитометрии был выполнен с маркированных клеток, хранящихся в 2% ФТС PBS при температуре 4 ° c для 1-3 h. клетки должны анализироваться как можно скорее для оптимизации результатов.

5. поток цитометрии компенсация, приобретение, и стробирования

  1. Запустите незапятнанный отрицательный образец управления, чтобы установить КФС и ССК и корректировать напряжение тока cytometer для обнаружения лейкоцитов популяций и различать между мусором и жизнеспособных клеток. Исключить мусор и мертвые клетки.
    Примечание: Жизнеспособность ячейки суспензии из печени может быть ниже, чем жизнеспособность от ячейки суспензий из перигонадал жировой ткани из-за дополнительной плотности разделения плотность.
  2. Запустите одиночные окрашенные образцы управления для мультицветной компенсации.
    Примечание: Шарики захвата антитела смогли также быть использованы для того чтобы отрегулировать для спектрального перекрытия если число клеток населенности клетки интереса слишком низко для того чтобы компенсировать использующ клетки. Для обнаружения возможных автофлуоресцентных сигналов клеток флуоресценции минус один (FMO) контроль за каждым антителом рекомендуется, но не применялись в этом протоколе.
  3. Запустите измерение, соберите соответствующее количество событий (не менее 50 000 событий) и запишите экспериментальные данные.
  4. Экспортировать файлы данных ФТС для анализа и устанавливать стратегию стробирования. Ворота на CD45+ лейкоцитов для определения последующих клеточных популяций.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Описанный протокол позволяет охарактеризовать поверхностные маркеры врожденных и адаптивных иммунных клеток, изолированных от Мурина перигонадной жировой ткани и печени, в модели индуцированного диетой НЭША. В этой модели, Нэш был вызван администрацией HFD плюс сахароза (6%) в питьевой воде в течение 7 до 15 недель в C57Bl/6J мышей, как сообщалось ранее13. Важно, что мыши были размещены в полу стерильных условиях и, таким образом, подвергаются воздействию экологических антигенов на протяжении всег...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Стеатогепатит имеет сильную связь с метаболическими аномалиями, такими как ожирение, инсулинорезистентность и дислипидемия15. Многочисленные исследования показывают, что воспаление жировой ткани может стимулировать патогенез диабета типа 2, включая измененные уровни клеток как врожденной, так и адаптивной иммунной системы4,5,16,17 . В добавлении, было найдено что тучност...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы благодарим Анке Журисч, Диана Woellner, д-р Катрин Витте и Корнелии Хекманн за помощь в экспериментальных процедурах и Бенджамин Tiburzy из Билегенда для полезные замечания по стратегии стробирования. И.С. был поддержан грантом Гельмхольца (ICEMED). Это исследование было поддержано грантами из отдела клинических исследований Берлинского института здравоохранения (БиГ), «БЭЛТ-гранта» федеральным министерством образования и исследований Германии и Фондом Эйнштейна. К.С.-Б. и H.-Д.В. финансируются FOR2165.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
100 &микро; Ситечные фильтры M Cell Falcon352340
1 мл шприц BD   
спицы 26 G x 5/8 BD 
Чашки Петри 35 мм Сокол353001
40 & микро; Ситечные фильтры M Cell Falcon352340
ACK буфер для лизиса GIBCOA1049201
Alexa Fluor 700 антимышиный CD45Biolegend 103127AB_493714 (BioLegend Cat. No 103127)
Программное обеспечение для анализа FlowJo 10.0.8 программное обеспечение
APC антимышиный антитело CD11cBiolegend 117309AB_313778 (BioLegend Cat. No 117309)
APC антимышиный антитело KLRG1 (MAFA)Biolegend 138411AB_10645509 (BioLegend Cat. No 138411)
BV421 антимышиное антитело CD127Biolegend 135023AB_10897948 (BioLegend Cat. No 135023)
BV421 антимышиное антитело F4/80Biolegend 123131AB_10901171 (BioLegend Cat. No 123131)
BV605 антимышиное антитело CD279 (PD-1)Biolegend 135219AB_11125371 (BioLegend Cat. No 135219)
BV605 антимышиное антитело NK-1.1Biolegend 108739AB_2562273 (BioLegend Cat. No 108739)
BV650 антитело к мыши/человеку CD11bBiolegend 101239AB_11125575 (BioLegend Cat. No 101239)
BV711 антитело к мыши/человеку B220Biolegend 103255AB_2563491 (BioLegend Cat. No 103255)
BV785 антитело к мышиному CD8aBiolegend 100749AB_11218801 (BioLegend Cat. No 100749)
C57Bl/6J мыши, самец, 5 недель Forschungseinrichtungen fü r experimentelle Medizin (FEM)
CaCl2 Charité - Universitä цмедизин БерлинА119.1 
Коллагеназа NB 4G Доказанный сорт СЕРВА 
коллагеназа типа I Уортингтон 
Коническая центрифужная трубка 15мл;Falcon352096
Коническая центрифужная пробирка 50 мл Сокол352070
ДНКаза   Сигма-Олдрич 
Фетальная бычья сыворотка BiochromS0115
Фильтр 30&микро; М Celltrics 
FITC антимышиное антитело CD3Biolegend 100203AB_312660 (BioLegend Cat. No 100203)
Проточная цитометрия БД-ЛСР Фортесса 
Щипцы Сигма-Олдрич F4142-1EA
HBSS Биоаналитический GmBH 085021-0500 
Диета с высоким содержанием жиров SSNIFE15741– 34 60 кДж% от жира, 19&тонких; кДж% из белков, а 21  kJ% от углеводов
микрорассекающие ножницы Сигма-Олдрич S3146используется для вскрытия 
ПЭ антимышиное антитело CD25Biolegend 101903AB_312846 (BioLegend Cat. No 101903)
PE/Cy7 антитело к мышиному CD62LBiolegend 104417AB_313102 (BioLegend Cat. No 104417)
PE/Cy7 антимышиный I-A/I-E (MHCII) АнтителоBiolegend 107629AB_2290801 (BioLegend Cat. No 107629)
PE/Dazzle 594 антимышиное антитело CD4Biolegend 100565AB_2563684 (BioLegend Cat. No 100565)
Решение Percoll BiochromL6115
PerCP/Cy5.5 антитело к мышиному CD44Biolegend 103031AB_2076206 (BioLegend Cat. No 103031)
PerCP/Cy5.5 антитело к мышиному Gr-1Biolegend 108427AB_893561 (BioLegend Cat. No 108427)
Фосфатный буферный физиологический раствор Gibco12559069
Трубки с круглым дном и колпачком фильтраSTEMCELL Technologies 38030
TruStain fcX антимышиный CD16/32Biolegend 101301AB_312800 (BioLegend Cat. No 101301)
Трипан Блю Сигма-Олдрич T6146
Zombie NIR Фиксируемый набор для повышения жизнеспособности Biolegend 423105окрашивание на жизнеспособность 
30965930511511427513LS0041974716728001400422316

Ссылки

  1. Guh, D. P., et al. The incidence of co-morbidities related to obesity and overweight: A systematic review and meta-analysis. BMC Public Health. 9, 88(2009).
  2. Prentki, M. Islet β cell failure in type. J Clin Invest. 116 (7), 1802-1812 (2006).
  3. Shoelson, S. E., Lee, J., Goldfine, A. B. Inflammation and insulin resistance. Journal of Clinical Investigation. 116 (7), 1793-1801 (2006).
  4. Kahn, S. E., Hull, R. L., Utzschneider, K. M. Mechanisms linking obesity to insulin resistance and type 2 diabetes. Nature. 444, 840(2006).
  5. Exley, M. A., Hand, L., O'Shea, D., Lynch, L. Interplay between the immune system and adipose tissue in obesity. Journal of Endocrinology. 223 (2), R41-R48 (2014).
  6. Ferrante, A. W. Macrophages, fat, and the emergence of immunometabolism. Journal of Clinical Investigation. 123 (12), 4992-4993 (2013).
  7. Winer, D. A., et al. B cells promote insulin resistance through modulation of T cells and production of pathogenic IgG antibodies. Nature Medicine. 17, 610(2011).
  8. Onodera, T., et al. Adipose tissue macrophages induce PPARγ-high FOXP3(+) regulatory T cells. Scientific Reports. 5, (2015).
  9. Lackey, D. E., Olefsky, J. M. Regulation of metabolism by the innate immune system. Nature Reviews Endocrinology. 12, 15(2015).
  10. Calle, E. E., Kaaks, R. Overweight, obesity and cancer: epidemiological evidence and proposed mechanisms. Nature Reviews Cancer. 4, 579(2004).
  11. Ibrahim, S. H., Hirsova, P., Malhi, H., Gores, G. J. Animal Models of Nonalcoholic Steatohepatitis: Eat, Delete, and Inflame. Digestive Diseases and Sciences. 61 (5), 1325-1336 (2016).
  12. Beura, L. K., et al. Recapitulating adult human immune traits in laboratory mice by normalizing environment. Nature. 532 (7600), 512-516 (2016).
  13. Sbierski-Kind, J., et al. Distinct Housing Conditions Reveal a Major Impact of Adaptive Immunity on the Course of Obesity-Induced Type 2 Diabetes. Frontiers in Immunology. 9 (1069), (2018).
  14. Japp, A. S., et al. Wild immunology assessed by multidimensional mass cytometry. Cytometry Part A. 91 (1), 85-95 (2017).
  15. Benedict, M., Zhang, X. Non-alcoholic fatty liver disease: An expanded review. World Journal of Hepatology. 9 (16), 715-732 (2017).
  16. McNelis, J. C., Olefsky, J. M. Macrophages, Immunity, and Metabolic Disease. Immunity. 41 (1), 36-48 (2014).
  17. Ferrante, A. W. The Immune Cells in Adipose Tissue. Diabetes, Obesity & Metabolism. 15, 34-38 (2013).
  18. Bertola, A., et al. Hepatic expression patterns of inflammatory and immune response genes associated with obesity and NASH in morbidly obese patients. PloS One. 5 (10), e13577(2010).
  19. Turnbaugh, P. J., Bäckhed, F., Fulton, L., Gordon, J. I. Diet-Induced Obesity Is Linked to Marked but Reversible Alterations in the Mouse Distal Gut Microbiome. Cell Host & Microbe. 3 (4), 213-223 (2008).
  20. Singh, R. K., et al. Influence of diet on the gut microbiome and implications for human health. Journal of Translational Medicine. 15 (1), 73(2017).
  21. Müller, V. M., et al. Gut barrier impairment by high-fat diet in mice depends on housing conditions. Molecular Nutrition & Food Research. 60 (4), 897-908 (2016).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Мыши на диете с высоким содержанием жировне-SPF условиястромально-васкулярная фракцияанализ методом проточной цитометриипротокол переваривания тканейизоляция иммунных клетокжировая ткань печенистратегия гейтирования
Расширенный murine модель безалкогольный стеатогепатит в ассоциации с сахарным диабетом 2 типа
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.