Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Оценка клеточный иммунный ответ плодовой мушки Drosophila melanogaster, используя Assay фагоцитоза в естественных условиях

7.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/59543

⸱

10 апреля 2019 г.

 , 
1Department of Biology, University of Maryland, 2Department of Cell Biology and Molecular Genetics, University of Maryland, 3Institute for Bioscience and Biotechnology Research, University of Maryland

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает в естественных условиях фагоцитоза assay в взрослых Drosophila melanogaster для количественного определения фагоцитарной признание и распродажа микробной инфекции.

Аннотация

У всех животных врожденного иммунитета обеспечивает немедленное и надежное обороны против широкого спектра патогенных микроорганизмов. Гуморальный и клеточный иммунный ответ являются основными отраслями врожденного иммунитета, и многие факторы, регулирующие эти ответы эволюционно консервируют между беспозвоночных и млекопитающих. Фагоцитоз, центральный компонент клеточной врожденного иммунитета, осуществляется специализированными кровяных клеток иммунной системы. Плодовой мушки Drosophila melanogaster, стала мощным генетических модель для изучения молекулярных механизмов и физиологические последствия фагоцитоза в целом животных. Здесь мы показываем на основе инъекции в естественных условиях фагоцитоза assay для количественного определения поглощения частиц и уничтожения клетками крови дрозофилы , hemocytes. Процедура позволяет исследователям точно контролировать концентрации частиц и дозы, что позволяет получить высокую воспроизводимость результатов в короткий промежуток времени. Эксперимент, количественных, легко выполнить и может быть применен к экран для принимающей факторов, что влияние возбудителя признание, поглощение и распродажа.

Введение

Врожденной иммунной защиты являются первой линией обороны против болезнетворных микробов. Эти ответы могут быть функционально разделена на гуморальный и клеточный врожденного иммунитета, оба из которых являются опосредовано кодировке микрофлорой шаблон признание рецепторов (ПРРС) которые чувствуют патоген связанные молекулярные структуры (PAMPs)1. В млекопитающих и беспозвоночных, таких как нематода, Caenorhabditis elegans и плодовой мушки Drosophila melanogaster2сохраняются многие из сигнальные пути и механизмы эффекторных врожденного иммунитета. Плодовая муха стала мощной системы для изучения принимающей обороны против инфекционных микроорганизмов3. Дрозофилы генетически шансов справиться с возникающими, легко и недорого, выращенные в лабораториях и имеет время коротких поколения. Кроме того фрукты fly экспонатов высокоэффективных оборону против массив микробов, позволяя рассмотрение принимающих иммунитет против вирусных, бактериальных, грибковых или паразитарные патогенов.

Дрозофилы иммунологов исторически использовали вперед генетических экраны, геном общесистемной РНК опосредованной вмешательства (RNAi) скрининг насекомых клеточных линий и существующие мутант летать штаммов для изучения врожденного иммунитета – приводит к определение и характеристика несколько эволюционно сохранены гуморального иммунного пути4,5,6,,78. Врожденное гуморальный иммунный ответ, вероятно, лучший характеризуется иммунной обороны в плодовых мух. После инфекции гуморальный ответ приводит к производства и системных выпуска антимикробного пептида (AMP) молекул в гемолимфа, крови, эквивалент в насекомых. Усилители производятся высоко сохранены платных и Imd, сигнальные пути. Путь платных гомологичных для млекопитающих рецепторы TLR/Ил 1R сигнализации, и путь Imd гомологичных млекопитающих фактор некроза опухоли альфа сигнализации. В платных дрозофилы, сигнализации индуцируется грамположительных бактерий, грибов и Виру дрозофилы Xs6,9,10 и Imd сигнализации индуцируется грамотрицательных бактерий11 ,12.

Клеточный иммунитет, состоящая из инкапсуляции, melanization и фагоцитоз инвазивных патогенов, осуществляют специализированные клетки крови, называемые hemocytes13. Существует три класса hemocytes в плодовой мухи: кристалл клетки, lamellocytes и plasmatocytes13. Кристалл клетки, которые составляют 5% циркулирующего hemocytes в личинки, выпуск proPhenoloxidase (редложить) ферментов приводит к melanization патогенов и принимающих тканей на участках раны. Lamellocytes, которые обычно не встречаются в здоровых эмбрионов или личинок, являются адэрентных клеток, которые инкапсулируют посторонних предметов. Эти клетки наведены на pupariation или когда паразитирующих осы яйца залегают в личинки. Фагоцитирующих plasmatocytes, которые составляют 95% циркулирующих hemocytes в личинок и все остальные hemocytes в взрослых, играть определенную роль в ткани, Ремоделирование во время разработки и, в частности, служат в качестве основных эффекторных клеток дрозофилы клеточного иммунитета.

Фагоцитоз немедленное и решающее значение линии иммунной защиты; микробы, которые нарушают принимающей эпителиальных барьер быстро охватил и устраняется фагоцитирующих клеток крови (всеобъемлющий обзор клеточной биологии фагоцитоза см. в Справочник 14). Этот процесс инициируется при кодировке микрофлорой распознавание рецепторов (ПРРС) на hemocytes признать возбудителя связанные молекулярные структуры (PAMPs) микробов. Когда-то привязаны к их цели, РРСС инициировать сигнальных каскадов, которые приводят к образованию ложноножки через ремоделирования Цитоскелет актина. Ложноножки окружают Микроб, который впоследствии охватил и включены в зарождающейся органеллы, фагосомы. Микробы уничтожаются как фагосомы проходит процесс созревания фагосомы, когда фагосомы торговли в глубь кровяные и подкисляет через серию взаимодействий с лизосом. In vitro и ячейки биологии исследования в mammalian клетках первичной играют важную роль в идентификации и установлению характеристик факторов, которые регулируют фагоцитоза, например млекопитающих Fc-гамма-рецептор и C3b рецепторов,1516. Тем не менее возможность выполнения крупномасштабных экраны или в естественных условиях исследования ограничены в mammalian системами.

Здесь мы представляем в естественных условиях assay для фагоцитоза в взрослых плодовых мух, которая основана на процедуре, впервые представленный в лаборатории Дэвида Шнайдер в 2000 году17. Шнайдер лаборатории показали, что скальный hemocytes кластерного вдоль брюшной спинной судна легко фагоцитировать шарики полистироля и бактерий. Чтобы визуализировать фагоцитоза, мух вводят с дневно обозначенные частиц (например, кишечной палочки с флуоресцеин Изотиоцианаты (E. coli -FITC)), инкубировали 30 минут позволить hemocytes время, чтобы поглотить частицы, а затем вводится с Трипановый синий, который утоляет флуоресценции частиц не phagocytosed во время инкубационного периода. Затем весь спинной судов отражаются с помощью инвертированного микроскопа флуоресцентные. Этот семенных бумаги, используя сравнительно простой эксперимент, показали, что hemocytes фагоцитоз бактерий и латексные шарики, что бактериальных фагоцитоза могут тормозится предварительно инъекций летит с латексные шарики, и что летает без клеточных и гуморальных иммунные реакции даже подвержен кишечной палочки. Анализа, представленные в настоящем докладе основывается на результатах работы Шнайдер лаборатории для количественного определения в естественных условиях фагоцитоза путем измерения интенсивности флуоресценции частиц, обхватил спинной судно связанного hemocytes.

Подобно подходу, применяемому в mammalian системами, генетики дрозофилы первоначально используется генома всей в vitro RNAi экраны для идентификации генов, необходимых для клеточный иммунный ответ18,19,20 ,21,22,23. Однако развитие взрослых в естественных условиях фагоцитоза assay включен последующих экспериментов, чтобы легко осуществляться в целом животных, таким образом позволяя исследователям для проверки биологического роль факторов, выявленных в исследования in vitro. Так обстояло дело с трансмембранного рецептор Eater, которая была впервые выявлена как бактериальный рецептор RNAi на экране с помощью S2 клетки24 и затем позднее показано посредником Escherichia coli (E. coli), Enterococcus faecalis, и золотистый стафилококк (S. aureus) фагоцитоза в взрослых25.

Наша лаборатория занятых в естественных условиях фагоцитоза assay вперед генетических экранов и генома всей ассоциации исследований (с использованием дрозофилы группа генетических ссылки (DGRP)) для выявления роман гены, которые регулируют фагоцитоза в взрослых hemocytes. Эти исследования привели к характеристике рецепторов PGRP-SC1A и PGRP-са26, внутриклеточный везикул людьми белка Rab1427, глютамат транспортер Полифем28и RNA-связывая протеин Фокс-129.

Мы ожидаем, что будущие экраны, включения в естественных условиях фагоцитоза может привести к выявлению дополнительных генов, которые являются важными для клеточный иммунный ответ у дрозофилы. Экраны с помощью полностью виртуализированных инбредных линий, таких как DGRP или дрозофилы ресурсов синтетических населения (DSPR), можно определить природные варианты влияющие фагоцитоза или кровяные развития. Кроме того техника может быть принят в других видов дрозофила или используется для экрана нового сообщества ресурсы, такие как коллекции 250 видов дрозофилы , поддерживали центр фондовой (NDSSC видов национальной дрозофилы ) в Корнелльском университете. Эти эксперименты может осуществляться с помощью дневно меченых бактериальной или грибковой стенки bioparticles, которые доступны коммерчески или может осуществляться с помощью любое количество бактериальных или грибковых видов-условии, что микроб выражает флуоресцентные маркеры .

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Подготовьте флуоресцеин частиц для инъекций

  1. Воссоздания 10 мг коммерчески доступных, жар убитые бактерий частицы, помечены флюоресцеином (см. Таблицу материалы) на складе концентрации 10 мг/мл, добавляя 990 мкл стерильные ПБС и азид натрия 50 мм 10 мкл. Вихрь смешивать.
    1. Разделите на 8 мкл аликвоты одноразового использования в 0,2 мл пробирок и хранить в темной коробке при 4 ° C для сведения к минимуму связанного светочувствительность.
      Примечание: Азид натрия предохранитель является необязательным и может быть опущено, если акции 10 мг/мл с 1 мл стерильного ПБС, aliquoted и хранятся при температуре-20 ° C.
  2. Сделайте раствор 10 мл 5% пищевой краситель в однократном ПБС, смешивая 500 мкл шприц фильтруют зеленый food окраску и 9,5 мл стерильного ПБС.
  3. Вымойте частиц до инъекции для удаления азид натрия. Мкл стерильные 1 Mix 42 x PBS и 8 мкл 10 мг/мл в 1,7 мл трубку. Центрифуга на Макс скорость за 2,5 мин при комнатной температуре.
    1. Удалить супернатант, добавьте 50 мкл 1 x PBS и центрифуги на Макс скорость за 2,5 мин при комнатной температуре.
    2. Повторите шаги 1.3 и 1.3.1 2 x, для в общей сложности 3 стирок.
    3. После окончательного вымыть удалить супернатант и вновь приостановить частиц 1,6 мг/мл в 50 мкл 5% пищевой краситель в однократном ПБС.
    4. Оберните трубу в алюминиевой фольги для защиты от света. Хранить при 4 ° C, выбросьте после 1 недели.

2. Подготовьте инъекции станции и мух

  1. Подготовьте площадку инъекции. Придать до 4 генотипов мух в то же время, использование лабораторных Лента разделить прямоугольной Муха2 CO площадку на 4 секции. На скамейке рядом с микроскопом обозначения районов для размещения флаконов после мухи были выстроились на площадку (один для каждого угла площадки).
  2. Подготовить ампул по возрасту совпадают, 4-7 дней-старый, мух для инъекций. Для каждого штамма проверяемый передача 5 кобелей и 5 сук в свежий, обозначенные флакон полуфабрикаты покупать и хранить при температуре 25 ° C.
  3. Подготовить пневматические форсунки (см. Таблицу материалы), установив инструмент в 100 мс (короткие всплески давления газа высылать жидкости – позволяя доставки суб nanoliter томов) временный режим.
  4. Подготовьте скольжениях микроскопа. Вырежьте полоски 1,5 дюймовый изоленты, сложить в петлю с клейкой стороной наружу и место на обозначенные микроскопа.

3. подготовить стеклянные капиллярные иглы

  1. Вытяните стекла иглы (тонкие стены стеклянные капилляры) с помощью иглы съемник.
    1. Удерживая иглу под микроскопом с микрометра и разорвать отзыв, используя пинцет из нержавеющей стали тонкой точке #5. 100 мкм советы являются достаточными для прокалывания мухи кутикулы при сведении к минимуму ранив.
    2. Измерьте объем жидкости, которые будут вводиться в каждом летать. Загрузить игла с стерильных 5% пищевой краситель в однократном ПБС и высылать жидкость на падение минерального масла на стадии микрометра 0,01 мм.
      Примечание: Если жидкие капли имеет сферическую форму, объем в пиколитров рассчитывается как (размер)3/1910. 30 иглы диаметром 100 мкм будет извлечь ~ 2 nL в 100 мс.

4. внедрить мух

  1. Пипетка 10 мкл частиц 1,6 мг/мл на небольшой площади парафина.
    1. Забирают жидкость в иглу и смонтировать в сопло инжектора (см. Таблицу материалы).
    2. Анестезировать мух с CO2 и выстроить их в их участком на flypad, с вентральной стороне вверх и руководителями, ориентированные на передней панели. Место флаконов в соответствующих областях на скамейке.
    3. Придать летит в верхней части живота с 5, 100 мс насосы жидкости (~ 10 nL всего).
    4. Передать соответствующие флаконы вводят мух, обратите внимание на время на флаконе. Хранить при температуре 25 ° C.
  2. Загрузить новый игла с 0,4% Трипановый синий раствор.
  3. Установите пневматические форсунки УСЛОВНЫЙ, который позволяет постоянный поток воздуха, чтобы подтолкнуть жидкость из иглы.
  4. Анестезировать мух, после того, как они отдыхали на 30 минут и вводить с Трипановый синий, до тех пор, пока живот полный и растянутый.
    Примечание: При рассмотрении фагосомы созревания с частицами, помечены с рН чувствительных красителя, позволяют мух на отдых за 1 час и не вводите с Трипановый синий до монтажа мух.
  5. Гору летит на скольжениях микроскопа с изоляционной лентой, вентральной стороне вниз. Нажимай на стороне лету крылья и закрепите их на ленту. Кроме того аккуратно вставьте головку в ленту, чтобы обеспечить, что летать не будет двигаться.
  6. Сразу перейти к шагу 5.

5. Визуализация мух

  1. Изображение плавает, один в то время, 25 x или 32 кратном увеличении с помощью микроскопа Перевернутый флуоресценции придает цифровой камеры и компьютера (см. Таблицу материалы). Сосредоточиться на спинной корабля летать с помощью компьютерного программного обеспечения для цифровой камеры.
  2. Запишите время экспозиции и увеличение между экспериментов.
    Примечание: Теряя генотипов является потенциальным источником ошибки при фотографировании несколько штаммов в один присест. Чтобы избежать неправильной мух, запишите номер изображения первого и последнего летать фотографии для каждого генотипа.

6. Количественная оценка и нормализующее флюоресценция

  1. Откройте программное обеспечение и одного изображения за один раз.
    1. Измеряют интенсивность флуоресценции спинной судна. Нарисуйте многоугольник вокруг спинной судна. Выберите меру и записывать интенсивности флуоресценции внутри полигона.
    2. Определите интенсивность флуоресценции фона. Скопируйте первый полигона и переместить его в районе, прилегающем к спинной корабля летать. Выберите меру и запись флуоресценции интенсивности области фона.
    3. Нормализовать флуоресценции спинной судна по флуоресценции фон:
      Дорсальная судно ÷ фон.
    4. Вычислить среднее нормированный интенсивности флуоресценции спинной судна всех мух в штамм.
    5. Повторите эксперимент 2 еще раз.
    6. Использование студентом непарные t-тест для сравнения средняя относительная флуоресценции интенсивности управления мух и проверить летит из трех экспериментов. Рассчитать размер эффекта, используя формулу: Коэна d = (1M - M2) ÷ SDпула, где M1 среднее генотипа 1 и M2 среднее генотипа 2 &
      SD обобщённые =figure-protocol-1
      где SD1 — стандартное отклонение генотипа 1 и SD2 — стандартное отклонение генотипа 2.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Схема анализа в естественных условиях фагоцитоза, с использованием меченных флуоресцеин частиц показан на рисунке 1A. Мухи вентральной боковых вниз на куском изоленты и первых двух сегментов живота, где находится спинной судно, ясно видны (рис. 1B). Основные источники экспериментальной ошибки возникают на месте инъекции и визуализации шаги процедуры (рис. 1 c). С помощью той же иглой впрыснуть нескол...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Коммерчески доступных, дневно обозначенные частиц используются для оценки фагоцитоза в целом (0,2 мкм карбоксилат модифицированные микросферы) или фагоцитоза микробов (дневно меченых тепло - или химически убил бактерий или дрожжи). Чтобы оценить фагосомы созревания, исследователи можно выбрать частицы с рН чувствительных краска, которая флуоресцирует когда рН снижается от нейтральных к кислой, как фаголизосом. Кроме того изучить первоначальные шаги фагоцитоза, признание возбудителя и поглощения, исследовател...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Авторы благодарят доктор Бет Гонсалес и д-р Aprajita Garg за поддержку в проведении экспериментов в естественных условиях фагоцитоза. NSF UMD заранее Грант Seed и UMD NIH T32 учебных грантов, ячейки и молекулярной биологии (CMB) хост-возбудитель взаимодействий (HPI), финансирование этой работы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
0,2μ m Красная флуоресцентная карбоксилатная модифицированная флуосфераInvitrogenF8810Флуоресцентно меченые латексные шарики для проверки общей фагоцитарной способности фагоцитов. (~580/~605 нм) Введите разведение 1:20 в PBS с 5% красителем.
5430-10 PicoNozzle KitWorld Precision Instruments5430-10Держатель для пипетки 1,0 мм
E. coli (штамм K-12) BioParticles, Alexa Fluor 488 конъюгатInvitrogenE13231Убитый E. coli помеченный Alexa Fluor 488. Используйте для проверки распознавания фагоцитов и поглощения грамотрицательных бактерий. (~495/~519 нм)
E. coli (штамм K-12) Биочастицы, конъюгат Alexa Fluor 594InvitrogenE23370Убитый E. coli меченый Alexa Fluor 594. Используйте для проверки распознавания фагоцитов и поглощения грамотрицательных бактерий. (~590/~617 нм)
E. coli (штамм K-12) Биочастицы, конъюгат флуоресцеинаInvitrogenE2861Убитый E. coli меченый FITC (флуоресцеином). Используйте для проверки распознавания фагоцитов и поглощения грамотрицательных бактерий. (~494/~518 нм)
E. coli (штамм K-12) Биочастицы, конъюгат Texas RedInvitrogenE2863Убитый E. coli меченый Texas Red. Используйте для проверки распознавания фагоцитов и поглощения грамотрицательных бактерий. (~595/~615 нм)
E. coli (штамм K-12) Биочастицы, конъюгат Texas RedInvitrogenE2863Убитый E. coli меченый Texas Red. Используйте для проверки распознавания фагоцитов и поглощения грамотрицательных бактерий. (~595/~615 нм)
Игольчатый пипетка PullerDavid Kopf InstrumentsModel 725
pHrodo Red E. coli BioParticles Конъюгат для фагоцитозаInvitrogenp35361убит E. coli меченый pHrodo Red. Используется для проверки распознавания фагоцитов, поглощения и созревания фагосом грамотрицательных бактерий. (~560/~585 нм). Не нужно гасить Trypan Blue.
pHrodo Red S. aureus BioParticles Конъюгат для фагоцитозаInvitrogenA10010Убитый S. aureus меченый pHrodo Red. Используется для проверки распознавания фагоцитов, поглощения и созревания фагосом грампозитивных бактерий. (~560/~585 нм). Не нужно гасить Trypan Blue.
Пневматический PicoPump PV820World Precision InstrumentsSYS-PV820Пневматический PicoPump PV820 компании World Precision Instruments использует перепад давления для удержания жидкости в стеклянной игле между инъекциями. Пользователь вручную контролирует короткие всплески давления газа для вытеснения жидкости – Что позволяет выдавать субнанолитровые объемы. Количество доставляемой жидкости зависит от двух основных переменных – Размер отверстия стеклянной иглы и количество времени, в течение которого применяется давление впрыска. установите прибор на 100 мс» ПО ВРЕМЕНИ» режим.
S. aureus (Древесный штамм без белка А) Биочастицы, конъюгат Alexa Fluor 488InvitrogenS23371Убитый S. aureus меченый Alexa Fluor 488. Используйте для проверки распознавания фагоцитов и поглощения грамположительных бактерий. (~495/~519 нм)
S. aureus (Древесный штамм без белка А) Биочастицы, конъюгат Alexa Fluor 594InvitrogenS23372Убитый S. aureus меченый Alexa Fluor 594. Используйте для проверки распознавания фагоцитов и поглощения грамположительных бактерий. (~590/~617 нм)
S. aureus (Древесный штамм без белка А) Биочастицы, конъюгат флуоресцеинаInvitrogenE2851Убитый S. aureus меченный FITC (флуоресцеином). Используйте для проверки распознавания фагоцитов и поглощения грамположительных бактерий. (~494/~518 нм)
Тонкостенные стеклянные капиллярыWorld Precision InstrumentsTW100F-3иглы для инъекций. OD = 1,0 мм
раствор трипанового синего (0,4%)SigmaT8154Используется для гашения внеклеточной флуоресценции частиц, помеченных флуоресцеином, Alexa Fluor или Texas Red.
Микроскоп ZEISS SteREO (Discovery.V8)ZeissSteREO Discovery.V8Инвертированный флуоресцентный микроскоп для визуализации мух. Для фотосъемки используйте цифровую камеру (например, камеру AxioCam HC) и сопутствующее программное обеспечение (например, программное обеспечение AxioVision 4.7).
Биочастицы Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae), конъюгат Alexa Fluor 488InvitrogenZ23373Убитый, меченный Alexa Fluor 488. Используйте для проверки распознавания фагоцитов и усвоения дрожжей. (~495/~519 нм)
Зимозан А (Saccharomyces cerevisiae) Биочастицы, конъюгат Alexa Fluor 594InvitrogenZ23374убит меченым Alexa Fluor 594. Используйте для проверки распознавания фагоцитов и усвоения дрожжей. (~590/~617 нм)
Зимозан А (Saccharomyces cerevisiae) Биочастицы, конъюгат флуоресцеинаInvitrogenZ2841убит меченым FITC (флуоресцеином). Используйте для проверки распознавания фагоцитов и усвоения дрожжей. (~494/~518 нм)
Биочастицы Zymosan A (Saccharomyces cerevisiae), Texas RedInvitrogenZ2843Убитые меченые Texas Red. Используйте для проверки распознавания фагоцитов и усвоения дрожжей. (~595/~615 нм)

Ссылки

  1. Akira, S., Uematsu, S., Takeuchi, O. Pathogen recognition and innate immunity. Cell. 124 (4), 783-801 (2006).
  2. Kim, D. Studying host-pathogen interactions and innate immunity in Caenorhabditis elegans. Disease Models & Mechanisms. 1 (4-5), 205-208 (2008).
  3. Lemaitre, B., Hoffmann, J. The host defense of Drosophila melanogaster. Annual Review Immunology. 25, 697-743 (2007).
  4. Wu, L. P., Choe, K. M., Lu, Y., Anderson, K. V. Drosophila Immunity: Genes on the Third Chromosome Required for the Response to Bacterial Infection. Genetics. 159 (1), 189-199 (2001).
  5. De Gregorio, E., Spellman, P. T., Tzou, P., Rubin, G. M., Lemaitre, B. The Toll and Imd pathways are the major regulators of the immune response in Drosophila. EMBO Journal. 21 (11), 2568-2579 (2002).
  6. Michel, T., Reichhart, J. M., Hoffmann, J. A., Royet, J. Drosophila Toll is activated by Gram-positive bacteria through a circulating peptidoglycan recognition protein. Nature. 414 (6865), 756-759 (2001).
  7. Choe, K. M., Werner, T., Stoven, S., Hultmark, D., Anderson, K. V. Requirement for a peptidoglycan recognition protein (PGRP) in Relish activation and antibacterial immune responses in Drosophila. Science. 296 (5566), 359-362 (2002).
  8. Wu, J., Randle, K. E., Wu, L. P. ird1 is a Vps15 homologue important for antibacterial immune responses in Drosophila. Cellular Microbiology. 9 (4), 1073-1085 (2007).
  9. Lemaitre, B., Nicolas, E., Michaut, L., Reichhart, J. M., Hoffmann, J. A. The dorsoventral regulatory gene cassette spatzle/Toll/cactus controls the potent antifungal response in Drosophila adults. Cell. 86 (6), 973-983 (1996).
  10. Zambon, R. A., Nandakumar, M., Vakharia, V. N., Wu, L. P. The Toll pathway is important for an antiviral response in Drosophila. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 102 (20), 7257-7262 (2005).
  11. Lemaitre, B., et al. A recessive mutation, immune deficiency (imd), defines two distinct control pathways in the Drosophila host defense. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 92 (21), 9465-9469 (1995).
  12. Leulier, F., Rodriguez, A., Khush, R. S., Abrams, J. M., Lemaitre, B. The Drosophila caspase Dredd is required to resist gram-negative bacterial infection. EMBO Reports. 1 (4), 353-358 (2000).
  13. Meister, M., Lagueux, M. Drosophilablood cells. Cellular Microbiology. 5 (9), 573-580 (2003).
  14. Flannagan, R. S., Jaumouille, V., Grinstein, S. The cell biology of phagocytosis. Annual Review Pathology. 7, 61-98 (2012).
  15. Anderson, R. A., Sando, G. N. Cloning and expression of cDNA encoding human lysosomal acid lipase/cholesteryl ester hydrolase. Similarities to gastric and lingual lipases. Journal of Biological Chemistry. 266 (33), 22479-22484 (1991).
  16. Ross, G. D., Reed, W., Dalzell, J. G., Becker, S. E., Hogg, N. Macrophage cytoskeleton association with CR3 and CR4 regulates receptor mobility and phagocytosis of iC3b-opsonized erythrocytes. Journal of Leukocyte Biology. 51 (2), 109-117 (1992).
  17. Elrod-Erickson, M., Mishra, S., Schneider, D. S. Interactions between the cellular and humoral immune responses in Drosophila. Current Biology. 10, 781-784 (2000).
  18. Ramet, M., Pearson, A. M., Manfruelli, P., Li, X., Koziel, H., Gobel, V. Drosophila Scavenger Receptor CI Is a Pattern Recognition Receptor for Bacteria. Immunity. 15 (6), 1027-1038 (2001).
  19. Ramet, M., Manfruelli, P., Pearson, A. M., Mathey-Prevot, B., Ezekowitz, R. A. Functional genomic analysis of phagocytosis and identification of a Drosophila receptor for E. coli. Nature. 416 (6881), 644-648 (2002).
  20. Philips, J. A., Rubin, E. J., Perrimon, N. Drosophila RNAi screen reveals CD36 family member required for mycobacterial infection. Science. 309, 1251-1253 (2005).
  21. Agaisse, H., Burrack, L. S., Philips, J. A., Rubin, E. J., Perrimon, N., Higgins, D. E. Genome-wide RNAi screen for host factors required for intracellular bacterial infection. Science. 309 (5738), 1248-1251 (2005).
  22. Stuart, L. M., et al. Response to Staphylococcus aureus requires CD36-mediated phagocytosis triggered by the COOH-terminal cytoplasmic domain. Journal of Cell Biology. 170 (3), 477-485 (2005).
  23. Stroschein-Stevenson, S. L., Foley, E., O’Farrell, P. H., Johnson, A. D. Identification of Drosophila gene products required for phagocytosis of Candida albicans. PLoS Biology. 4 (1), e4(2006).
  24. Kocks, C., et al. Eater, a transmembrane protein mediating phagocytosis of bacterial pathogens in Drosophila. Cell. 123 (2), 335-346 (2005).
  25. Nehme, N. T., et al. Relative roles of the cellular and humoral responses in the Drosophila host defense against three gram-positive bacterial infections. PLoS One. 6 (3), e14743(2011).
  26. Garver, L. S., Wu, J., Wu, L. P. The peptidoglycan recognition protein PGRP-SC1a is essential for Toll signaling and phagocytosis of Staphylococcus aureus in Drosophila. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 103 (3), 660-665 (2006).
  27. Garg, A., Wu, L. P. Drosophila Rab14 mediates phagocytosis in the immune response to Staphylococcus aureus. Cellular Microbiology. 16 (2), 296-310 (2014).
  28. Gonzalez, E. A., Garg, A., Tang, J., Nazario-Toole, A. E., Wu, L. P. A glutamate-dependent redox system in blood cells is integral for phagocytosis in Drosophila melanogaster. Current Biology. 23 (22), 2319-2324 (2013).
  29. Nazario-Toole, A. E., Robalino, J., Okrah, K., Corrada-Bravo, H., Mount, S. M., Wu, L. P. The Splicing Factor RNA-Binding Fox Protein 1 Mediates the Cellular Immune Response in Drosophila melanogaster. Journal of Immunology (Baltimore, Md: 1950). 201 (4), 1154-1164 (2018).
  30. Guille, M. Molecular Methods in Developmental Biology: Xenopus and Zebrafish. , Springer Science & Business Media. (1999).
  31. Koundakjian, E. J., Cowan, D. M., Hardy, R. W., Becker, A. H. The Zuker collection: a resource for the analysis of autosomal gene function in Drosophila melanogaster. Genetics. 167 (1), 203-206 (2004).
  32. Horn, L., Leips, J., Starz-Gaiano, M. Phagocytic ability declines with age in adult Drosophila hemocytes. Aging Cell. 13 (4), 719-728 (2014).
  33. Brennan, C. A., Delaney, J. R., Schneider, D. S., Anderson, K. V. Psidin is required in Drosophila blood cells for both phagocytic degradation and immune activation of the fat body. Current Biology. 17 (1), 67-72 (2007).
  34. Akbar, M. A., Tracy, C., Kahr, W. H., Kramer, H. The full-of-bacteria gene is required for phagosome maturation during immune defense in Drosophila. Journal of Cell Biology. 192 (3), 383-390 (2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Drosophilain vivo
Оценка клеточный иммунный ответ плодовой мушки Drosophila melanogaster, используя Assay фагоцитоза в естественных условиях
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.