Методическая статья

Методы бешенства некропсии у больших и малых животных

DOI:

10.3791/59574

⸱

30 июля 2019 г.

 ,  ,  ,  , 
1Rabies Laboratory, Wadsworth Center, New York State Department of Health

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Целью этого протокола является демонстрация безопасных методов некропсии у мелких и крупных животных для получения удовлетворительных образцов тканей для тестирования на бешенство.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Лаборатория по борьбе с бешенством штата Нью-йорк (NYSDOH) ежегодно получает от 6000 до 9000 образцов и проводит тестирование на бешенство для всего штата, за исключением Нью-йорка. Лаборатория бешенства некропсии различных животных, начиная от летучих мышей до bovids. Большинство из этих образцов животных, демонстрирующих неврологические признаки, однако, менее 10% на самом деле положительный результат теста на бешенство; подразумевая травмы, поражения или других инфекционных агентов в качестве причины этих симптомов. Из-за риска аэрозольных недиагностированных инфекционных агентов, Лаборатория бешенства не использует электроинструменты или пилы. Для животных, чьи черепа непроницаемы ножницами, будут представлены три методы некропсии. Лаборатория внедрила эти методы для уменьшения потенциального воздействия инфекционных агентов, устранения ненужных манипуляций с образцом и сокращения времени обработки. Преимущества предпочтительной техники, противоположной другой, зависят от обученной индивидуальной обработки образца.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Работа на полу некропсии в лаборатории бешенства по своей сути опасна. Временами, образцы прибывают со встроенными иголками дикобраза, посторонними предметами, включая стрелы/пули/гранулы или открытые костные осколки, которые могут проникать в защитную обертку для доставки. Неправильная упаковка может привести к утечке, подвергая опасности людей, которые распаковывают образцы. В дополнение к физическим травмам, специалисты по некропсии рискуют подвергаться воздействию неизвестных зоонозных инфекционных агентов из ЦНС и жидкостей организма образцов. Кроме того, эктопаразиты, переносимые образцом, могут передавать другие зоонозные заболевания, так как блохи и клещи обычно встречаются на представленных животных. В зависимости от географического положения и видов, связанных с болезнями подвергаются варьироваться. Арбовирусы, такие как вирус восточного конского энцефалита (EEEV) или вирус Западного Нила (WNV), клещевые заболевания, включая болезнь Лайма или туляремию, бактерии, вызывающие лихорадку или туберкулез, и инфекционные прионы называют небольшое количество возможных опасностей1 , 2 , 3.

Целью этих методов является демонстрация безопасных и эффективных методов некропсии с использованием инструментов, которые сводят к минимуму потенциал для аэрозолизации в отличие от электроинструментов или пил4,5. Как правило, некропсия мелких животных в лаборатории бешенства требует отрезать черепные мышцы и с помощью молотка и стамески, чтобы открыть каудальной царской части кальвария6. Удаление этой области кальвария подвергает задний мозг, в том числе весь мозжечок и черепного ствола мозга. Модифицированные методы некропсии могут быть выполнены на брюшной части черепа, избегая больших мышц черепа и более толстых областей черепа. Однако эти модифицированные методы некропсии возможны только тогда, когда образец без шейных позвонков.

Аналогичным образом, ткани мозга у крупных животных могут быть удалены путем разделения черепных мышц и открытия caudal царской части черепа7. Значительные усилия, необходимые для разоблачения мозжечка и ствола мозга, как черепа крупных животных, как правило, толще. Чтобы не проникать в череп, голова большого животного расположена таким образом, что вентро-каудаальная часть черепа обращена к технику. Используя модифицированные инструменты, мозжечок и ствол мозга удаляются через foramen magnum. Это похоже на метод приобретения образцов, рекомендованный Справочной лабораторией Европейского союза TSE для трансмиссивной спонгиформной энцефалопатии (TSE) исследований8. Черепные позвонки должны быть удалены заранее, чтобы обеспечить доступ к foramen magnum.

Применение этих методов полезно для надлежащим образом обученных техников в лабораториях по борьбе с бешенством. Как бешенство лаборатория получает образцы различных размеров, от несовершеннолетних летучих мышей для взрослых лошадей проекта9, техник имеет несколько методов на выбор на основе индивидуальных обстоятельств. Метод, продемонстрированный для большого животного, также подходит для ветеринаров, которые выполняют некропсии в полевых условиях, так как доставка всей большой головке животного для тестирования на бешенство является громоздким и дорогостоящим. Внедрение любого из этих методов повысит безопасность за счет уменьшения потенциала производства аэрозолей, сокращения обработки образца и экономии времени на обработку. Однако, поскольку поле не имеет тех же преимуществ, что и лабораторное оборудование для тестирования на бешенство, важно, чтобы любые изменения, внесенные в эти процедуры, были направлены на безопасность, особенно на использование средств индивидуальной защиты (СИЗ).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все описанные методы были одобрены Комитетом по институциональному уходу и использованию животных Центра Уодсворта (IACUC).

1. Подготовка

  1. Дон СИЗ, при минимальной защите глаз (очки или лицезащитный щит), хирургическая или N-95 маска, и нелатексные перчатки.
  2. Подготовка рабочей области, в идеале био-безопасности шкаф (BSC), с одноразовым покрытием поверхности работы (например, крафт бумаги или абсорбирующими прокладками) и чистых инструментов некропсии(рисунок 1).
  3. Поместите образец на рабочую поверхность и используйте приборы для его оценки состояния образца, включая доказательства разложения, повреждения черепа, потенциальных опасностей (например, дикобразные иглы, скальпельные лезвия) и качество обезглавливания.

2. Метод Вентрала

ПРИМЕЧАНИЕ: Когда образец должным образом обезглавлен на челюсти линии, foramen магнум и затылочной кондиле будет подвергаться. Вентральный метод менее сложен для извлечения мозжечка и ствола мозга.

  1. Расположите образец с брюшной стороной вверх и носом направляя distally к задней части BSC.
  2. Держите ортопедический молоток/молоток в правой руке (если правша) и в то же самое время держите долото членов совета в левой руке.
  3. Расположите стамески под углом 45 градусов с угловой точкой стамески, направляющей между правой стороной височной кости и затылочной костью, что делает отверстие "V".
  4. Удар верхней части долото с молотком, пока две кости отдельно. Сделайте разрез рядом с основойфеноидной кости.
  5. Повторите на левой стороне височной кости / затылочной кости(рисунок 2A).
  6. Согните область черепа "V" вниз с долотом. Разоблачить всю ромбенцефалон области мозга (мозжечок и ствол мозга)(рисунок 2B).
  7. Scoop из ствола мозга и мозжечка с ножницами и щипцы. Удалите все оставшиеся части из черепа, если ствол мозга и мозжечок не вышли в единой части.

3. Дорсальный метод

ПРИМЕЧАНИЕ: Если образец имеет плохое обезглавливание (foramen magnum не видно) и шея не может быть легко удалена во время некропсии или если повреждение мозжечка подозревается, следует использовать метод доза.

  1. Позиция образца дорсально с носом направляя дистально к задней части BSC.
  2. Используя опухолевую тетакулу, схватите левую височную мышцу зубами тенакулы и зафиксируйте, сжимая ручку.
  3. Разрежьте височной мышцы до кости острым резным ножом.
  4. Поверните образец на 180 градусов с помощью тенакулы и ножа (не руки) и повторите процесс на противоположной височной мышце. Разоблачить череп.
  5. Позиция долото под углом 45 "с угловой точкой долото на центре черепа на стыке теменной и интрафариетной кости.
  6. Удар верхней части долото с молотком, пока горизонтальное отверстие производится на верхней половине черепа на теменной кости.
  7. Поверните образец на 180 градусов и повторите процесс на противоположной стороне.
  8. Вставьте точку долото в конце разреза 1(рисунок 3A)и на 90 "горизонтального отверстия. Забастовка молотком до тех пор, пока отверстие не достигнет затылочной кости (примерно 10 см в зависимости от размера образца).
  9. Сверните образец и повторите на противоположной стороне в конце разреза 2.
    ПРИМЕЧАНИЕ: С образцом спинной и нос расположен в сторону задней части BSC, отверстия в черепе напоминают перевернутый "U".
  10. Вставьте зубы тенакулы в череп на дне "U" и подглядывать к себе. Выставить каудальный конец мозга и мозжечка(рисунок 3B).
  11. Используйте ножницы в качестве совок и вырвать весь мозжечок из нутри.
  12. Используйте щипцы ткани, чтобы дразнить из мозга вытекают из предыхла.

4. Большой метод животного

  1. Расположите образец так, чтобы дорнятельная часть черепа соприкасалсяа с поверхностью некропсии с каудальной частью черепа и форамином магнумом, обращенным к технику.
  2. Вставьте модифицированный нож стилет в foramen magnum между спинным мозгом и спинного мозга, насколько это возможно.
  3. Оценка вокруг спинного мозга, чтобы отделить мозжечок и мозг вытекают из спинного обезличения. После того, как нож вставляется через foramen magnum, осторожно угол нож следовать вдоль черепа как можно больше.
  4. Вставьте шпатель химии или тонкую, длинную ложку в пространство между нервной ткани и спинного обезвреживания.
  5. Зонд вокруг спинного мозга и мозжечка, чтобы обеспечить связь с спинной обезлищ, были разорваны.
  6. Держите ствол мозга с помощью щипц. С другой стороны, заранее ложку rostrally затем дорсально зачерпнуть мозжечок. Одновременно отойти на ствол мозга с щипками и вычерпывать мозжечок с помощью ложки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Это может занять более одной попытки восстановить адекватный мозжечок для тестирования на бешенство.

5. Пост некропсия

  1. Утилизировать все одноразовые материалы (перчатки, прокладки, покрытия рабочей зоны) и неиспользованные ткани в биоопасных отходах.
  2. Чистота и дезинфекция всех инструментов с помощью доступных методов (например, промышленная посудомоечной ублюдок, автоклав, химический дезинфицирующее средство, кипячение).
  3. Чистота и дезинфекция всех рабочих поверхностей с 20% отбеливателя и / или 70% этанола.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все наземные образцы, представленные с черепами в период с 31 января 2019 года по 28 февраля 2019 года, имели информацию о наличии шеи и методе собираемого некропсии. За это время, 170 голов были некропсии с 18 видов представлены. 52% (89/170) были должным образом обезглавлены. Остальные имели по крайней мере один позвонок прилагается в том числе три всего тела образцов. Вентральный метод был использован 75% (128/170) времени, из них, шеи присутствовали на 49. Specimens, представленные с ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Specimens, представленные для некропсии бешенства часто имеют историю клинических признаков, совместимых с неврологическим заболеванием. Наличие клинических заболеваний может быть связано с различными нарушениями, в том числе зоонозными заболеваниями, повышая риск для сотрудников лаборатории приобретенной инфекции. Чтобы уменьшить эти риски, были внедрены методы, которые уменьшают обработку и манипуляции образцами.

Продемонстрированные методы представляют собой событие некропсии для удаления ж...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы признательны Центру Уодсвортского департамента здравоохранения штата Нью-йорк за поддержку этого проекта. Мы также хотели бы отметить поддержку Эми Уиллси и Фрэнк Айсделл Департамента здравоохранения Уодсворт центр, и LL ранчо, Altamont, NY.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Химическая ложкаЛюбая
Изогнутые, острые-тупые ножницы для майонезаSklar14-2055Sklar Операционные ножницы 5-1/2 дюйма Премиум ИЛИ Нержавеющая сталь Перчатая ручка Изогнутая Острая/Тупой
Большой острый нож для разделки ресторанного качестваDexterP948488" Зубчатый универсальный нож, белая ручка
Блокирующий опухоль-тенакулаАлмаз Научный и SurgicalsN/ACzerny Tenaculum
Leverp Модифицированный нож для стилета (лезвие длиной 6,5 дюйма, нож для разделки, отшлифованный до 0,5 дюйма шириной)DexterP94848Модифицированный 8-дюймовый зубчатый универсальный нож, белая ручка
Ортопедический молотокмолоток MortechN/AПосмертный молоток с крючком
Острый советмен ортопедическое костяное долотоShandon60-5Лезвие долота советника: 2 дюйма x 2,25 дюйма стандарта 7 дюймов
Заточенная столовая ложка или другая ложка с длинной ручкойЛюбые
щипцы для перевязочной ткани с гладким наконечником без зубовShandon63-03Щипцы для большого пальца Shandon Broad Point Labing Щипцы для большого пальца
Неопудренные нелатексные перчаткиЛюбые
защитные очки, очки или лицевой щитокЛюбой
Хирургическая маска или маска N-95Любая
крафт-бумага, пергаментная бумага, абсорбирующая прокладка и т.дЛюбая
.

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). West Nile virus activity - United States, 2009. MMWR Morbidity and Mortality Weekly Report. 59 (25), 769-772 (2010).
  2. McDaniel, C. J., Cardwell, D. M., Moeller, R. B. Jr, Gray, G. C. Humans and cattle: A review of bovine zoonoses. Vector Borne and Zoonotic Diseases. 14 (1), 1-19 (2014).
  3. Spickler, A. R. Zoonotic diseases. Merck Veterinary Manual. , Available from: https://www.merckvetmanual.com/public-health/zoonoses/zoonotic-diseases (2019).
  4. Wenner, L., Pauli, U., Summermatter, K., Gantenbein, H., Vidondo, B., Posthaus, H. Aerosol generation during bone-sawing procedures in veterinary autopsies. Veterinary Pathology. 54 (3), 425-436 (2017).
  5. Green, F. H. Y., Yoshida, K. Characteristics of aerosols generated during autopsy procedures and their potential role as carriers of infectious agents. Applied Occupational and Environmental Hygiene. 5 (12), 853-858 (1990).
  6. Barrat, J. Simple technique for the collection and shipment of brain specimens for rabies diagnosis. Laboratory techniques in Rabies 4th Edition. Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Koprowski, H. , World Health Organization. 425-427 (1996).
  7. Ness, S. L., Bain, F. T. How to perform an equine field necropsy. American Association of Equine Practitioners. 55, 313-316 (2009).
  8. Animal & Plant Health Agency. Sample requirements for TSE testing and confirmation – EURL guidance. , Available from: https://protect2.fireeye.com/url?k=09f00f8d-55d40ec4-09f2f6b8-0cc47aa8d394-3f805f032cc98df8&u=https://science.vla.gov.uk/tse-lab-net/documents/tse-oie-rl-samp.pdf (2019).
  9. New York State Department of Health, Wadsworth Center. Rabies reports. , Available from: https://www.wadsworth.org/programs/id/rabies/reports (2019).
  10. CDC. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States. , Available from: https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf (2019).
  11. Miller, L. D., Davis, A. J., Jenny, A. L., Fekadu, M., Whitfield, S. G. Surveillance for lesions of bovine spongiform encephalopathy in U.S. cattle. Developments in Biological Standardizations. 80, 119-121 (1993).
  12. Andrews, C., Gerdin, J., Patterson, J., Buckles, E. L., Fitzgerald, S. D. Eastern equine encephalitis in puppies in Michigan and New York states. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 30 (4), 633-636 (2018).
  13. Appler, K., Brunt, S., Jarvis, J. A., Davis, A. D. Clarifying indeterminate results on the rabies direct fluorescent antibody test using real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction. Public Health Reports. 134 (1), 57-62 (2019).
  14. Chapter 7. Brain removal. Laboratory techniques in Rabies 5th Edition. Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. , World Health Organization. 67-72 (2018).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи