Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Культивирование морской пелагической туникате Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) для экспериментальных исследований

12.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/59832

⸱

9 августа 2019 г.

 ,  , 
1Skidaway Institute of Oceanography, University of Georgia, 2Hampton University

В этой статье

Краткое содержание

Долиолиды, в том числе вид Dolioletta gegenbauri,являются небольшими желатиновым морским зоопланктоном экологического значения, встречаемым на продуктивных субконтинентальных шельфовых системах по всему миру. Трудность культивирования этих деликатных организмов ограничивает их исследование. В этом исследовании мы описываем подходы к выращиванию для сбора, выращивания и поддержания долиолетта гегенбаури.

Аннотация

Гелатиновские зоопланктоны играют решающую роль в океанских экосистемах. Тем не менее, как правило, трудно исследовать их физиологии, роста, плодовитости и трофических взаимодействий в первую очередь из-за методологических проблем, в том числе способность к их культуре. Это особенно верно для долиолида, Долиолетта гегенбаури. D. gegenbauri обычно встречается в продуктивных субтропических континентальных системах шельфа во всем мире, часто при концентрациях цветения, способных потреблять большую часть суточной первичной продукции. В этом исследовании мы описываем подходы к выращиванию для сбора, выращивания и поддержания D. gegenbauri с целью проведения лабораторных исследований. D. gegenbauri и другие виды doliolid могут быть захвачены жить с помощью косо буксусированных конических 202 мкм сетки планктона сетей с дрейфующего судна. Культуры наиболее надежно устанавливаются, когда температура воды ниже 21 градусов по Цельсию и начинается с незрелых гонозооидов, созревания phorozooids, и большие медсестры. Культуры могут поддерживаться в округлых сосудах культуры на медленно вращающемся колесе планктона и поддерживаться на диете культивированных водорослей в естественной морской воде на протяжении многих поколений. В дополнение к способности устанавливать лабораторные культуры D. gegenbauri, мы демонстрируем, что состояние сбора, концентрация водорослей, температура и воздействие естественно обусловленной морской воды имеют решающее значение для культуры создание, рост, выживание и размножение D. gegenbauri.

Введение

Зоопланктон приходится на крупнейших животных биомассы в океане, являются ключевыми компонентами в морских пищевых сетей, и играют важную роль в океане биогеохимических циклов1,2. Зоопланктон, хотя и состоит из огромного разнообразия организмов, можно сильно различать на две категории: желатиновые и нежелатинские с несколькими промежуточными таксонами3,4. По сравнению с нежелатиновым зоопланктоном, желатиновый зоопланктон особеннотрудно изучать из-за их сложной истории жизни 5, и их тонкие ткани легко повреждаются во время захвата и обработки. Gelatinous зоопланктона видов, поэтому, как известно, трудно культуры в лаборатории и в целом менее изучены по сравнению с не-желатиновых видов6.

Среди желатиновых групп зоопланктона, один обильные и экологического значения в мировом океане являются thaliaceans. Талицеаны являются классом пелагических туникатов, которые включают в себя заказы Салпида, Пиросомида, и Долиолида7. Долилида, которую в совокупности называют долиолидами, представляют собой небольшие бочкообразные пелагические организмы, которые могут достигать высокого изобилия в продуктивных неритических регионах субтропических океанов. Долиолиды являются одними из самых распространенных из всех групп зоопланктона4,8. В качестве подвесных фидеров, долиолиды собирают частицы пищи из столбцаводы, создавая фильтровальных токов и захватывая их на слизистых сетях 9. Таксономически, долиолиды классифицируются в phylum Urochordata10. Предки хордатов, и в дополнение к их экологической значимости в качестве ключевых компонентов морских пелагических систем, thaliaceans имеют значение для понимания истоков колониальной истории жизни10,11 и эволюции из хордатов5,7,10,12,13,14.

История жизни долиолидов сложна и вносит свой вклад в трудности в культивирования и поддержания их в течение их жизненного цикла. Обзор полиолид жизненного цикла и анатомии можно найти в Godeaux и др.15. Это долиолидный жизненный цикл, который включает в себя обязательное чередование между сексуальными и бесполыми этапами истории жизни, представлен на рисунке 1. Яйца и сперматозоиды производятся гермафродическими гонозооидами, единственным одиночным этапом жизненного цикла. Gonozooids релиз спермы в колонку воды и яйца внутренне оплодотворены и выпущены развиваться в личинки. Личинки люк и метаморфозы в oozooids, которые могут достигать 1-2 мм. Предполагая благоприятные условия окружающей среды и питания, ooooids стать ранними медсестрами в течение 1-2 дней при 20 градусах Цельсия и инициировать колониальные этапы жизненного цикла. Oozooids бесполым веществом производят почки на их вентральном толоне. Эти почки оставляют столоон и мигрируют в дорсаловый кадофор, где они выстраиваются в три парных ряда. Центральные двойные ряды становят phorozooids и внешние 2 двойных ряда будут trophozooids. Последние обеспечивают питанием как медсестры, так и phorozooids16,17. Трофозуиды снабжают медсестру питанием, так как она теряет все внутренние органы. По мере увеличения численности трофозуидов размер медсестры может достигать 15 мм в лаборатории. По мере того как phorozooids растут, они все больше и больше гладают добычу планктона и достигают й 1.5 мм в размере до быть выпущенным как индивидуалы17. Одна медсестра может выпустить 100 phorozooids в течение своей жизни18. После того, как phorozooids высвобождаются из кадофора, они продолжают расти и являются вторым колониальным этапом жизненного цикла. Как только они достигают 5 мм в размерах, каждый phorozooid развивается кластер gonozooids на их брюшной peduncle. Эти гонозуиды могут глотать частицы, когда они достигают 1 мм в длину. После того, как гонозовиды достигли от 2 до 3 мм в размерах, они высвобождаются из phorozooid и становятся единственной одиночной стадией жизненного цикла. Как только они достигают 6 мм в размерах, gonozooids становятся сексуально зрелыми17. Гонозуиды могут достигать 9 мм и больше в длину. Гонозооиды гермафродические, сперма высвобождается с перерывами, в то время как оплодотворение яйцеклеток происходит внутренне16,17. Когда размер гонозооида составляет 6 мм, он высвобождает до 6 оплодотворенных яйцеклеток. Успешная культивирование требует поддержки конкретных потребностей каждого из этих уникальных этапов истории жизни.

В связи с экологическим и эволюционным значением талицей, в том числе долиолидов, существует необходимость в методах выращивания для продвижения понимания уникальной биологии этого организма, физиологии, экологии и эволюционной истории19 . Долиолиды имеют значительные перспективы в качестве экспериментальных моделей организмов в биологии развития и функциональной геномики, потому что они прозрачны и, вероятно, оптимизированы геномы20,21. Однако отсутствие надежных методов культивирования препятствует их полезности в качестве лабораторных моделей. Хотя несколько лабораторий опубликовали результаты, основанные на культивированных долиолидах, к нашим знаниям подходы к выращиванию и подробные протоколы ранее не публиковались. Основываясь на многолетнем опыте, и проб и ошибок попыток культивирования, цель этого исследования заключается в обзоре опыта и обмена протоколами для сбора и выращивания долиодов, в частности, вид Dolioletta gegenbauri.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Подготовка культивирующих сооружений для выращивания D. gegenbauri

ПРИМЕЧАНИЕ: Все необходимые материалы и оборудование перечислены в таблицематериалов.

  1. Приготовьте 1 M Гидроксид натрия (NaOH), 0.06 MПерманганат калия (KMnO 4) раствор. Чтобы подготовить этот раствор, растворите 400 г NaOH в 10 л деионизированной воды. Добавьте 100 г KMnO4 в раствор NaOH и хорошо перемешайте.
  2. Подготовьте раствор бисульфита натрия0,1 М (NaHSO 3) путем растворения 100 г NaHSO3 на 10 л деионизированной воды и хорошо перемешайте.
    ВНИМАНИЕ: Эти реагенты являются раздражителями, которые могут вызвать проблемы с дыханием при вдыхании. Поместите в хорошо проветриваемую область, такую как дымовой капот. Избегайте контакта с кожей. Носите защитные перчатки, защитную одежду, защиту глаз и защиту лица при обращении.
  3. Перед созданием и воспитанием долилидовых культур в лаборатории очистите и стерилизуют культурные банки.
    1. Промыть 1,9 л и 3,8 л культуры банки по крайней мере 3 раза с деионизированной водой. Дайте крышкам винта высохнуть, так как колпачки не включены в следующие шаги очистки.
    2. Очистите и стерилизуйте 1,9- и 3,8 л стеклянных культуры банки, погрузив их в решение NaOH/KMnO 4. Разрешить банки, чтобы замочить на ночь.
    3. Удалите банки из раствора NaOH/KMnO4 и погрузите банки в раствор натрия (NaHSO3). Разрешить банки, чтобы замочить на ночь.
    4. Удалите банки из раствора NaHSO3 и тщательно промыть деионированной водой. Дайте банкам высохнуть.
  4. Поместите колесо планктона(рисунок 2) в контролируемое температурой пространство (экологическая камера). Уравновесите температуру до 20 градусов по Цельсию. Для более подробного описания пользовательского колеса планктона, пожалуйста, обратитесь к дополнительной рисунок 1.

2. Фитопланктона культуры

  1. Получить водорослей культур из Национального центра морских водорослей и микробиоты (NCMA) или других источников, которые будут использоваться в качестве пищи для D. gegenbauri. Смеси двух видов flagellate, включая Isochrysis galbana (CCMP 1323), Rhodomonas sp (CCMP 740) и небольшой диатом, Thalassiosira weissflogii (CCMP 1051) были получены из NCMA и были использованы в предыдущей лаборатории исследования для задних долиодов успешно17.
  2. Подготовьте L1 и L1-Si рост сми22 в соответствии с рекомендациями NCMA.
  3. Следуйте инструкциям, предоставленным поставщиком для инициирования новых культур водорослей.
  4. Для поддержания фондовых культур, используя строгие методы острого культуры, передача 0,5 мл старой чувствительной культуры до 25 мл свежих носителей роста в стерильных 55 мл стеклянных культурных труб каждые две недели.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Невозможно хранить живые водоросли культур без передачи их регулярно. Если культуры не будут использоваться в течение длительного времени, и не представляется возможным поддерживать культуры в течение периода неиспользования, рекомендуется повторно приобрести эти общие водоросли культур из своих первоначальных источников (например, NCMA).
  5. Подготовьте большие объемы фитопланктона для кормления долиолидами в чистых флягах культуры пластиковой ткани 500 мл, содержащем 200 мл растущих носителей.
    1. Прививать фитопланктон из апорных запасов (4 мл) в 200 мл роста носителей (1:50 разбавления).
    2. Инкубировать при 20 градусах Цельсия при освещении 12:12 ч:темный цикл при прохладном белом освещении 65-85 зЭ/м2. Lay культуры фляги плоские, чтобы максимизировать освещение. Аккуратно вихревой культуры ежедневно.
    3. Определите концентрацию клеток с помощью счетчика частиц или микроскопа для мониторинга роста культур.
      ПРИМЕЧАНИЕ: После 7-10 дней с прививки, флагелировать культуры будет содержать 105-106 клеток / мл и диатома культуры будет содержать 104-105 клеток / мл. Эти концентрации достаточны для поддержания долиолидных культур.
    4. Инициировать новые запасы питания как минимум каждые две недели, чтобы обеспечить достаточное количество водорослей биомассы для поддержки всех культурных мероприятий.

3. Коллекция диких долиолидов и морской воды для культуры

ПРИМЕЧАНИЕ: Обзор подходов к сбору и культивированию изложен на рисунке 3. Описание специализированной коллекции планктона сетки и трески конца приводится в рисунке 4.

  1. Найдите долиолиды, обнаруживая их с помощью либо планктонных сетей, либо в системах визуализации situ23.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Потому что долиолиды редко присутствуют в поверхностных водах и не обнаруживаются с помощью технологии дистанционного зондирования, руководствуясь предварительным знанием условий, благоприятных для долиолидов (см. Обсуждение), наличие долиолидов должно быть определено до отбора проб.
  2. Собирайте богатую частицами морскую воду до сбора живых долиолидов в рамках подготовки к исводу культуры D. gegenbauri.
    1. Развертывание бутылки Niskin установлен на розетку CTD или эквивалентное оборудование для сбора воды из места, где doliolids расположены и из глубины, содержащей самые высокие оценки хлорофилла концентрации оценивается в ситу фторрометрии.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Концентрация хлорофилла используется в качестве индикатора концентрации частиц. На среднеконтинентальном шельфе южной Атлантики (SAB) подповерхностный хлорофилл максимум, как правило, близок к дну, но в других местах его может и не быть.
  3. После того, как долиолиды расположены, восстановить неповрежденные долилид зооиды с помощью специализированных планктона сети и трески конца. Перед развертыванием сети заполните треску морской водой.
    1. С дрейфующего судна опустите и поднимите сетку через водяную колонку, поддерживающую наклон наклона буксировки от 15 до 25 евро и вертикальное развертывание и скорость поиска не более 15 м/мин.
  4. После того, как сеть на борту, аккуратно передать и разделить содержимое трески конца на 3, 5-галлон (No 20 L) пластиковые ведра каждый, содержащий 10 л поверхностной морской воды, собранной с сайта.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Новые пластиковые ведра должны быть обусловлены добавлением морской воды дней до жизни долиолид коллекции. Цель состоит в том, чтобы уменьшить выщелачивание химических веществ из пластика. Если морская вода отсутствует, используйте очищенную (например, Милли) или водопроводную воду, свободную от токсичных загрязняющих веществ, чтобы обусловливать ведра.
  5. Изолятный долиолид зооиды из других планктона.
    1. Небольшими партиями (2 л) перенесите смешанные планктоны из содержимого сетчатого буксира (теперь в 20 л пластиковых ведер) в стеклянный стакан объемом 2 л.
    2. Используя широкорые стеклянные пипетки (8 мм ID x 38 см длиной), тщательно сифон и передачи активно плавание долиолид зооидов из стакана в чистые стеклянные культуры банки, содержащие богатые частицами морской воды, собранные с помощью бутылки Нискин, откуда были долиоиды были Расположен.
    3. Аккуратно отпустите долилидные зооиды под поверхностью морской воды.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Собирать гонозооиды, phorozooids, содержащие прилагается развивающихся gonozooids, и медсестра этапов, содержащих прилагается трофозуиды (Рисунок 1).
  6. После добавления долиолидов, добавьте культуру Rhodomonas sp. к окончательной концентрации 5 х 103 - 104 клеток/мл (50 мл культуры, содержащей 5 х 104 - 1 х 105 клеток/мл в банке 3,8 л). Это необходимо для того, чтобы определить, активно ли дуются ли мелиоиды. Когда долиолины глотают Rhodomonas sp. ., их пищеварительный тракт будет выглядеть красным цветом. Удалите зооиды, которые, как представляется, не кормления.
  7. Чтобы предотвратить doliolids от ловушки на воздушно-водный интерфейс, избежать headspace в культуре банки, полностью заполняя банки с нефильтрованной частицы богатых морской водой и размещение кусок пластиковой пленки над отверстием банку (89 мм в ширину).
    1. Избегайте создания пузырьков воздуха, которые также могут повредить животных. Тщательно винт крышку на банку и осторожно инвертировать банку, чтобы определить, если пузырьки присутствуют. Если пузырьки присутствуют, удалите их.
    2. После того, как банки заполнены, протрите лишнюю воду с внешней стороны банки.
  8. Установите каждую банку на колесо планктона(рисунок 2), поместив банку на вертикальные металлические прутья, покрытые резиновыми трубками, и между зажимом шланга из нержавеющей стали.
    1. Убедитесь, что задняя часть банки мягкая против резиновых труб. Затяните шланг зажим вокруг банки, регулируя винт.
    2. Убедитесь, что банку не движется, как только она надежно закреплена на месте. Разрешить банки вращаться на 0,3 об/ ч, чтобы держать долиолиды в подвеске.
      ВНИМАНИЕ: Важно не затягивать банку, чтобы предотвратить банку от растрескивания.
  9. На корабле, поддерживать культуры судов на колесе планктона на 20 градусов по Цельсию в тусклом свете, пока они не могут быть переданы в лаборатории культуры объекта.
  10. По возвращении в лабораторию перенесите банки с долиолидами в подготовленное культурное учреждение. Маунт банки на колесе планктона (см. шаг 3.8) и позволяют банки продолжать вращаться на 0,3 об/мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Все выращивание долиодов в этом исследовании было проведено при 20 градусах Цельсия.

4. Поддержание культур Ы. Гегенбаури

  1. От корабля до лаборатории, позвольте животным акклиматизироваться в оригинальных банках к лабораторным условиям в течение 3 дней.
    1. Во время акклиматизации используйте широкую стеклянную пипетку для обмена 10% воды с нефильтроченной богатой частицами морской водой из места сбора каждый день в течение 3 дней.
    2. Держите несколько copepods в банке, но удалить все другие зоопланктона, большие фекальные гранулы, и большие агрегированные частицы, которые могут засорить фильтрующий аппарат долиолида (слизистая сеть). Если культура состоит из ранних медсестер, держите одну большую гонозовидную (6 мм) в банке.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Не важно, какие copepod видов включены в культуру, но в этом эксперименте, наиболее распространенных видов, присутствующих, откуда были захвачены долиолиды были использованы.
  2. После периода акклиматизации, передача долиолид зооидов и copepods из оригинальной банки для выращивания, содержащий 80% стеклянного волокна фильтра (GF /F) фильтруется морская вода и 20% морской воды из оригинальной банки. Подготовка фильтрования морской воды путем фильтрации морской воды через GF / F с номинальным размером поры 0,7 мкм фильтровальной бумаги.
  3. Поддерживайте новую культуру, обменивая 10% воды с фильтрованную морскую воду GF/F каждые 3 дня и удаляя агрегаты и фекальные гранулы. Еженедельно переносить животных в новую банку, описанную в шаге 4.2.
  4. Кормите долиолидами, поддерживая концентрации фитопланктона в культурных банках между 40 - 95 мкг C/L.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Эти концентрации имитируют условия окружающей среды, которые, как известно, поддерживают условия цветения для D. gegenbauri17. Смесь водорослей варьируется в зависимости от стадии жизни и количества зооидов в каждой банке. На ранних стадиях жизни добавляйте только смесь 1:1 (по содержанию углерода) из криптомонадных водорослей(Isochrysis galbana и Rhodomonas sp.). Более крупные виды добычи могут легко засорить кормовой аппарат маленьких медсестер и развитие трофозуидов. Добавить диатом Thalassiosira weissflogii в водоросли смеси, а также при равном содержании углерода, при кормлении больших медсестер, phorozooids, и gonozooids.
    1. Мониторинг концентраций водорослей до и после кормления, чтобы руководство решение о том, как часто и сколько водорослей, чтобы добавить к культурам. Используйте счетчик частиц для определения концентрации водорослей, потому что концентрации водорослей в культурных банках относительно разбавлены.
  5. Удалите достаточное количество зооидов для поддержания концентрации водорослей 40 - 95 мкг/л, так что остальные долиоиды будут иметь достаточно пищи, чтобы расти.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Наиболее сложным этапом жизни для успешного поддержания в лабораторных условиях является развитие личинок и oozooid (ранняя медсестра). Во время этой фазы культуры, держать один большой гонозовид (No 6 мм) в дополнение к нескольким copepods в банке с развивающимися личинок и ooooids (20 за 3,8 л банку).
  6. Передача по крайней мере 4 медсестер в новую банку культивирования раз как минимум 8 трофозуидов видны на кадофоре медсестры(рисунок 1B).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Trophozooids удвоится в число каждые 1 - 2 дня при 20 градусах Цельсия. Трофозуиды достаточно велики, чтобы быть видимыми невооруженным глазом.
    1. Удалите двух медсестер, как только медсестры разработают 20 трофозуидов.
    2. Удалите одну медсестру, когда медсестры разовьют 30 трофозуидов на их кадофорах. Разрешить оставшейся медсестре развивать phorozooids на его кадофора.
    3. Удалить медсестру, как только медсестра выпускает до 30 phorozooids.
  7. Уменьшите количество животных в банке, как только phorozooids достичь 3 мм в размерах.
    1. Удалите все, кроме четырех phorozooids, когда phorozooids становятся больше (5 мм) и разработали гонозуидных кластеров.
    2. Уменьшите культуру до двух phorozooids, когда количество скоплений gonozooids увеличивается в размерах и начинают кормить.
    3. Удалите phorozooids раз phorozooids выпустить до 30 гонозуидов.
  8. Уменьшите количество гонозуидов с 30 зооидов до 2 за банку. Разрешить оплодотворенные яйца, которые будут выпущены в банку.
    1. Удалите один gonozooid оставив один gonozooid в банке, как только oozooids развиваться.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Отбрасываемые медсестры, phorozooids, и gonozooids могут быть использованы для семян дополнительных культур и для проведения дальнейших экспериментов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Следуя описанным процедурам сбора и культивирования долиолида, D. gegenbauri, изложенные на рисунке 3, можно поддерживать культуру D. gegenbauri на протяжении всей своей сложной истории жизни (Рисунок 1) и поддерживать его в течение многих поколений. Хотя культивирование D. gegenbauri описано здесь, эти процедуры также должны быть актуальны для выращивания других видов долиолидов.

Захват здоровых и неповрежд...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

За последние несколько десятилетий был создан потенциал в области культуры долиолидов, который использовался для поддержки научных исследований в нескольких областях. Экспериментальные исследования в наших лабораториях поддержали публикацию по крайней мере 15 научных исследований, посвященных кормлению и росту18,26, воспроизводства18,28, диета6, 29

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего декларировать.

Благодарности

Мы признательны многим людям, которые внесли накопленные знания в этот проект на протяжении многих лет, включая Г.-А. Паффенхефер и Д. Дейбель, которые первоначально разработали эти протоколы. М. Кёстер и Л. Ламколей также внесли значительный вклад в разработку этих процедур.  Н.Б. Лопес-Фигероа и З.Е. Родригес-Сантьяго составили оценки изобилия долиолидов, приведенные в таблице 1. Это исследование было частично поддержано Национальным научным фондом США награды OCE 082599, 1031263 в MEF, совместные проекты OCE 1459293 и OCE 14595010 в MEF и DMG и, Национальное управление океанических и атмосферных наград NA16SEC4810007 DMG. Мы благодарны трудолюбивому и профессиональному экипажу R/V Savannah. Ли Энн DeLeo подготовил цифры, Чарльз И. Робертсон корректир рукописи и, Джеймс (Джимми) Уильямс изготовлены планктона колесо

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Пробирки для культивирования водорослей (55 мл стерильные одноразовые стеклянные пробирки для культивирования)AnyNAДля культур водорослей
АвтоклавAnyNAДля стерилизационного оборудования и морской воды для культур водорослей Стаканы
(стакан 2 л)AnyNAДля сортировки содержимого разбавленной планктонной сетки
Ведра (5 галлонов, ~20 л)AnyNAДля разбавления содержимого сетки - следует кондиционировать морскую воду перед первым использованием
Carboys (20 л)ЛюбойNAДля хранения морской воды
Стеклянная банка для культивирования Doliolid (1,9 л стеклянная банка с узким горлышком и крышкой)QorpakGLC-01882Контейнер для культивирования
Стеклянная банка для культивирования Doliolid glass (3,8 л стеклянная банка с узким горлышком с крышкой)QorpakGLC-01858Контейнер для культивирования
Environmental Chamber (Камера окружающей среды с регулируемой температурой)AnyNAДля размещения планктонового колеса и обслуживания культур
Фильтрационный аппарат для фильтров 47 ммЛюбойNAДля фильтрации морской воды для культур
Стеклянные фильтры из микрофибры, 47 ммВатман1825-047Для фильтрации морской воды для культур
Стеклянная пипетка (боросиликатная стеклянная пипетка (стеклянная трубка), наружный диаметр 10 мм, внутренний диаметр 8 мм, толщина стенки 1 мм)Научная компанияNC-10894Нестандартный срез и края полированный
Хомуты для шлангов, нержавеющая сталь, #104 (178 мм)ЛюбойNAДля крепления банок для культивирования к планктоновому колесу
<эм>Isochrysis galbana штамм CCMP1323Национальный центр морских водорослей и микробиоты (NCMA)штамм CCMP1323Для кормления культур долиолид
L1 Media Kit, 50 л Национальныйцентр морских водорослей и микробиоты (NCMA)MKL150LДля культивирования водорослей
Лампа (Люминесцентная настольная лампа с регулируемым рычагом)ЛюбаяNAДля подсветки долиолидов в банках и стаканах
Инкубатор с регулируемой температурой с подсветкойЛюбаяNAДля водорослевых культур
Микропипетки и стерильные наконечники (0-20 & микро; л, 20-200 и микро; л, 200-1000  &микро; l)AnyNAДля культур водорослей
Plankton Net (202µ м 0,5 м, длина 5:1) с концевым кольцом трески и   4 л аквариум трескаSea-Gear Corporation90-50x5-200-4A/BBДля сбора живых долиолид (см. Рисунок 4)
Планктонное колесоNA NAИзготовлено на заказ (см. Рисунок 2)
Полиэтиленовая пленкаЛюбаяNAДля покрытия внутренней крышки банок для культуры долиолида
Перманганат калияFisher ScientificP279-500Реагент для чистки банок и стеклянной посуды
Штамм Rhodomonas sp. CCMP740Национальный центр морских водорослей и микробиоты (NCMA)штамм CCMP740Для кормления культурами долиолид
Резиновая трубкаNANA Для удержания культивирующих банок к планктоновому колесу (может быть изготовлен из тюгонной трубки)
Бисульфит натрияFisher ScientificS654-500Реагент для чистки банок и стеклянной посуды
Гидроксид натрияFisher ScientificBP359-212Реагент для очистки банок и стеклянной посуды
Стерильные серологические пипетки (1 мл, 5 мл, 10 мл, 25 мл)AnyNAДля культур водорослей
Thalassiosira weissflogiiCCMP1051 Национальный центр морских водорослей и микробиоты (NCMA)штамм CCMP1051Для кормления культурами долиолид
Колбы для культуры тканей (250 мл)ЛюбойNAДля водорослевых культур
штамм

Ссылки

  1. Banse, K. Zooplankton – Pivotal role in the control of ocean production. Ices Journal of Marine Science. 52 (3-4), 265-277 (1995).
  2. Wilson, S. E., Ruhl, H. A., Smith, K. L. Zooplankton fecal pellet flux in the abyssal northeast Pacific: A 15 year time-series study. Limnology and Oceanography. 58 (3), 881-892 (2013).
  3. Bode, A., Álvarez-Ossorio, M. T., Miranda, A., Ruiz-Villarreal, M. Shifts between gelatinous and crustacean plankton in a coastal upwelling region. Ices Journal of Marine Science. 70 (5), 934-942 (2013).
  4. Kiorboe, T. Zooplankton body composition. Limnology and Oceanography. 58 (5), 1843-1850 (2013).
  5. Holland, L. Z. Tunicates. Current Biology. 26 (4), R146-R152 (2016).
  6. Walters, T. L., et al. Diet and trophic interactions of a circumglobally significant gelatinous marine zooplankter, Dolioletta gegenbauri (Uljanin, 1884). Molecular Ecology. , Special Issue: Species Interactions, Ecological Networks and Community Dynamics (2018).
  7. Piette, J., Lemaire, P. Thaliaceans, the neglected pelagic relatives of ascidians: a developmental and evolutionay enigma. Quarterly Review of Biology. 90 (2), 117-145 (2015).
  8. Acuña, J. L. Pelagic tunicates: Why gelatinous? American Naturalist. 158 (1), 100-107 (2001).
  9. Alldredge, A. L., Madin, L. P. Pelagic tunicates – unique herivores in the marine plankton. Bioscience. 32 (8), 655-663 (1982).
  10. Wada, H. Evolutionary history of free-swimming and sessile lifestyles in urochordates as deduced from 18S rDNA molecular phylogeny. Molecular Biology and Evolution. 15 (9), 1189-1194 (1998).
  11. Zeng, L. Y., Jacobs, M. W., Swalla, B. J. Coloniality has evolved once in stolidobranch ascidians. Integrative and Comparative Biology. 46 (3), 255-268 (2006).
  12. Delsuc, F., Brinkmann, H., Chourrout, D., Philippe, H. Tunicates and not cephalochordates are the closest living relatives of vertebrates. Nature. 439 (7079), 965-968 (2006).
  13. Garstang, W. The morphology of the Tunicata, and its bearing on the phylogeny of the chordata. Quarterly Journal of Microscopical Science. 72 (285), 51-187 (1929).
  14. Govindarajan, A. F., Bucklin, A., Madin, L. P. A molecular phylogeny of the Thaliacea. Journal of Plankton Research. 33 (6), 843-853 (2011).
  15. Godeaux, D., Bone, Q., Braconnot, J. C. The Biology of Pelagic Tunicates. Bone, Q. , Oxford University Press. 1-24 (1998).
  16. Deibel, D., Lowen, B. A review of the life cycles and life-history adaptations of pelagic tunicates to environmental conditions). Ices Journal of Marine Science. 69 (3), 358369(2012).
  17. Paffenhöfer, G., Köster, M. From one to many: on the life cycle of Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea). Journal of Plankton Research. 33 (7), 1139-1145 (2011).
  18. Paffenhöfer, G. A., Gibson, D. M. Determination of generation time and asexual fecundity of doliolids (Tunicata, Thaliacea). Journal of Plankton Research. 21 (6), 1183-1189 (1999).
  19. Conley, K. R., Lombard, F., Sutherland, K. R. Mammoth grazers on the ocean's minuteness: a review of selective feeding using mucous meshes. Proceedings of the Royal Society B-Biological Sciences. 285 (1878), (2018).
  20. Bouquet, J. M., et al. Culture optimization for the emergent zooplanktonic model organism Oikopleura dioica. Journal of Plankton Research. 31 (4), 359370(2009).
  21. Denoeud, F., et al. Plasticity of Animal Genome Architecture Unmasked by Rapid Evolution of a Pelagic Tunicate. Science. 330 (6009), 1381-1385 (2010).
  22. Harrison, P. J., Waters, R. E., Taylor, F. J. R. A broad-spectrum artificial seawater medium for coastal and open ocean phytoplankton. Journal of Phycology. 16 (1), 2835(1980).
  23. Ohman, M. D., et al. Zooglider: An autonomous vehicle for optical and acoustic sensing of zooplankton. Limnology and Oceanography-Methods. 17 (1), 69-86 (2019).
  24. Takahashi, K., et al. In situ observations of a doliolid bloom in a warm water filament using a video plankton recorder: Bloom development, fate, and effect on biogeochemical cycles and planktonic food webs. Limnology and Oceanography. 60 (5), 1763-1780 (2015).
  25. Deibel, D. The biology of pelagic tunicates. Bone, Q. , Oxford University Press. 171-186 (1998).
  26. Gibson, D. M., Paffenhöfer, G. A. Feeding and growth rates of the doliolid, Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea). Journal of Plankton Research. 22 (8), 1485-1500 (2000).
  27. Haskell, A., Hofmann, E., Paffenhöfer, G., Verity, P. Modeling the effects of doliolids on the plankton community structure of the southeastern US continental shelf. Journal of Plankton Research. 21 (9), 1725-1752 (1999).
  28. Gibson, D. M., Paffenhöffer, G. A. Asexual reproduction of the doliolid, Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea). Journal of Plankton Research. 24 (7), 703-712 (2002).
  29. Frischer, M. E., et al. Reliability of qPCR for quantitative gut content estimation in the circumglobally abundant pelagic tunicate Dolioletta gegenbauri (Tunicata, Thaliacea). Food Webs. 1, 7(2014).
  30. Köster, M., Paffenhöfer, G., Baker, C., Williams, J. Oxygen consumption of doliolids (Tunicata, Thaliacea). Journal of Plankton Research. 32 (2), 171-180 (2010).
  31. Paffenhöfer, G. A hypothesis on the fate of blooms of doliolids (Tunicata, Thaliacea). Journal of Plankton Research. 35 (4), 919-924 (2013).
  32. Takahashi, K., et al. Sapphirinid copepods as predators of doliolids: Their role in doliolid mortality and sinking flux. Limnology and Oceanography. 58 (6), 1972-1984 (2013).
  33. Martí-Solans, J., et al. Oikopleura dioica Culturing Made Easy: A Low-Cost Facility for an Emerging Animal Model in EvoDevo. Genesis. 53 (1), 183-193 (2015).
  34. Nishida, H. Development of the appendicularian Oikopleura dioica: Culture, genome, and cell lineages. Development Growth & Differentiation. 50, S239-S256 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Культивирование долиолидвылов планктонной сетьюстерилизация стеклянных банокпротокол кормления водорослямикультивирование в планктонном колесестадии жизненного циклаконтроль температурымониторинг концентрации водорослейметодика бережного обращения
Культивирование морской пелагической туникате Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) для экспериментальных исследований
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.