Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Приемная иммунотерапия клеток iNKT в глюкозе-6-фосфатной исофазе (G6PI)-индуцированной РА мышей

6.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/60048

⸱

31 января 2020 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Medical School of Hebei University, 2Key Laboratory of Pathogenesis Mechanism and Control of Inflammatory-Autoimmune Diseases in Hebei Province

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол использует G6PI смешанные пептиды для построения ревматоидных моделей артрита, которые ближе к модели человеческого ревматоидного артрита в CD4и Т-клеток и цитокинов. Высокая чистота инвариантных естественных киллеров Т-клеток (главным образом iNKT2) со специфическими фенотипами и функциями были получены путем индукции in vivo и в пробирке для очищения для приемной иммунотерапии.

Аннотация

Ревматоидный артрит (РА) является сложным хроническим воспалительным аутоиммунным заболеванием. Патогенез заболевания связан с инвариантными естественными клетками-убийцами Т (iNKT). Пациенты с активной РА представляют меньше iNKT клеток, дефектной функции клеток, и чрезмерная поляризация Th1. В этом исследовании, модель РА животных была создана с использованием смеси gpI325-339 и hGPI469-483 пептидов. Клетки iNKT были получены индукцией in vivo и очисткой in vitro, а затем настой в мышей РА для приемной иммунотерапии. Система обработки in vivo (IVIS) показала, что клетки iNKT в основном распределяются в селезенке и печени. На 12 день после клеточной терапии прогрессирование заболевания значительно замедлилось, клинические симптомы были смягчены, обилие клеток iNKT в тимусе увеличилось, доля iNKT1 в тимусе снизилась, а уровни ТНФ-З, IfN-Q и IL-6 в сыворотка уменьшилась. Приемная иммунотерапия клеток iNKT восстановила баланс иммунных клеток и исправила чрезмерное воспаление организма.

Введение

Ревматоидный артрит (РА) является аутоиммунным заболеванием, характеризующимся хронической, прогрессирующей инвазивностью с частотой 0,5-1%1,2. Основной патогенез связан с аномальным распространением аутореактивныхCD4 иCD8 - Т-клеток, проявляющихся в увеличении доли CD4иIFN-Q иCD4- IL-17A- Т-клеток, а также уменьшенного числа CD4-ИЛ-4 и CD4 -CD25-FoxP3- Т-клеток. Поэтому секреция воспалительных цитокинов усиливается, а чрезмерная воспалительная реакция разрушает родной баланс и функцию толерантности иммунной системы организма. Кроме того, помощник Т-лимфоцитов (Т) 1 клетки, которые проникают в сустав, усугубляют воспалительные реакции и повреждения суставов. Таким образом, ингибирование чрезмерной воспалительной реакции и восстановление иммунной толерантности и иммунного баланса являются ключевыми для лечения РА3,4.

Ячейки iNKT имеют функции и характеристики НК-клеток и Т-клеток. Клетки iNKT питают различный, инвариантный Т-клеточный рецептор (TCR) - цепь с ограниченным репертуаром TCR и цепи5 и распознают гликолипидный антиген, представленный основным комплексом гистосовместимости (MHC) молекулы CD1d класса CD1d на поверхности антиген-представляя клеток. Mitsuo et al.6 обнаружили большое количество клеток iNKT и функциональные дефекты во многих аутоиммунных заболеваниях, включая РА. Aurore et al.7 продемонстрировали, что клетки iNKT оказывают положительное влияние на поддержание аутоиммунной толерантности и что при восстановлении количества и функции клеток iNKT болезнь облегчается. Кроме того, Miellot-Gafsou et al.8 обнаружили, что клетки iNKT не только анонсировали болезнь, но и увеличили прогрессирование заболевания. Эти противоречивые результаты свидетельствуют о том, что iNKT-клетки являются неоднородными Т-клетками, и функция различных подмножеств может быть обращена вспять. В клиническом исследовании РА частота клеток iNKT коррелирует со счетом активности заболевания9. Результаты также подтвердили, что частота iNKT была снижена у пациентов РА, количество CD4иIFN-я Т-клеток подмножества увеличились, и секреторные уровни воспалительных цитокинов IFN-я и TNF-я увеличилось10,11. Кроме того, Шариф и др.12 исследовали диабет типа 1 (T1D) и обнаружили, что селективный вливание клеток iNKT upregulated выражение воспалительного цитокина IL-4, поддерживаетиммунную толерантность, и предотвратить развитие диабета типа 1. Таким образом, приемная инфузия специфических клеток iNKT или целевая активация клеток iNKT повышает уровень клеток iNKT у пациентов РА, что может стать прорывом в лечении РА.

Клеточная иммунотерапия в настоящее время представляет большой интерес и широко используется в терапии рака. Тем не менее, iNKT клетки редки, неоднородные иммунорегуляторные клетки (только 0,3% от общего числа ПБМК)13, что ограничивает потенциальное клиническое применение. Эти клетки в основном делятся на три субпопуляции: 1) клетки iNKT1, которые имеют высокое выражение промиелоцитарного белка цинка-пальца (ПЛЗФ) и коэффициент акрипции Т-бокса (T-bet); 2) iNKT2 клетки с промежуточным выражением ПЛЗФ и связывающего белка GATA 3 (GATA3); 3) iNKT17 клетки с низкой экспрессией ПЛЗФ и ретиноидных связанных сирот ядерных рецепторов (ROR)-Зт, которые выделяют IFN-Я, IL-4, и IL-1714. Активированные клетки iNKT выделяют Th1, Th2 и Th17-подобные цитокины, которые определяют различные иммуномодулирующие эффекты клеток iNKT15. Иммуномодулирующие и иммунотерапевтические эффекты специфической активации различных субпопуляций клеток iNKT различны. Поэтому выбор специфических фенотипов клеток iNKT (главным образом iNKT2) с противовоспалительными функциями для регулирования иммунного ответа организма может исправить иммунный дисбаланс и иммунные расстройства в РА.

Создание идеальной модели животного имеет большое значение для лечения и изучения патогенеза РА. В настоящее время наиболее часто используемые и зрелые модели животных включают коллагена индуцированного артрита, адъювантного артрита, zymosan-индуцированного артрита, и полисахарид индуцированный артрит16-17. Тем не менее, нет модели, которая может полностью имитировать все особенности человека РА. Тип II коллагена индуцированного артрита (ЦРУ) является классической моделью артрита. ЦРУ индуцируется иммунизации мышей с типом II коллагена конкретных моноклональных антител, отражающих зависимость антител этой модели заболевания. Бенус и др. описал модель с системным иммунным ответом на глюкозу-6-фосфат изомеразу (G6PI), которая вызывает периферический симметричный полиартрит в восприимчивых штаммов мыши18,19. В этой модели развитие артрита зависит от Т-клеток, В-клеток и врожденного иммунитета18,19,20. Horikoshi21 обнаружил, что модели РА в результате иммунизации мышей DBA/1 с фрагментами полипептида G6PI больше похожи на человеческие РА с точки зрения CD4и Т-клеток и цитокинов (т.е. IL-6 и TNF-я), чем модели ЦРУ. Для усиления стимулирующего эффекта на сайте распознавания TCR смешанные полипептидные фрагменты G6PI (hGPI325-339 и hGPI469-483) были использованы для иммунизации мышей DBA/1 для построения модели мыши РА. Уровень успеха этого подхода может быть высоким, потому что hGPI325-339 и hGPI469-483 являются иммунодоминирующими для I-A q-ограниченных Т-клеток ответов. Таким образом, эта модель может имитировать чрезмерное распространение CD4и Т-клеток и дефектов клеток iNKT у пациентов РА22. Фундаментальные исследования иммунопатологии РА заложили основу для нашего дальнейшего углубленного исследования.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все экспериментальные мыши (всего 150) были здоровыми мышами DBA/1, 6-8 недель (20,0 и 1,5 г), выращенных в специфической среде, свободной от патогенов (SPF). Существует нет специального лечения до моделирования. Эксперимент был разделен на здоровую контрольную группу (15 мышей), модельную контрольную группу (15 мышей) и группу клеточной терапии (55 мышей). Это исследование было одобрено Комитетом по защите животных и этике Университета Хэвэя.

1. Построение модели болезни

  1. Дублирование модели животных РА
    1. Взвесьте 1,75 мг обоих hG6PI 325-339 и hG6PI 469-483 фрагментов и растворите их в 5,25 мл 4 градуса Цельсия тройной дистиллированной воды.
    2. Растворите полный адъювант Фрейнда (CFA) в водяной бане 50 градусов по Цельсию, нарисуйте 5,25 мл в еще одну центрифугу мощностью 10 мл и охладите ее для использования.
    3. Поместите смесь раствора hG6PI и раствора CFA в искусственный эмульсионный блок с двумя стеклянными шприцев.
    4. Нажмите шприц с постоянной скоростью и частотой 10-20x на мин, чтобы полностью эмульгировать смешанный пептидный раствор и cfA раствор. Выполните операцию в ледяной ванне, и держать эмульсии капель в воде в течение 10 минут после завершения эмульгации без разгона.
    5. Введите 150 л эмульгированных hG6PIs в хвостовой корень мыши подкожно.
    6. Впрысните 200 мг токсина котуса в мышь интраперитонена на 0 ч и 48 ч после инъекции hG6PI.
  2. Экспериментальная проверка модели РА
    1. Измерьте толщину лапы мыши с помощью калипера Вернье (2 раз в день).
    2. Наблюдайте и отмечайте степень покраснения и отеки стопы. Используйте следующие критерии оценки: 1) носы с легким отеком; 2) дисс и подножка для ног с прозрачным красным отеком; 3) лодыжка с красным отеком.
    3. Эвтаназия мышей под глубокой анестезией путем интраперитонеальной инъекции 1% пентобарбитала натрия (50 мг/кг массы тела) через 14 дней после моделирования и удалить лапы для окрашивания HE.
    4. Определите уровни секреции сыворотки IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF-я и IFN-з с помощью коммерческого цитометрического массива бисера (CBA) в соответствии с протоколом производителя.

2. Получение iNKT клеток с приемной клеточной терапии

  1. Направленная индукция iNKT-клеток
    1. Вводят нормальных мышей интраперитонеально с помощью q-GalCer (0,1 мг/кг массы тела).
  2. Изоляция iNKT-клеток
    1. Через три дня после моделирования, вводят мышей интраперитоневом с 1% пентобарбитала натрия (50 мг/кг массы тела) для анестезии. Адекватно обезвлечимых мышей не показывают заднюю лапу вывода ответ на нос щепотку.
    2. Изолировать селезенку мыши DBA/1 после введения ее интраперитонеально с помощью q-GalCer. Подготовка одной подвески ячейки путем резки и шлифования селезенки в 200 сетки сито.
    3. Вымойте суспензию клетки с PBS, центрифуга на 200 х г в течение 5 мин, и отказаться от супернатанта. Повторите.
    4. Приостановите работу клеток с 1 мл цельной крови и раствором разбавления тканей. Добавьте 3 мл мышиной среды разделения лимфоцитов, а затем центрифугите клетки в течение 20 мин при температуре 300 х при комнатной температуре.
    5. Соберите слой молочно-белых лимфоцитов (т.е. второго слоя сверху), промойте его в 2 x с помощью PBS и посчитайте с помощью автоматизированного счетчика клеток.
  3. Магнитная активированная сортировка клеток (MACS)положительная стратегия отбора для очистки клеток iNKT
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для предварительной обработки тетрамеров CD1d, 1 мг/мл из к-Galcer был разбавлен до 200 мкг/мл с 0,5% Tween-20 и 0,9% NaCl, и 5 qL результирующего раствора был добавлен в 100 л раствора тетрамер CD1d. Смесь была инкубирована в течение 12 ч при комнатной температуре и помещена при 4 градусах Цельсия для использования. ТКР был разбавлен в 80раз деионизированной водой. Все остальные антитела были использованы в качестве акционерного раствора.
    1. Отрептить 107 ячеек с 100 qL 4 C PBS, добавить 10 qL из q-GalCer-загруженных CD1d Tetramer-PE, и инкубировать их при 4 кС в течение 15 минут в темноте.
    2. Вымойте клетки 2x с PBS и повторно их в 80 Зл Л PBS.
    3. Добавьте 20 qL анти-PE-MicroBeads и инкубировать их при 4 градусах по Цельсию в течение 20 минут в темноте.
    4. Вымойте их 2x с PBS и resuspend клетки с 500 Зл Л PBS.
    5. Поместите сортировочную колонку в магнитное поле сортировки MACS и промыть 500 зл и сортировки PBS.
    6. Добавьте суспензию ячейки со ступени 2.3.4 к столбце сортировки, соберите проходной и прополните 3x буфером PBS.
    7. Удалите магнитное поле и соберите ячейки из сортировочных столбцов. В этот момент добавьте 1 мл буфера PBS в столбец сортировки и быстро надавите поршень при постоянном давлении, чтобы загнать маркированные ячейки в трубку для сбора и получить очищенные iNKT-клетки. Рассчитывайте с помощью автоматического счетчика ячейки.
  4. Идентификация фенотипа клеток iNKT
    1. Возьмите 1 х 106 ячеек из шагов 2.2.5 и 2.3.7, соответственно, и повторно их в 50 Л PBS.
    2. Инкубация антител: Не добавляйте антитела в отрицательную контрольную трубку, добавляйте 0,5 л из й-GalCer-PE-CD1d Tetramer или 10 л FITC-TCR в одной положительной контрольной трубке. Добавьте в образец трубки 0,5 л тетрамера и 10 зл FITC-TCR. Инкубировать их при 4 градусах по Цельсию в течение 30 минут в темноте.
    3. Вымойте клетки в PBS, а затем центрифуга на 200 х г в течение 5 мин.
    4. Откажитесь от супернатанта, добавьте 1 мл рабочего раствора Foxp3 Foxation/Permeabilization и инкубация клеток в течение 45 минут при 4 градусах Цельсия в темноте.
    5. Добавьте 1 мл 1x пермякового буферного рабочего раствора и центрифугите клетки при комнатной температуре 500 х г при комнатной температуре в течение 5 мин.
    6. Отбросьте супернатант. Добавьте 1 qL Alexa Fluor 647 мышь Anti-PL-F и 1 зл и 1 л PerCP-Cy 5.5 мышь анти-T-bet (или 1 Зл PerCP-Cy 5.5 мышь анти-ROR) в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте.
    7. Добавьте к 2 мл рабочего решения Permeabilization Buffer для очистки.
    8. Откажитесь от супернатанта, отрепримите клетки в 500 Л PBS и измерьте цитометрией потока.
  5. Функциональная идентификация клеток iNKT
    1. Возьмите 3 х 106 iNKT-ялки со ступени 2.3.7 и повторно применяйте их в 12 колодцах с 1,5 мл неполной среды RPMI-1640 (т.е. без сыворотки).
    2. Добавьте форбол эстер (PMA, 50 нг/мл) и иономицин кальций (IO, 1 мкг/мл) и поместите в инкубатор CO2 на 24 ч.
    3. Соберите супернатант ячейки и обнаружите уровни секреции ИЛ-2, Ил-17А, ТНФ-З, Ил-6, Ил-4, ИФН-З и Ил-10 с помощью коммерческого асссеа ЦБА в соответствии с протоколом производителя.
  6. Экспериментальное исследование пути миграции клеток iNKT у мышей РА
    1. Растворите краситель DiR (2,5 мг/мл) в DMSO.
    2. Resuspend iNKT-клетки в 6 скважинных пластинах с неполной средой RPMI-1640. Плотность составляет 1 х 106 ячеек/мл.
    3. Добавить раствор DiR (5 мг/мл) и инкубировать в инкубатор CO2 в течение 25 минут.
    4. Вымойте с PBS и повторной приостановки клеток (3 х 106/300 Л) для получения DiR-маркированных iNKT ячеек (DiR-iNKT).
    5. Вводят 1% пентобарбитала натрия (50 мг/кг массы тела) интраперитонеально для обезболиливания мышей. Адекватно обезвлечимых мышей не показывают заднюю лапу вывода на нос ущипнуть. Нанесите ветеринарную мазь на глаза мыши, чтобы предотвратить сухость в то время как под наркозом для визуализации.
    6. Впрысните клетки DiR-iNKT 3 x 106 на мышь в хвостовую вену с моделью RA в течение 8 дней. Мониторинг iNKT клеток у мышей после инъекции в течение 0 мин, 10 мин, 30 мин, 60 мин, и день 0 (после 3 ч), 1, 3, 6, 12, 26, 34, 38, и 42 дней с помощью небольшого животного in vivo системы визуализации (IVIS). Используемая длина волн возбуждения составила 748 нм, длина волны эмиссии - 780 нм, а время экспозиции было автоматическим.
    7. Поместите каждую мышь в отдельную клетку после каждого наблюдения и поддерживать строгое recumbency. Наблюдайте до выздоровления после наркоза.

3. Оценка приемной иммунотерапии мышей РА с клетками iNKT

  1. iNKT клеточная приемная иммунотерапия для мышей РА
    1. Впрысните 3 x 106 ячеек iNKT на мышь через хвостовую вену. Случайно выберите 15 мышей, которые были смоделированы за 8 дней до этого, и получите iNKT-клетки без маркировки DiR с шага 2.3.7 настой хвостовой вена.
  2. Оцените эффективность приемной иммунотерапии для клеток iNKT.
    1. Измерьте толщину лапы мыши, количественно очеловечить голеностопный сустав и систематически оценка после вливания клеток iNKT, как описано в шагах 1.2.1-1.2.2.
    2. Наблюдайте за инфильтрацией воспалительных клеток и изменениями суставов суставов суставов мыши, как описано в шаге 1.2.3.
    3. Определите уровни секреции Ил-2, Ил-4, Ил-6, Ил-10, Ил-17А, ТНФ-З и ИФН-З, как описано в шаге 1.2.4.
  3. Определите частоту iNKT-клеток и подмножеств.
    1. Изолировать тимус мыши и подготовить одну ячейку подвески.
    2. Отделите лимфоциты с жидкостью разделения лимфоцитов.
    3. Определите частоту и частоту клеток iNKT, описанную в шаге 2.4.
  4. Статистический анализ
    ПРИМЕЧАНИЕ: Все данные представлены в виде средних значений SD. Значения P qlt; 0,05 были сочтены статистически значимыми.
    1. Используйте однофакторный анализ дисперсии (ANOVA). Если отклонение удовлетворено, используйте тест ЛСД для дальнейшего сравнения.
    2. Если дисперсия не однородна, используйте непараметрический тест. Используйте тест Kruskal-Wallis H для дальнейшего сравнения31.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Оценка индекса артрита и толщина лапы увеличились после моделирования. По сравнению с контрольной группой, на лицах группы моделей РА начал проявляться красный отек через 6 дней после моделирования, с постепенным обострением. В 14 дней, красный отек в голеностопном суставе достиг своего пика, а затем постепенное облегчение. Толщина лапы изменилась аналогичным образом (P lt; 0,05)(Рисунок 1).

Инфильтрация воспалительных клеток значительно возросла после мо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

iNKT-клетки представляют собой специальные Т-клетки, которые преодолевают врожденный и адаптивный иммунитет и в основном развиваются из CD4,CD8и тимоцитов. клетки iNKT обладают разнообразными иммунорегуляторными функциями и взаимодействуют с другими иммунными клетками путем прямого контакта и секреции различных цитокинов23,влияющих на дендритные клетки (ДК), макрофаги, нейтрофилы, В-клетки, Т-клетки, и ДИфференциации и развитии клеток НК

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не заявляют об отсутствии финансирования или конфликтах интересов.

Благодарности

Наше исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая (NSFC) (81771755), колледжами и ключевым исследовательским проектом науки и техники университета провинции Хэбей (D2017009) и Центром медицинских экспериментов Animal Lab of Medical Experiment, Университетом Хэвэя. Мы благодарны за их поддержку.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Alexa Fluor 647 Мышь Anti-PLZFBD563490Америка
Анти-ПЭ МикрогранулыMiltenyi130-048-801
Германия КолонныMiltenyiMS
Германия Криогенная центрифугаBeckmanAllegra® X-15R America
DiRThermo Fisher ScientificD12731Американский
центр встраиванияТяньцзинь Авиационная электромеханическая компания, Ltd.BMJ-1China
FITC Хомяк против мыши TCR β ЦепьBD553170
Американский проточный цитометрBDAccuri C6Америка
Фреундс полный адъювантSigmaF5881Америка
hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML)Karebay Biochem18062202Китай
hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT)Karebay Biochem18062203Китай
Система визуализации in vivoPerkinElmerCaliper IVIS lumina II
America Иономицин КальцийCayman10004974America
KRN7000AdipoGenAG-CN2-0013
America Mouse CD1d Tetramer-PEMBLTS-MCD-1Япония
Мышь PercollSolarbioP8620
Китай Оптический микроскопOlympus Olympus-IIЯпонская
мышь PerCP-CyTM5.5 Anti-ROR-ϒ tBD562683America
PerCP-CyTM5.5 Мышиный анти-T-бетBD561316Америка
Коклюшный токсинSigmaP7208Америка
форболовые эфирыCayman10008014America
Буфер для лизиса эритроцитовBD555899Америка
RPMI-1640Biological Industries01-100-1ACSИзраиль
Набор цитокинов Th1/Th2/Th17BD560485America
UltramicrotomeLeicaLeica EM UC6Германия

Ссылки

  1. Tobón, G. J., Youinou, P., Saraux, A. The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis. Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0-14 (2010).
  2. Cross, M., et al. The global burden of rheumatoid arthritis: estimates from the Global Burden of Disease 2010 study. Annals of the Rheumatic Diseases. 73 (7), 1316-1322 (2014).
  3. Kanashiro, A., Bassi, G. S., Queiróz Cunha, F. D., Ulloa, L. From neuroimunomodulation to bioelectronic treatment of rheumatoid arthritis. Bioelectronics in Medicine. 1 (2), 151-165 (2018).
  4. Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions. Nature Reviews Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).
  5. Bianca, B. S. Unraveling Natural Killer T-Cells Development. Frontiers in Immunology. 8, 1950(2018).
  6. Mitsuo, A., et al. Decreased CD161+CD8+ T cells in the peripheral blood of patients suffering from rheumatic diseases. Rheumatology. 45 (12), 1477-1484 (2006).
  7. Miellot, A., et al. Activation of invariant NK T cells protects against experimental rheumatoid arthritis by an IL-10-dependent pathway. European Journal of Immunology. 35 (12), 3704-3713 (2005).
  8. Miellot-Gafsou, A., et al. Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment. Immunology. 130 (2), 296-306 (2010).
  9. Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis. Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).
  10. Ming, M., et al. Effects on immunoregulation of iNKT cells in RA by novel synthetic immunostimulator CH1b. Chinese Journal of Immunology. 32 (02), 218-222 (2016).
  11. Ming, M., et al. Study of the correlation between the percentage of iNKT cells and the ratio of IFN-γ/IL-4 in patients with rheumatoid arthritis. Chinese Journal of Microbiology Immunology. 35 (3), 213-218 (2015).
  12. Sharif, S., et al. Activation of natural killer T cells by α-galactosylceramide treatment prevents the onset and recurrence of autoimmune Type 1 diabetes. Nature Medicine. 7, 1057-1062 (2010).
  13. Gapin, L. Development of invariant natural killer T cells. Current Opinion in Immunology. 39, 68-74 (2016).
  14. Kwon, D. I., Lee, Y. J. Lineage Differentiation Program of Invariant Natural Killer T Cells. Immune Network. 17 (6), (2017).
  15. Thapa, P., et al. The differentiation of ROR-γt expressing iNKT17 cells is orchestrated by Runx1. Scientific Reports. 7 (1), 7018(2017).
  16. Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focuson interferon-γ. Interferon Cytokine Research. 31 (12), 917-926 (2011).
  17. Van Haalen, H. G. M., Severens, J. L., Tran-Duy, A., Boonen, A. How cost-effectiveness A systematic review and stepwise approach for selecting a transferable health economic evaluation rheumatoid arthritis. Pharmacoeconomics. 32 (5), 429-442 (2014).
  18. Schubert, D., Maier, B., Morawietz, L., Krenn, V., Kamradt, T. Immunization with glucose-6-phosphate isomerase induces T cell-dependent peripheral polyarthritis in genetically unaltered mice. Journal of Immunology. 172, 4503-4509 (2004).
  19. Bockermann, R., Schubert, D., Kamradt, T., Holmdahl, R. Induction of a B-cell-dependent chronic arthritis with glucose-6-phosphate isomerase. Arthritis Research, Therapy. 7, 131613-131624 (2005).
  20. Kamradt, T., Schubert, D. The role and clinical implications of G6PI in experimental models of rheumatoid arthritis. Arthritis Research, Therapy. 7, 20-28 (2005).
  21. Horikoshi, M., et al. Activation of Invariant NKT Cells with Glycolipid Ligand α-Galactosylceramide Ameliorates Glucose-6-Phosphate Isomerase Peptide-Induced Arthritis. PlosOne. 7 (12), 51215(2012).
  22. Zhang, X. J., et al. Immunization with mixed peptides derived from glucose-6-phosphate isomerase induces rheumatoid arthritis in DBA /1 mice. Chinese Journal of Pathophysiology. 32 (3), 569-576 (2016).
  23. Motohashi, S., Nakayama, T. Invariant natural killer T cell-based immunotherapy for cancer. Immunotherapy. 1 (1), 73(2017).
  24. Jung, S., et al. The requirement of natural killer T-cells in tolerogenic APCs-mediated suppression of collagen-induced arthritis. Experimental and Molecular Medicine. 42 (8), 547-554 (2010).
  25. Luc, V. K., Lan, W. Therapeutic Potential of Invariant Natural Killer T Cells in Autoimmunity. Frontiers in Immunology. 9, 519-526 (2018).
  26. Chiba, A., et al. Suppression of collagen-induced arthritis by natural killer T cell activation with OCH, a sphingosine-truncated analog of α-galactosylceramide. Arthritis, Rheumatism. 50 (1), 305-313 (2004).
  27. Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis. Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).
  28. Bruns, L., et al. Immunization with an immunodominant self-peptide derived from glucose-6-phosphate isomerase induces arthritis in DBA/1 mice. Arthritis Research, Therapy. 11 (4), (2009).
  29. Parietti, V., et al. Rituximab treatment overcomes reduction of regulatory iNKT cells in patients with rheumatoid arthritis. Clinical Immunology. 134 (3), 331-339 (2010).
  30. Yoshida, Y., et al. Functional mechanism(s) of the inhibition of disease progression by combination treatment with fingolimod plus pathogenic antigen in a glucose-6-phosphate isomerase peptide-induced arthritis mouse model. Biological, Pharmaceutical Bulletin. 38 (8), 1120-1125 (2015).
  31. Chen, D., et al. Study of the adoptive immunotherapy on rheumatoid arthritis with Thymus-derived invariant natural killer T cells. International Immunopharmacology. 67, 427-440 (2019).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Модель ревматоидного артритапептиды G6PIочистка клетокпроточная цитометриясортировка MACSкоклюшный токсинIVIS-трекинганализ цитокинов
Приемная иммунотерапия клеток iNKT в глюкозе-6-фосфатной исофазе (G6PI)-индуцированной РА мышей
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.