Трансплантация против хозяина болезнь является одним из основных осложнений после аллогенной трансплантации костного мозга. Дендритные клетки играют важную роль в патогенеза болезни трансплантата против хозяина. В настоящей статье описывается новая платформа трансплантации костного мозга для изучения роли дендритных клеток в развитии трансплантата против хозяина болезни и трансплантата против лейкемии эффект.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Платформа трансплантации костного мозга для изучения роли дендритных клеток в трансплантации против хост болезни
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Аллогенная трансплантация костного мозга (BMT) является эффективной терапией гематологических злокачественных новообразований из-за трансплантата против лейкемии (GVL) эффект для искоренения опухолей. Тем не менее, его применение ограничено развитием трансплантата против хозяина болезни (GVHD), основное осложнение BMT. GVHD вызывается, когда Т-клетки в донорских трансплантатах распознаюталонантиген, выраженный клетками-реципиентами, и монтируют нежелательные иммунологические атаки против здоровых тканей реципиента. Таким образом, традиционные методы лечения предназначены для подавления донорской Т-клеточной аллореактивности. Однако эти подходы существенно ухудшают эффект GVL, чтобы выживаемость реципиента не улучшилась. Понимание влияния терапевтических подходов на BMT, GVL и GVHD, таким образом, имеет важное значение. Благодаря антиген-представлению и цитокин-секретов способности стимулировать донора Т-клеток, получатель дендритных клеток (DCs) играют значительную роль в индукции GVHD. Таким образом, таргетинг получателя DCs становится потенциальным подходом для управления GVHD. Эта работа предоставляет описание новой платформы BMT, чтобы исследовать, как принимающие DCs регулируют ответы GVH и GVL после трансплантации. Также представлена эффективная модель BMT для изучения биологии GVHD и GVL после трансплантации.
Введение
Аллогенная гематопоатическая трансплантация стволовых клеток (BMT) является эффективной терапией для лечения гематологических злокачественных новообразований31,,2 через трансплантат-против лейкемии (GVL) эффект 3 . Тем не менее, донорские лимфоциты всегда монтировать нежелательные иммунологические атаки против тканей реципиента, процесс, называемый трансплантата против хозяина болезни (GVHD)4.
Murine модели GVHD являются эффективным инструментом для изучения биологии GVHD и GVL ответ5. Мыши являются экономически....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Экспериментальные процедуры были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и использованию Университета Центральной Флориды.
1. Индукция GVHD
ПРИМЕЧАНИЕ: Аллогенная трансплантация клеток костного мозга (БМ) (шаг 1.2) выполняется в течение 24 ч после облучения. Все описанные ниже процедуры выполняются в стерильной среде. Выполните процедуру в капюшоне культуры тканей и используйте фильтрованные реагенты.
- День 0: Подготовка получателя мышей.
- Используйте самки диких мышей типа (WT) на фоне BALB/c (CD45.2и H2kd)), 10-12 недель в качестве получателей.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Основная модель MHC-mismatched B6b(H2k b)-BALB/C (H2kd)тесно соответствовала развитию GVHD после трансплантации(рисунок 2). Все шесть клинических признаков ГВХД, установленных ранее Cooke et al.16, произошли у реципиентов, пересаженных СВ-В6 Т-клеток, но не у реципиентов, пересаженных только с БМ (шаг 1.5), которые представляли GVHD-отрицательную группу. В этой модели есть два этапа разработки GVHD. Во-первых, пик.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Использование стволовых клеток в соответствии с конкретным человеком является эффективным подходом для лечения передовых и устойчивых раковых заболеваний18. Малые молекулы фармацевтических препаратов, однако, уже давно остается основным направлением персонализированной терапии рака. С другой стороны, в клеточной терапии множество взаимодействий между донором и хозяином может решительно влиять на исходы лечения, такие как развитие GVHD после BMT1.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов.
Благодарности
Это исследование поддерживается Университетом Центральной Флориды колледж медицины запуска гранта (для HN), Университет Питтсбурга Медицинский центр Хиллман онкологический центр Хиллман онкологический центр запуска гранта (в HL), Соединенные Штаты NIH Грант #1P20CA210300-01 и Вьетнамского Министерства здравоохранения Грант #4694 / КД-BYT (к PTH). Мы благодарим д-ра Сюэ Чжун Ю в Медицинском университете южной Каролины за предоставление материалов для исследования.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0,5 М ЭДТА pH 8,0 100 мл | Fisher Scientific | BP2482100 | MACS буфер |
| 10X PBS | Fisher Scientific | BP3994 | MACS буфер |
| A20 В-клеточная лимфома | Университет Центральной Флориды | Внутренний | эксперимент GVL |
| ACC1 fl/fl | Jackson Lab | 30954 | GVL эксперимент |
| ACC1 fl/fl CD4cre | Университет Центральной Флориды | Эксперимент GVL | |
| Антибиотин Микрошарики | Miltenyi Biotec | 130-090-485 | Обогащение Т-клеток |
| Анти-человек/мышь CD45R (B220) | Thermo Fisher Scientific | 13-0452-85 | Обогащение Т-клеток |
| Анти-мышь B220 FITC | Thermo Fisher Scientific | 10452-85 | Анализ проточной цитометрии Антимышь |
| CD11c-AF700 | Thermo Fisher Scientific | 117319 | Анализ проточной цитометрии |
| Anti-mouse CD25 PE | Thermo Fisher Scientific | 12-0251-82 | Проточное окрашивание |
| Anti-mouse CD4 Biotin | Thermo Fisher Scientific | 13-0041-86 | Обогащение Т-клеток |
| Anti-mouse CD4 eFluor® 450 (Pacific Blue® замена) | Thermo Fisher Scientific | 48-0042-82 | Окрашивание под воздействием Flow |
| CD45.1 PE | Thermo Fisher Scientific | 12-0900-83 | Анализ проточной цитометрии |
| Anti-mouse CD8a APC | Thermo Fisher Scientific | 17-0081-83 | Анализ проточной цитометрии |
| Anti-mouse H-2Kb PerCP-Fluor 710 | Thermo Fisher Scientific | 46-5958-82 | Анализ проточной цитометрии |
| Anti-mouse MHC Class II-антитела APC | Thermo Fisher Scientific | 17-5320-82 | Анализ проточной цитометрии |
| Антимышиный TER-119 Биотин | Thermo Fisher Scientific | 13-5921-85 | Обогащение Т-клеток |
| Anti-Thy1.2 | Bio Excel | BE0066 | BM поколение |
| B6 fB-/- мыши | Университет Центральной Флориды | В доме | Получатели |
| B6. Ly5.1 (CD45.1+) мыши | Charles River | 564 | Доноры |
| BALB/c мыши | Charles River | 028 | Реципиенты трансплантатов |
| C57BL/6 мыши | Charles River | 027 | Доноры/реципиенты |
| CD11b | Thermo Fisher Scientific | 13-0112-85 | Обогащение Т-клеток |
| CD25-биотином | Thermo Fisher Scientific | 13-0251-82 | Обогащение Т-клетками |
| CD45R | Thermo Fisher Scientific | 13-0452-82 | Обогащение Т-клеток |
| CD49b Моноклональное антитело (DX5)-биотин | Thermo Fisher Scientific | 13-5971-82 | Обогащение Т-клеток |
| Клеточный фильтр 40 | мкМ Thermo Fisher Scientific | 22363547 | Клеточный препарат Клеточный |
| фильтр 70 мкМ | Thermo Fisher Scientific | 22363548 | Клеточный препарат |
| D-Luciferin | Goldbio | LUCK-1G | Сыворотка для визуализации плода |
| крупного рогатого скота (FBS) | Atlanta Bilogicals R& D system | D17051 | Cell Culture |
| Проточная цитометрия Пробирки | Fisher Scientific | 352008 | Анализ проточной цитометрии |
| FVB/NCrl | Charles River | 207 | Доноры |
| Липополисахарид (ЛПС) | Millipore Sigma | L4391-1MG | DC зрелая |
| колонка LS | Mitenyi Biotec | 130-042-401 | Клеточный препарат |
| MidiMACS | Miltenyi Biotec | 130-042-302 | Обогащение Т-клеток |
| Нью-Брансуик Galaxy 170R инкубатор | Eppendorf | Galaxy 170 R | Клеточная культура |
| Пенициллин+стрептомицинПенициллин/стрептомицин (10 000 единиц пенициллина / 10 000 мг/мл стрептококка) | GIBCO | 15140 | Медиа |
| RPMI 1640 | Thermo Fisher Scienctific | 11875-093 | Медиа |
| TER119 | Thermo Fisher Научный | 13-5921-82 | Обогащение Т-клеток |
| Ксеноген IVIS-200 | Перкин Элмер | Ксеноген IVIS-200 | Визуализация живых животных |
| X-RAD 320 Биологический облучатель | Прецизионный рентгеновский | X-RAD 320 | Облучение всего тела |
Ссылки
- Shlomchik, W. D. Graft-versus-host disease. Nature Reviews Immunology. 7, 340-352 (2007).
- Appelbaum, F. R. Haematopoietic cell transplantation as immunotherapy. Nature. 411, 385-389 (2001).
- Blazar, B. R., Murphy, W. J., Abedi, M.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
