Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Изоляция лейкоцитов от грудного молока человека для использования в антитела-зависимых клеточного фагоцитоза Ассей ВИЧ Цели

6.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/60149

⸱

6 сентября 2019 г.

 , 
1Division of Infectious Diseases, Icahn School of Medicine at Mount Sinai

В этой статье

Краткое содержание

Грудное молоко передает вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), хотя только 15% младенцев, накормленных ВИЧ-инфицированными матерями, заражаются. Грудное вскармливание младенцев глотать 105и 108 материнских лейкоцитов ежедневно, хотя эти клетки недостаточно изучены. Здесь мы описываем изоляцию лейкоцитов грудного молока и анализ их фагоцитарной способности.

Аннотация

Даже при отсутствии антиретровирусных препаратов, только 15% младенцев, накормленных ВИЧ-инфицированными матерями, заражаются, что свидетельствует о сильном защитном эффекте грудного молока (БМ). Если доступ к чистой воде и соответствующим детским смесям не является надежным, ВОЗ не рекомендует прекратить грудное вскармливание для ВИЧ-инфицированных матерей. Многочисленные факторы, вероятно, работают в тандеме, чтобы уменьшить передачу БМ. Грудное вскармливание младенцев глотать 105и 108 материнских лейкоцитов ежедневно, хотя то, что остается в значительной степени неясно, является вклад этих клеток в противовирусные качества БМ. В настоящее время мы стремились изолировать клетки от человека БМ для того, чтобы измерить антитела-зависимый клеточный фагоцитоз (ADCP), один из самых важных и всепроникающих врожденных иммунных реакций, бМ-фагоцитов против ЦЕЛЕй ВИЧ. Клетки были выделены из 5 образцов БМ человека, полученных на различных стадиях лактации. Изоляция осуществлялась с помощью мягкой центрифугации с последующим тщательным удалением молочного жира и повторным промыванием клеточных гранул. Флуоресцентные бусы, покрытые эпитопом конверта С ВИЧ (Env), использовались в качестве мишеней для анализа ADCP. Клетки были окрашены маркером поверхности CD45 для идентификации лейкоцитов. Было установлено, что активность ADCP была значительно выше контрольных экспериментов и воспроизводима с помощью АНТИтела 830А, характерного для ВИЧ.

Введение

Грудное молоко человека (BM) состоит из материнских клеток, которые являются жизнеспособными1. Состав клеток сильно влияет на стадию лактации, состояние здоровья матери и младенца, и индивидуальный вариант, который остается плохоизученным1,2,3,4. Учитывая, что БМ содержит 103й 105 лейкоцитов/мл, можно подсчитать, что грудное вскармливание младенцев глотать 105и 108 материнских лейкоцитов ежедневно5. Различные исследования in vivo показали, что материнские лейкоциты обеспечивают критический иммунитет к младенцу и функционируют далеко за пределами этих мест первоначального приема5,6,7,8 ,9,10,11. Все материнские клетки, проглоченные младенцем, обладают потенциалом для выполнения иммунных функций наряду или для компенсации собственных лейкоцитов младенца12.

Передача вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) от матери ребенку остается кризисом в странах с ограниченными ресурсами. Поскольку диарейные и респираторные заболевания являются причиной значительных показателей смертности среди младенцев в странах с ограниченными ресурсами, и эти болезни значительно сокращаются за счет исключительно грудного вскармливания, выгоды для ВИЧ-инфицированных матерей грудное вскармливание намного перевешивает риски13,14,15. Если доступ к чистой воде и соответствующим детским смесям не является надежным, ВОЗ не рекомендует прекратить грудное вскармливание для ВИЧ-инфицированных матерей16. Приблизительно 100 000 MTCTs через БМ происходят ежегодно; тем не менее, только 15% младенцев, накормленных грудью их ВИЧ-инфицированных матерей заражаются, предполагая сильный защитный эффект BM17,18,19,20,21. Многочисленные факторы, вероятно, работают в тандеме, чтобы предотвратить передачу инфекции. Важно отметить, что ВИЧ-специфические антитела (Abs) в БМ были коррелированы с сокращением MTCT и / или снижение младенческой смертности от ВИЧ-инфекции22,23. Что остается в значительной степени неясным является вклад клеточной фракции БМ его противовирусные качества.

Многие Abs облегчить различные антивирусные деятельности при посредничестве "постоянной" области молекулы иммуноглобулина, кристаллизуемый фрагмент (Fc), через взаимодействие с рецепторами FC (FcRs) найти практически на всех врожденных иммунных клеток, практически все из которых встречаются в человеке BM24. Антитела-зависимый клеточный фагоцитоз (ADCP) был продемонстрирован как необходимый для очистки вирусных инфекций и был недостаточно изучен в случае профилактики MTCT ВИЧ25,26,27, 28 , 29. Учитывая нехватку знаний о потенциальном вкладе активности ADCP бМ фагоцитов в профилактику MTCT ВИЧ, мы стремились разработать строгий метод изоляции клеток от человеческого БМ для проведения исследования ADCP при посредничестве клеток из БМ, полученный на различных стадиях лактации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Каждый участник этого исследования был набран и опрошен в соответствии с утверждением этического и институционального совета по обзору (IRB) с руководством и разрешением Программы по защите человеческих субъектов (PPHS) с использованием одобренного IRB протокол для получения образцов грудного молока.

1. Целевая подготовка микросферы

  1. Выберите соответствующий целевой антиген.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В этом примере был использован рекомбинантный белок V1V2-2F5K, который был разработан, чтобы имитировать тримерную вершину родного конверта ВИЧ30.
  2. Выполняйте биотинилацию с использованием коммерческого комплекта(Таблица материалов)в соответствии с протоколом производителя.
    1. Рассчитайте ммоль биотина реагента, чтобы добавить к реакции для 5-кратного избытка моляра с помощью формулы: ммоль биотин и белок мл x (мг белка/мл белка) x (5 ммоль биотин/ ммоль белка)30,31. Затем вычислите qL биотина реагента, чтобы добавить с помощью формулы: qL биотин мммол биотин х (1,000,000 л / л) х (L/10 ммоль).
    2. Равновесие биотин до комнатной температуры перед открытием. Растворите белок в 0,5-2,0 мл фосфатно-буферизированного сольятого раствора (PBS) согласно приведенным выше расчетам.
    3. Подготовьте раствор биотина объемом 10 мМ в диметилсульфокид (ДМСО) и добавьте соответствующий объем биотинового реагента 10 мМ в белковый раствор и инкубируют реакцию на льду в течение 2 ч или при комнатной температуре 30 мин.
  3. Удалить избыток биотина с помощью концентраторов белка (политерсульфон (PES) мембраны, 3 kDa молекулярного веса отсечения (MWCO), 0,5 мл; Таблица материалов) в соответствии с инструкциями производителя.
    1. Депозит образец в верхней камере спин-колонки и добавить PBS до 400 л. Cap, а затем вставить этот образец камеры в трубку сбора. Центрифуга при температуре 12 000 х при комнатной температуре 30 мин.
    2. Откажитесь от потока через и добавьте PBS до 400 Л. Повторите центрифугацию. Откажитесь от протекать и добавить PBS до 100 Л. Измерьте концентрацию белка спектрофотометром.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Белок может быть алицитирован и заморожен при -80 градусов до тех пор, пока не будет использован.

2. Антитела-зависимый клеточный фагоцитоз (ADCP) Ассай Плита Подготовка

  1. Спряжение биоинтинилатированного белка до 1 мкм микросферы ('бусы'; Таблица материалов) в соответствии с инструкциями производителя.
    1. На тарелку конъюгированных бусин, инкубировать 6 мкг белка с 12 йл бульонных бусин в 200 л 0,1% бычьего сыворотки альбумина (BSA)-PBS при комнатной температуре в течение 1 ч, вихревая мягко каждые 20 минут.
    2. Центрифуга при 13 000 х г в течение 5 мин. Отбросьте супернатант, вихрь мягко и повторно приостанавливайте в 1200 л 0,1% BSA-PBS. Повторите спина и мыть шаг 2x. Повторное действие в 1200 л 0,1% BSA-PBS.
  2. Aliquot 10 л раствора бисины в скважине в круглой нижней 96-хорошо пластины. Приготовьте разбавления антител или иммунной серы, представляющие интерес в 12 зЛ 2% HSA HBSS, обычно начиная с 50 мкг/мл антител или 1/100 разбавления сыворотки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В выборочных данных использовалось моноклональное антитело (mAb) 830A.
  3. Добавьте 10 зЛ тисированных антител/серы в тарелку бисера и инкубировать в течение 2 ч при 37 градусах Цельсия. Добавьте 200 л 2% HSA HBSS к каждой скважине и центрифугу пластины на 2000 х г в течение 10 мин.
  4. Тщательно удалите супернатант путем быстрого опрокидывания и декантирования жидкости из пластины колодцев в раковину, чтобы не беспокоить невидимые гранулы из биса.

3. Изоляция клеток грудного молока

  1. Получить грудное молоко человека от здоровых кормящих женщин, выраженных с помощью двойных электронных или ручных насосов. Изолировать клетки в пределах 4 ч экспрессии, сохраняя молоко при комнатной температуре.
  2. Используя 50 мл трубок, центрифуга 50 мл молока при 800 х г в течение 15 мин. Осторожно слить обезжиренное молоко и жир, оставляя клетки гранулы спокойно. Протрите внутреннюю часть трубки с без ворса протрите, чтобы удалить все жиры из стенки трубки.
  3. Добавьте 10 мл 2% сывороточного альбома человека в сбалансированном солейном растворе Хэнка (2% HSA HBSS (без Ca2) или Mg). Resuspend гранулы нежный пипетка, чтобы избежать активации клеток и апоптоза. Перенесите на трубку 15 мл и центрифугу при 450 х г в течение 10 мин.
  4. Налейте супернатант и повторите шаг 1.3. Затем аккуратно переприостанавливайте клетки в 1,2 мл 2% HSA HBSS в зависимости от ожидаемого числа клеток, и подсчитайте клетки гемоситометром или автоматизированным счетчиком клеток, отметив также жизнеспособность клетки.

4. ADCP асссе

ПРИМЕЧАНИЕ: Методы, описанные здесь, адаптированы из Ackerman et al.32.

  1. Добавьте 50 000 свежеисзоледов бМ-клеток к каждой пластине ADCP assay хорошо в 200 зл 2% HSA-HBSS. Инкубировать в течение 2 ч при 37 градусах Цельсия.
    1. Для контрольных экспериментов, предварительно инкубировать клетки при 37 кв с 10 мкг /мл ингибитор актина (цитохалазин-D), 50 мкг /мл FcR блокирующий агент (FcBlock), или сочетание обоих до их добавления к пластинам.
  2. Centrifuge пластины на 930 х г в течение 10 мин. Добавить 200 зл/ 2% HSA HBSS и повторить центрифугирование. Аккуратно удалите супернатант, как в шаге 2.7 и повторите мыть.
  3. Тщательно удалите супернатантные и пятнаные клетки для жизнеспособности с помощью 0,5 мкг/мл (окончательная концентрация) фиксируемое пятно жизнеспособности 450 на скважину в 50 Л 2% HSA HBSS. Инкубировать 20 мин при комнатной температуре в темноте. Centrifuge пластины на 930 х г в течение 10 мин и удалить супернатант, как в шаге 2.7. Добавить 200 л 2% HSA HBSS и центрифуги пластины снова следуют удаления супернатанта, как в шаге 2.7.
  4. После окрашивания жизнеспособности, пятна клеток для лейкоцитов маркеров интереса, минимально в том числе CD45 конкретных пятен, таких как PE-мышь анти-человеческого CD45 (клон HI30) в оптимизированной концентрации (1 мкг / л в 50 л 1% BSA HBSS в примере данных).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Любые линии конкретных маркеров интерес могут быть включены.
  5. Инкубировать 20 мин при комнатной температуре в темноте. Centrifuge пластины на 930 х г в течение 10 мин и удалить супернатант, как в шаге 2.7. Добавьте 200 л 1% BSA HBSS и повторите центрифугацию. Удалить супернатант. Исправьте клетки в 200 qL 0.5% формальдегида в темноте при комнатной температуре в течение 30 минут или на ночь при температуре 4 градусов по Цельсию. Охладите в темноте до анализа.

5. Анализ по цитометрии потока

  1. Выполните первоначальный gating для устранения дублетов на переднем рассеянии (FSC) против бокового рассеяния (SSC) участок и мусора (материал меньше, чем FSC 5000) (см. Рисунок 1). Используйте SSC против жизнеспособности пятно (V450 в данном случае) участок для устранения мертвых клеток (те, которые являются положительными для жизнеспособности пятно).
  2. Используйте SSC против CD45 участок дифференцировать основные классы лейкоцитов (гранулоциты, моноциты, лимфоциты), как широко описано33,34.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Эта классификация является лишь наводящим и линии конкретных маркеров, необходимых для подтверждения типа ячейки.
  3. Для всех клеток CD45 ,, или для каждого поднабора лейкоцитов интереса, измеряют активность ADCP путем gating с маркером на шарик-положительных клетках в гистограмме канала флуоресцеина изотоцианата (FITC), где обнаружены флуоресцентные бусы.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Отрицательные контрольные скважины, в которые не были добавлены бисер, будут указывать, где шарикоположительные клетки проявляются в гистограмме и, следовательно, где разместить маркер gating.
  4. Рассчитайте оценки ADCP как (средняя интенсивность флуоресценции (МФИ) бисо-положительных клеток) x (% от общего количества CD45 - клеток в положительной популяции). Используйте графическое программное обеспечение для анализа баллов при каждой концентрации Ab/сыворотки и для выполнения анализа области под кривой (AUC).
    ПРИМЕЧАНИЕ: ADCP считается положительным, если AUC больше, чем 3x стандартное отклонение ADCP оценка AUC неспецифических отрицательных mAb управления (в данном случае, 3865).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Молоко можно хранить при комнатной температуре или прохладнее (хотя и не замороженное); однако, учитывая, что мы наблюдали снижение жизнеспособности, когда молоко было сохранено очень холодно (данные не показали), и что проще собирать, хранить кратко, и транспортировать при температуре окружающей среды, рекомендуется, чтобы образцы не охлаждались, чтобы уменьшить изменчивость образца к образцу. В молоке, полученном через 7–183 дня после родов, концентрация клеток, определяемая автоматизир...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Метод цитометрии на основе потока для измерения активности ADCP, описанный в настоящем вопросе, был впервые описан в 2011году 30 и с тех пор был доказан надежным и цитируется в более чем 80 исследованиях. Описанный здесь протокол впервые адаптирует этот метод для использования с первичными клетками БМ. Предыдущие исследования fc-опосредоченной функциональности клетками BM больш ограничивали к измерению окислительных врывателей или гистологических-основанных анализов фагоцитоза используя клетки изо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы благодарим д-ра Сьюзан Золла-Пазнер на кафедре медицины и кафедре микробиологии в Медицинской школе Икан на горе Синай за отзыв рукописей. NIH/NICHD предоставила финансирование этого проекта под грантовый номер R21 HD095772-01A1. Кроме того, Р. Пауэлл был поддержан за счет средств из Департамента медицины, Отдел инфекционных заболеваний, Icahn школы медицины на горе Синай.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1 & микро; m Флуосферы NeutrAvidin-меченые микросферы Thermo FisherF8776
BD Pharmingen PE Мышь Anti-Human CD45BD560975
Сыворотка крупного рогатого скота АльбуминMP Biomedicals8810025
Corning полистирол V-образного дна 96-луночная пластина Corning 3894
Цитохалазин DSigma22144-77-0
EZ-Link NHS-LC-LC-Biotin kit Thermo Fisher21338
Falcon 15 мл конические центрифужные пробиркиCorning 
Falcon 50 мл конические центрифужные пробиркиCorning 352070
Корректируемая морилка для жизнеспособности 450 BD562247
Раствор формальдегидаSigma252549 
HBSS без кальция, магния или фенола RedLife Technologies14175-095
Human BD Fc BlockBD564219
Сывороточный альбумин человекаMP Biomedicals2191349
Kimtech Science Kimwipes Delicate Task WipersKimberly-Clark Professional 34120
PBS 1x pH 7.4Thermo Fisher10010023
полистирол 10 мл Серологические пипетки Corning 4488
Концентраторы белка PES, 3K MWCO, 0,5 млПирс88512
352196

Ссылки

  1. Hassiotou, F., Geddes, D. T., Hartmann, P. E. Cells in human milk: state of the science. Journal of Human Lactation. 29 (2), 171-182 (2013).
  2. Lonnerdal, B. Nutritional and physiologic significance of human milk proteins. The American Journal of Clinical Nutrition. 77 (6), 1537S-1543S (2003).
  3. Butte, N. F., Garza, C., Stuff, J. E., Smith, E. O., Nichols, B. L. Effect of maternal diet and body composition on lactational performance. The American Journal of Clinical Nutrition. 39 (2), 296-306 (1984).
  4. Dewey, K. G., Finley, D. A., Lonnerdal, B. Breast milk volume and composition during late lactation (7-20 months). Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 3 (5), 713-720 (1984).
  5. Hassiotou, F., Geddes, D. T. Immune cell-mediated protection of the mammary gland and the infant during breastfeeding. Advances in Nutrition. 6 (3), 267-275 (2015).
  6. Hanson, L. A. The mother-offspring dyad and the immune system. Acta Paediatrica. 89 (3), 252-258 (2000).
  7. Wirt, D. P., Adkins, L. T., Palkowetz, K. H., Schmalstieg, F. C., Goldman, A. S. Activated and memory T lymphocytes in human milk. Cytometry. 13 (3), 282-290 (1992).
  8. Jain, L., et al. In vivo distribution of human milk leucocytes after ingestion by newborn baboons. Archives of Disease in Childhood. 64 (7 Spec No), 930-933 (1989).
  9. Zhou, L., et al. Two independent pathways of maternal cell transmission to offspring: through placenta during pregnancy and by breast-feeding after birth. Immunology. 101 (4), 570-580 (2000).
  10. Tuboly, S., Bernath, S. Intestinal absorption of colostral lymphoid cells in newborn animals. Advances in Experimental Medicine and Biology. 503, 107-114 (2002).
  11. Cabinian, A., et al. Transfer of Maternal Immune Cells by Breastfeeding: Maternal Cytotoxic T Lymphocytes Present in Breast Milk Localize in the Peyer's Patches of the Nursed Infant. PLoS ONE. 11 (6), e0156762(2016).
  12. Filias, A., et al. Phagocytic ability of neutrophils and monocytes in neonates. BMC Pediatrics. 11, 29(2011).
  13. Natchu, U. C., et al. Exclusive breastfeeding reduces risk of mortality in infants up to 6 mo of age born to HIV-positive Tanzanian women. The American Journal of Clinical Nutrition. 96 (5), 1071-1078 (2012).
  14. Dewey, K. G., Heinig, M. J., Nommsen-Rivers, L. A. Differences in morbidity between breast-fed and formula-fed infants. The Journal of Pediatrics. 126 (5 Pt 1), 696-702 (1995).
  15. WHO. Collaborative Study Team on the Role of Breastfeeding on the Prevention of Infant Mortality. Effect of breastfeeding on infant and child mortality due to infectious diseases in less developed countries: a pooled analysis. Lancet. 355 (9202), 451-455 (2000).
  16. World Health Organization. Updates on HIV and Infant Feeding: The Duration of Breastfeeding, and Support from Health Services to Improve Feeding Practices Among Mothers Living with HIVWHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. World Health Organization. , World Health Organization. Geneva, Switzerland. (2016).
  17. Nelson, C. S., et al. Combined HIV-1 Envelope Systemic and Mucosal Immunization of Lactating Rhesus Monkeys Induces a Robust Immunoglobulin A Isotype B Cell Response in Breast Milk. Journal of Virology. 90 (10), 4951-4965 (2016).
  18. Fowler, M. G., Lampe, M. A., Jamieson, D. J., Kourtis, A. P., Rogers, M. F. Reducing the risk of mother-to-child human immunodeficiency virus transmission: past successes, current progress and challenges, and future directions. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 197 (3 Suppl), S3-S9 (2007).
  19. Shen, R., et al. Mother-to-Child HIV-1 Transmission Events Are Differentially Impacted by Breast Milk and Its Components from HIV-1-Infected Women. PLoS ONE. 10 (12), e0145150(2015).
  20. Fouda, G. G., et al. HIV-specific functional antibody responses in breast milk mirror those in plasma and are primarily mediated by IgG antibodies. Journal of Virology. 85 (18), 9555-9567 (2011).
  21. Van de Perre, P., et al. HIV-1 reservoirs in breast milk and challenges to elimination of breast-feeding transmission of HIV-1. Science Translational Medicine. 4 (143), 143sr143(2012).
  22. Milligan, C., Richardson, B. A., John-Stewart, G., Nduati, R., Overbaugh, J. Passively acquired antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) activity in HIV-infected infants is associated with reduced mortality. Cell Host & Microbe. 17 (4), 500-506 (2015).
  23. Pollara, J., et al. Association of HIV-1 Envelope-Specific Breast Milk IgA Responses with Reduced Risk of Postnatal Mother-to-Child Transmission of HIV-1. Journal of Virology. 89 (19), 9952-9961 (2015).
  24. Ackerman, M., Nimmerjahn, F. Antibody Fc. , Academic Press. Cambridge, MA. (2014).
  25. Huber, V. C., Lynch, J. M., Bucher, D. J., Le, J., Metzger, D. W. Fc receptor-mediated phagocytosis makes a significant contribution to clearance of influenza virus infections. Journal of Immunology. 166 (12), 7381-7388 (2001).
  26. Fujisawa, H. Neutrophils play an essential role in cooperation with antibody in both protection against and recovery from pulmonary infection with influenza virus in mice. Journal of Virology. 82 (6), 2772-2783 (2008).
  27. Chung, K. M., Thompson, B. S., Fremont, D. H., Diamond, M. S. Antibody recognition of cell surface-associated NS1 triggers Fc-gamma receptor-mediated phagocytosis and clearance of West Nile Virus-infected cells. Journal of Virology. 81 (17), 9551-9555 (2007).
  28. Yasui, F., et al. Phagocytic cells contribute to the antibody-mediated elimination of pulmonary-infected SARS coronavirus. Virology. 454-455, 157-168 (2014).
  29. Quattrocchi, V., et al. Role of macrophages in early protective immune responses induced by two vaccines against foot and mouth disease. Antiviral Research. 92 (2), 262-270 (2011).
  30. Ackerman, M. E., et al. A robust, high-throughput assay to determine the phagocytic activity of clinical antibody samples. Journal of Immunological Methods. 366 (1-2), 8-19 (2011).
  31. Jiang, X., et al. Rationally Designed Immunogens Targeting HIV-1 gp120 V1V2 Induce Distinct Conformation-Specific Antibody Responses in Rabbits. Journal of Virology. 90 (24), 11007-11019 (2016).
  32. Sanders, R. W., et al. A next-generation cleaved, soluble HIV-1 Env trimer, BG505 SOSIP.664 gp140, expresses multiple epitopes for broadly neutralizing but not non-neutralizing antibodies. PLoS Pathogens. 9 (9), e1003618(2013).
  33. Im, M., et al. Comparative quantitative analysis of cluster of differentiation 45 antigen expression on lymphocyte subsets. The Korean Journal of Laboratory Medicine. 31 (3), 148-153 (2011).
  34. Trend, S., et al. Leukocyte Populations in Human Preterm and Term Breast Milk Identified by Multicolour Flow Cytometry. PLoS ONE. 10 (8), e0135580(2015).
  35. Buescher, E. S., McIlheran, S. M. Polymorphonuclear leukocytes and human colostrum: effects of in vivo and in vitro exposure. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 17 (4), 424-433 (1993).
  36. Franca, E. L., et al. Human colostral phagocytes eliminate enterotoxigenic Escherichia coli opsonized by colostrum supernatant. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 44 (1), 1-7 (2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

CD45
Изоляция лейкоцитов от грудного молока человека для использования в антитела-зависимых клеточного фагоцитоза Ассей ВИЧ Цели
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.