Методическая статья

Количественная оценка прижатки опухолевых клеток в криосекциях лимфатических узлов

DOI:

10.3791/60531

⸱

9 февраля 2020 г.

 ,  ,  , 
1Molecular Oncology Center, Hospital Sírio-Libanês

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы описываем простой и недорогой метод, который позволяет количественно количественно клеевых опухолевых клеток криосекций лимфатических узлов (LN). LN-приверженных опухолевых клеток легко идентифицируются с помощью световой микроскопии и подтверждены методом, основанным на флуоресценции, давая индекс адгезии, который показывает сродство опухолевых клеток к LN parenchyma.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Опухолевые лимфатические узлы (ЛН) – это не просто фильтры опухолевых отходов. Они являются одним из наиболее распространенных региональных сайтов временного проживания рассеянных опухолевых клеток у пациентов с различными видами рака. Обнаружение этих LN-проживающих опухолевых клеток является важным биомаркером, связанным с плохим прогнозом и адъювантной терапии решений. Последние модели мыши показали, что LN-проживающих опухолевых клеток может быть существенным источником злокачественных клеток для далеких метастазах. Способность к количественной оценке клея опухолевых клеток к LN parenchyma является критическим датчиком в экспериментальных исследованиях, который фокусируется на выявлении генов или сигнальных путей, имеющих отношение к лимфатическому/метастатическому распространению. Поскольку LNs являются сложными 3D-структурами с различными проявлениями и композициями в секциях тканей в зависимости от плоскости секции, их матрицы трудно воспроизвести экспериментально in vitro полностью контролируемым способом. Здесь мы описываем простой и недорогой метод, который позволяет количественно йоховых опухолевых клеток в LN криосекций. Используя последовательные разделы того же LN, мы адаптируем классический метод, разработанный Бродтом, для использования нерадиоактивных меток и непосредственно подсчитываем количество примыкающих опухолевых клеток на поверхность LN. LN-приверженных опухолевых клеток легко идентифицируются с помощью световой микроскопии и подтверждаются методом, основанным на флуоресценции, давая индекс адгезии, который показывает клеточной связывания с LN parenchyma, что является наводящим свидетельством молекулярных изменений в сродстве связывания интехрин с их коррелятl LN-лигандами.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Метастазы рака является основной причиной неудачи лечения и доминирующей опасной для жизни аспект рака. Как постулируется 130 лет назад, метастатическое распространение результатов, когда элита рассеянных опухолевых клеток (DTCs, "семена") приобретают конкретные биологические способности, которые позволяют им уклоняться от первичных участков и установить злокачественный рост в отдаленных местах ("почва")1. В последнее время появилось несколько новых концепций, касающихся отношений "семени и почвы", таких как индукция преметастатических ниш (концептуальная как "плодородная почва", необходимая для процветания "семеней", самопосев основе первичных опухолей с помощью ДТК, "семя" в вторичных органах и параллельная модель прогрессирования метастаза2.

Для большинства твердых злокачественных новообразований, DTCs может проживать и быть обнаружены во многих мезенхимальных органов, таких как костный мозг и лимфатические узлы (ЛН) у пациентов с или без доказательств клинических метастазов. Потому что опухолевые LNs являются первым местом регионального распространения DTCs, Статус LN является важным прогностичным показателем и часто ассоциируется с адъювантной терапии решений3. Для некоторых типов опухоли, корреляция между статусом LN и худшие исходы сильна, в том числе головы и шеи4,5, грудь6, простата7, легких8, желудочный9, колоректальный10,11 и рака щитовидной железы12.

LNs являются мелкими яйцеклетки органов лимфатической системы, которые покрыты ретикулярных клеток и заключены с лимфатических сосудов. Эти органы абсолютно необходимы для функционирования иммунной системы13. LNs выступать в качестве привлекательных платформ для иммунных циркулирующих клеток, в результате чего лимфоциты и антиген-представления клеток вместе14. Тем не менее, LNs также привлекают циркулирующие опухолевые клетки. На протяжении десятилетий, LNs были изображены как пассивные маршруты транспортировки для метастатических опухолевых клеток. Тем не менее, недавние исследования показали, что опухолевые клетки могут также направляться к LNs хемотаксией (хемокины) и/или гатотактическими (внеклеточными матричными элементами) сигналами, выделяемыми лимфатическим эндотелием15. В качестве примеров, переэкспрессия рецептора CCR7 в опухолевых клетках облегчает руководство метастатическими клетками меланомы к опухолево-дренажным LNs16. Кроме того, внеклеточные белки LN обеспечивают клеевую эшафот для набора и выживания циркулирующих опухолевых клеток17. В самом деле, опухолевые LNs обеспечивают плодородную почву для посева DTCs, которые могут быть сохранены в пролиферирующих или спящих состояний по конкретным LN микроэкологических сигналов18. Окончательная судьба этих LN-проживающих DTCs является спорным; некоторые работы предполагают, что эти клетки являются пассивными показателями метастатического прогрессирования19, в то время как другие предполагают, что они, скорее всего, основатели сопротивления (путем самостоятельного посева первичных сайтов) и / или выступать в качестве клеточных резервуаров для метастазах (распространение "семена" для роста третичного рака)20,21. В последнее время, используя доклинические модели, было продемонстрировано, что часть этих LN-проживающих DTCs активно вторглись кровеносные сосуды, вошел в кровообращение и колонизировал легкие21.

Учитывая, что наличие раковых клеток в LNs является маркером для агрессивности рака и инвазивности, в этом исследовании, мы оптимизировали классический метод, разработанный Brodt22 для количественного измерения опухолевых клеток адгезии для LNs in vitro. Использование флуоресценции на основе асссе позволило нам разработать недорогой, быстрый, чувствительный и экологически чистый (нерадиоактивный) протокол для обнаружения клеевых изменений между опухолевыми клетками и LN криосекций. Использование MCF-7 раковых клеток молочной железы, выражающих различные уровни экспрессии гена NDRG4 и крысl LN замороженных разделов для примера метода, мы показали, что этот протокол позволил хорошую корреляцию между опухолевой клетки адгезии к LNs in vitro и LN метастазировать наблюдается у больных раком молочной железы24.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

LNs были извлечены из свежих туш здоровых взрослых крыс Wistar жертвуя шейки матки дислокации. Мы следовали Рекомендациям NIH по боли и бедствию в лабораторных животных, и все процедуры были одобрены Комитетом по этике и исследованиям животных Научно-образовательного института больницы Серио-Либанес (CEUA P 2016-04).

ПРИМЕЧАНИЕ: Все свежие замороженные ткани считаются биоопасными и должны быть обработаны с использованием соответствующих мер предосторожности биобезопасности.

1. Лимфаденэктомия и криосекция

  1. Поместите свежие туши взрослых крыс Wistar (180-220 г), лежащих в подошве на чистую доску для вскрытия при комнатной температуре.
    ПРИМЕЧАНИЕ: LNs должны быть собраны до 30 мин после эвтаназии.
  2. Спрей тушу крыс с 70% изопропиловый спирт и использовать стерилизованные инструменты для сбора LN.
  3. Поднимите брюшной кожи с помощью пинцета и открыть полость с медиальным разрезом, не повреждая основные ткани, подвергая брюшной внутренности. Вытяните кишечник и грудной клетки и брюшной половины становятся видимыми(рисунок 1).
  4. Тщательно акцизных LNs от каждой крысы с использованием тупых ножницами кончик, чтобы избежать ранения верхней мезентерической артерии, лежащей позади.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В зависимости от расположения резеченного лимфатического узла, необходимо очистить прилагаемые к нему другие ткани, такие как мезентерическая ткань.
  5. Урожай LNs в 15 мл конических труб, содержащих 5 мл стерильных фосфатов буферного солей (PBS).
  6. Правильно отбросить туши крыс.
  7. Удалить свежие LNs из PBS, свернуть и высушить узел на сухой фильтруебумаги. Поместите его в небольшое блюдо Петри и добавьте встраивающий раствор для замороженных образцов тканей (O.C.T.) в течение 2 мин.
  8. Передача и ориентация LN лицом вниз в нужном положении в базе криомолд, с достаточно O.C.T, чтобы покрыть его. Избегайте пузырьков вблизи ткани. Поверхность секции – дно криомолда.
  9. Немедленно заморозьте криомольд в холодильнике пенополистирола с сухим льдом. Когда есть еще небольшая часть размороженной O.C.T. (20-35 с), перенесите образец в алюминиевую фольгу и поместите его в кулер с сухим льдом, продолжая замораживать другие образцы. В конце храните все образцы при -80 градусов по Цельсию до раздела.
  10. Раздел LN с криостатом регулирующей толщины секции до 5-8 мкм. Передача крисекций на микроскоп слайды.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Перед секцией, удалите замороженные образцы из морозильной камеры -80 градусов и дайте им уравновесить температуру в криостатной камере микротомов при температуре -22 градусов по Цельсию в течение примерно 30 мин. LN-содержащие слайды могут храниться при -80 градусов по Цельсию в течение одного месяца.

2. Клеточная маркировка с флуоресцентными красителями

ПРИМЕЧАНИЕ: Флуоресцентные красители широко используются в клеточной биологии. Мы предпочитаем использовать длинноцепочечную маркировку диалилкарбоцианов (DiI (C18),возбуждение 549 нм, эмиссии 565 нм), потому что они яркие, стабильные и могут быть добавлены непосредственно в культурные носители, не влияющие на жизнеспособность клеток или клеевые клеитные свойства25,26.

  1. Диссоциативные клетки, растущие в идеальных условиях (т.е. в полной среде) и повторно прикрепляемые в среде, свободной от сыворотки, при плотности 106 клеток/мл.
  2. Добавьте 1 мл клеточной суспензии (106 ячеек) в коническую трубку 15 мл и наклейте этикетку дил (C18) (2 мкг/мл) в течение 10 мин при 37 градусах Цельсия.
    ПРИМЕЧАНИЕ: После 5 мин, осторожно агитировать трубки, чтобы избежать отложения клеток и недостаточное замедленное количество клеток. Более крупные плотности требуют более длительного времени инкубации для равномерного окрашивания. Оптимальное время инкубации для окрашивания клеток зависит от клеточной линии. Это может быть лучше количественно с помощью обычного канала обнаружения цитометрии потока FL2(Рисунок 2A).
  3. Centrifuge помечены подвесной трубки на 300 х г в течение 4 мин.
  4. Удалить супернатант и вымыть дважды в 10 мл сыворотки свободной среде. Восстановить клетки, как красные гранулы. Resuspend клетки на 106 клеток/мл в сыворотке свободной среде с 0,1% бычьего сыворотки альбумина (BSA).

3. Предварительное покрытие Блюда с поли-L-лизин решение или BSA как посевной контроль (необязательно)

ПРИМЕЧАНИЕ: Мы использовали блюда культуры клеток, предварительно покрытые PLL в качестве положительных поверхностей контроля нагрузки, чтобы гарантировать, что различные экспериментальные группы опухолевых клеток были посеяны в том же количестве, а также BSA покрытием поверхностей в качестве отрицательного контроля.

  1. В стерильных условиях, чтобы подготовить PLL- или BSA покрытием скважин, добавить 300 л PLL (0,1% Ж / V в H2O) или BSA (разбавленный на 2,5% ж / вар в H2O) непосредственно к 24-хорошо пластины и инкубировать ночь на 4 градуса по Цельсию.
  2. Удалить раствор путем аспирации, аккуратно промыть поверхность стерильным PBS и высушить пластину при комнатной температуре в тканевой культуры капот перед посевом клеток.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Окончательные тома PLL или BSA должны быть скорректированы в зависимости от области различных пластин скважины.

4. Посев флуоресцентные опухолевые клетки на LN Криосекции или PLL / BSA покрытием Уэллс

ПРИМЕЧАНИЕ: В качестве экспериментального контроля, мы использовали (1) клеточной культуры блюда предварительно с PLL или BSA и (2) последовательных разделов того же LN за эксперимент (см. эту деталь на рисунке 2D), где последний будет минимизировать региональные изменения в внеклеточной матрицы (ECM) состав каждого раздела LN, который, в свою очередь, может диктовать скорость сцепения клеток. Для следующего контроля опухолевых клеток, выберите высокое качество и последовательные криосекции LN.

  1. Аккуратно мыть криосекции дважды с PBS и регидратируетс PBS в течение 15 минут при комнатной температуре.
  2. Блок неспецифической прилипки к криосекциям с 2,5% BSA в течение 30 мин при 37 градусах Цельсия. Используйте иммуногистохимии мыть камеры и колыбели ламина, чтобы убедиться, что весь O.C.T был удален во время стирки и инкубаций.
  3. Слейте избыток BSA на сухое бумажное полотенце, высушите контуры секций LN ватным тампоном и окружите секции с помощью пера PAP.
  4. Для оценки спайков опухолевых клеток добавьте 100 кЛ клеточной подвески (от шага 2.4) к каждому окруженному разделу LN или хорошо в 24-хорошей пластине с покрытием PLL и поместите его в увлажненную камеру стойки для 1-2 ч при 37 градусах по Цельсию в обычном инкубаторе культуры клеток.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Окончательный объем суспензии клеток должен быть скорректирован в зависимости от области различных окруженных LNs.
  5. Аккуратно смойте неадекторные клетки четыре раза с помощью PBS. Исправьте оставшиеся флуоресцентные клетки с 3,7% формальдегида в PBS в течение 15 минут при комнатной температуре.

5. Ручная количественная оценка индекса клея

ПРИМЕЧАНИЕ: Клейиндекс (т.е. опухолевые клетки/ LN мм2) был достигнут с помощью 10X цели и вручную подсчета числа опухолевых клеток, легко определить светмикроскопии и подтверждены флуоресценционной микроскопии (Рисунок 2D), на лимфатические области узла нескольких независимых полей (получено с помощью Национального института здравоохранения ImageJ / программное обеспечение).

  1. Используйте флуоресцентный микроскоп с целью 10-кратный способ, чтобы взять отдельные изображения TIFF в двух каналах, соответствующих ярким и красно-флуоресцентным полям(рисунок 2D). Назовите и сохраните эти изображения систематически.
  2. Запустите ImageJ/FIJI, откройте изображения и установите шкалу. Необходимо использовать калибровозаваемую шкалу (например, микрометрическую линейку 1 мм)(рисунок 2С).
  3. Откройте фотографию микрометрической линейки (или микрометра сцены), выберите инструмент "Прямая линия" и нарисуйте прямую линию, определяющую известное расстояние.
  4. В меню «Анализ» выберите шкалу набора. Расстояние в пикселях будет заполнено в зависимости от длины (в пикселях) линии, нарисованной в шаге 5.3. Известное расстояние будет заполнено реальным расстоянием (в данном случае, в миллиметрах) и единицей длины в блоке длинного поля (в данном случае в миллиметрах).
  5. Нажмите на Global (эта калибровка относится ко всем изображениям, открытым в этой сессии ImageJ/FIJI) и нажмите OK.
  6. Количественная оценка области лимфатических узлов: Выберите инструмент Wand и путем двойного нажатия, откройте настройки инструмента Wand. Установите режим до 8-подключаемых. Нажмите на фото и установите допуск до тех пор, пока не выберите все лимфатические узлы на фотографии и нажмите OK. Для измерения площади, открытый анализ Мера (CTRL и M). Область выражается в единицах, установленных ранее.
  7. Количественная оценка опухолевых клеток: Откройте световые микроскопии/флуоресценции в программном обеспечении FIJI. Выберите плагины Анализ (ru) Счетчик ячеек Счетчик ячейки. Нажмите на фотографию, чтобы быть количественно и нажмите кнопку Инициализация в окне счетчика ячейки. Выберите тип счетчика (1-8) и нажмите на ячейки на фотографии. Чтобы инициализировать следующую фотографию, нажмите кнопку Сбросить в окне счетчика ячейки, откройте новую фотографию и повторите все шаги.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Индекс слипа LN выражается как количество опухолевых клеток приверженцев на площадь LN (клетки/мм2).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы иллюстрируем анализ, оценивая LN клей потенциал красных флуоресцентных MCF-7 раковых клеток молочной железы, выражающих различные уровни гена NDRG4 (именуемые NDRG4-положительных и NDRG4-отрицательных клеток), отрицательный модулятор бета1-инегрин кластеризации на поверхности клетки24, путем изучения фракций крысы LN-придерживающихся клеток опухоли. Примеры необработанных изображений этого протокола показаны на рисунке 2. Как видно ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Распространение лимфатических систем раковых клеток требует различных сложных клеточных событий. Они инициируются с отслоение клеток от первичной опухоли и ремоделирования внеклеточной матрицы (ECM) архитектуры, и поддерживаются стойкими хемотаксиса и активной миграции через афферентных лимфатических на пути к дозорной LNs. Если раковые клетки придерживаются и выжить в LNs, они могут легко распространиться на другие вторичные органы. Здесь мы описываем простой метод быстрого и недорогого функционального анализа специфиче...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим д-ра Розану Де Лима Пагано и Ана Каролина Пинейро Кампос за техническую помощь. Эта работа была поддержана грантами от: FAPESP - Сан-Паулу исследовательский фонд (2016/07463-4) и Людвиг Институт исследований рака (LICR).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
15 мл Конические пробиркиCorning352096
2-пропанолMerck109634
клеточных культурLaminar Flow
Esco для дискаLeica14020139126
бычья сыворотка альбуминSigma-AldrichA9647-100
Колба для клеточных культур T-25 см<суп>2Corning430372
КриостатLeicaCM1860 UV
Криостат-щетка с магнитомLeica14018340426
DiIC18 Cell TrakerКраситель Молекулярные зондыV-22885
Фетальная бычья сыворотка (FBS)Life Technologies12657-029
Флуоресцентный микроскопNikon Eclipse 80
Forma Series II CO2Thermo Scientific
ФормальдегидSigma-Aldrich252549
высокопрофильная одноразовая бритваLeica14035838926
Инкубационный куб (IHC)KASVIK560030
инвертированный микроскопOlympusCKX31
Isofluran 100 млКристá lia
Liquid Bloquer Super Pap PenAbcam, реагенты для медико-биологических наукab2601
Оптимальная температура резки "OCT" соединениеСакура4583
Фосфатно-солевой буфер (PBS)Life Technologies70011-044
Поли-L-лизинSigma-AldrichP8920
RPMIGibco31800-022
Серологические пипетки 1 млJet BiofilGSP010001
серологические пипетки 10 млJet BiofilGSP010010
серологические пипетки 2 млJetBiofil GSP010002
серологические пипетки 5 млJet BiofilGSP010005
Серологическая пипетка Easypet 3Eppendorf
Tissue-Tek cryomoldSakura4557
Trypan Blue 0.4%InvitrogenT10282
TrypsinInstituto Adolfo LutzATV
Настольный контейнер для инкубатор серологические пипетки 50 мл Jet Biofil GSP010050

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Paget, S. The distribution of secondary growths in cancer of the breast. Cancer and Metastasis Reviews. 8 (2), 98-101 (1989).
  2. Liu, Q., Zhang, H., Jiang, X., Qian, C., Liu, Z., Zuo, D. Factors involved in cancer metastasis: a better understanding to seed and soil hypothesis. Molecular Cancer. 16 (1), 176(2017).
  3. Padera, T. P., Meijer, E. F., Munn, L. L. The Lymphatic System in Disease Processes and Cancer Progression. Annual Review of Biomedical Engineering. 18, 125-158 (2016).
  4. Leemans, C. R., Tiwari, R., Nauta, J. J., van der Waal, I., Snow, G. B. Regional lymph node involvement and its significance in the development of distant metastases in head and neck carcinoma. Cancer. 71 (2), 452-456 (1993).
  5. Kowalski, L. P., et al. Prognostic significance of the distribution of neck node metastasis from oral carcinoma. Head & Neck. 22 (3), 207-214 (2000).
  6. McGuire, W. L. Prognostic factors for recurrence and survival in human breast cancer. Breast Cancer Research and Treatment. 10 (1), 5-9 (1987).
  7. Gervasi, L. A., et al. Prognostic significance of lymph nodal metastases in prostate cancer. The Journal of Urology. 142 (2 Pt 1), 332-336 (1989).
  8. Naruke, T., Suemasu, K., Ishikawa, S. Lymph node mapping and curability at various levels of metastasis in resected lung cancer. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 76 (6), 832-839 (1978).
  9. Sasako, M., et al. D2 lymphadenectomy alone or with para-aortic nodal dissection for gastric cancer. The New England Journal of Medicine. 359 (5), 453-462 (2008).
  10. Chang, G. J., Rodriguez-Bigas, M. A., Skibber, J. M., Moyer, V. A. Lymph node evaluation and survival after curative resection of colon cancer: systematic review. Journal of the National Cancer Institute. 99 (6), 433-441 (2007).
  11. Watanabe, T., et al. Extended lymphadenectomy and preoperative radiotherapy for lower rectal cancers. Surgery. 132 (1), 27-33 (2002).
  12. Machens, A., Dralle, H. Correlation between the number of lymph node metastases and lung metastasis in papillary thyroid cancer. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 97 (12), 4375-4382 (2012).
  13. Dijkstra, C. D., Kamperdijk, E. W. A., Veerman, A. J. P. Normal Anatomy, Histology, Immunohistology, and Ultrastructure, Lymph Node, Rat. Hemopoietic System. Jones, T. C., Ward, J. M., Mohr, U., Hunt, R. D. , 129-136 (1990).
  14. Gretz, J. E., Anderson, A. O., Shaw, S. Cords, channels, corridors and conduits: critical architectural elements facilitating cell interactions in the lymph node cortex. Immunological Reviews. 156, 11-24 (1997).
  15. Podgrabinska, S., Skobe, M. Role of lymphatic vasculature in regional and distant metastases. Microvascular Research. 95, 46-52 (2014).
  16. Wiley, H. E., Gonzales, E. B., Maki, W., Wu, M. T., Hwang, S. T. Expression of CC chemokine receptor-7 and regional lymph node metastasis of B16 murine melanoma. Journal of the National Cancer Institute. 93 (21), 1638-1643 (2001).
  17. Chen, J., Alexander, J. S., Orr, A. W. Integrins and their extracellular matrix ligands in lymphangiogenesis and lymph node metastasis. International Journal of Cell Biology. 2012, 853703(2012).
  18. Müller, M., Gounari, F., Prifti, S., Hacker, H. J., Schirrmacher, V., Khazaie, K. EblacZ tumor dormancy in bone marrow and lymph nodes: active control of proliferating tumor cells by CD8+ immune T cells. Cancer Research. 58 (23), 5439-5446 (1998).
  19. Cady, B. Regional lymph node metastases; a singular manifestation of the process of clinical metastases in cancer: contemporary animal research and clinical reports suggest unifying concepts. Annals of Surgical Oncology. 14 (6), 1790-1800 (2007).
  20. Klein, C. A. The systemic progression of human cancer: a focus on the individual disseminated cancer cell-the unit of selection. Advances in Cancer Research. 89, 35-67 (2003).
  21. Pereira, E. R., et al. Lymph node metastases can invade local blood vessels, exit the node, and colonize distant organs in mice. Science. 359 (6382), 1403-1407 (2018).
  22. Brodt, P. Tumor cell adhesion to frozen lymph node sections-an in vitro correlate of lymphatic metastasis. Clinical & Experimental Metastasis. 7 (3), 343-352 (1989).
  23. Badylak, S. F. Xenogeneic extracellular matrix as a scaffold for tissue reconstruction. Transplant Immunology. 12 (3-4), 367-377 (2004).
  24. Jandrey, E. H. F., et al. NDRG4 promoter hypermethylation is a mechanistic biomarker associated with metastatic progression in breast cancer patients. NPJ Breast Cancer. 5, 11(2019).
  25. Honig, M. G., Hume, R. I. Dil and diO: versatile fluorescent dyes for neuronal labelling and pathway tracing. Trends in Neurosciences. 12 (9), 333(1989).
  26. Costa, E. T., et al. Intratumoral heterogeneity of ADAM23 promotes tumor growth and metastasis through LGI4 and nitric oxide signals. Oncogene. 34 (10), 1270-1279 (2015).
  27. Song, J., et al. Extracellular matrix of secondary lymphoid organs impacts on B-cell fate and survival. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (31), E2915-E2924 (2013).
  28. Kramer, R. H., Rosen, S. D., McDonald, K. A. Basement-membrane components associated with the extracellular matrix of the lymph node. Cell and Tissue Research. 252 (2), 367-375 (1988).
  29. Sobocinski, G. P., Toy, K., Bobrowski, W. F., Shaw, S., Anderson, A. O., Kaldjian, E. P. Ultrastructural localization of extracellular matrix proteins of the lymph node cortex: evidence supporting the reticular network as a pathway for lymphocyte migration. BMC Immunology. 11, 42(2010).
  30. Pathak, A. P., Artemov, D., Neeman, M., Bhujwalla, Z. M. Lymph Node Metastasis in Breast Cancer Xenografts Is Associated with Increased Regions of Extravascular Drain, Lymphatic Vessel Area, and Invasive Phenotype. Cancer Research. 66 (10), 5151-5158 (2006).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

DiIPBS

Похожие статьи