Мы разработали простой анализ цитометрии потока для оценки связывания PD-1-блокирующих антител к Т-клеткам, требуя только капли периферической крови от онкологических больных.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Мониторинг PD-1-Блокирование антител, связанных с Т-клеток, полученных от капли периферической крови
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Ингибиторы иммунных контрольных точек, в том числе PD-1-блокирующие антитела, значительно улучшили результаты лечения при различных видах рака. Фармакологическая эффективность этих иммунотерапевтических препаратов является длительной, простирающейся даже после прекращения их инъекций, из-за постоянной концентрации крови. Здесь мы разработали простой анализ цитометрии потока для оценки Т-клеточного связывающего статуса PD-1-блокирующих антител ниволумаба и пембролизумаба. Как тест глюкозы, этот анализ требует только одну каплю периферической крови. Визуализация связывания антител на Т-клетках надежнее, чем измерение концентраций в крови антител. Кроме того, при необходимости, мы можем потенциально проанализировать многие отличительные иммунных маркеров на Т-клеток, связанных с PD-1-блокирующих антител. Таким образом, это простая и минимально инвазивная стратегия для анализа фармакологического эффекта PD-1-блокирование антител у онкологических больных.
Введение
PD-1-блокирующие антитела стали стандартным выбором для лечения различных видов рака, в том числе немелкоклеточного рака легких (NSCLC)1,2,3,4. Они показывают замечательный терапевтический эффект в подмножестве больных раком, которые не ответили на обычные цитотоксические химиотерапии. Тем не менее, ингибиторы иммунной контрольной точки (ИКИ), которые включают PD-1-блокирующие антитела, может вызвать уникальный и четкий спектр побочных явлений, называемых иммунных побочных явлений (irAEs)5. Хотя irAEs может повлиять п....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Выборка проводилась во время обычных клинических процедур. Все образцы человека были получены после получения информированного согласия субъектами в соответствии с Хельсинкской декларацией и с одобрения совета по этике Высшей школы медицины, Университета Осаки, Япония (15383 и 752).
1. Подготовка образца крови и окрашивание
- Сбор образцов всей крови в трубки для сбора крови, содержащие этилен диамин тетра-ацетической кислоты (ЭДТА).
ПРИМЕЧАНИЕ: Сбор крови может быть выполнен с помощью обычной иглы или крови ланцет. - Передача 20 Зл образцов цельной крови в 5 мл круглого дна полистирола потока цитометрии труб.
ПРИМЕЧАН....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Стратегия gating и анализ цитометрии потока(Рисунок 1) может обнаружить PD-1-блокирующий связывание антител к Т-клеткам, полученным от капли периферической крови пациента NSCLC. Перед PD-1-блокирующий антитела вводят, нет человека IgG4-положительных CD8 или CD4 Т-клетки присутствуют, и PD-1 выражение может быть подтверждено PD-1-обнаружение антитела (EH12.1) (Рисунок 2A). После введения ниволумаба или пембролизумаба, IgG4 (ниволумаб, пембролизум.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В этой статье мы сообщаем метод с помощью цитометра потока для обнаружения PD-1-блокирующих антител, связанных с Т-клетками, полученными из капли периферической крови, которую мы первоначально разработали для обнаружения ниволумаба10. Хотя этот метод очень прост и прост в выполнении, следует отметить два важных момента для получения точных результатов. Один из них заключается в том, что для обнаружения молекул PD-1 следует использовать соответствующее антитело, которое конкурирует с ниволумабом и .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была поддержана грантами С.К. от Японского общества содействия науке KAKENHI (JP17K16045) и Японского агентства медицинских исследований и разработок (JP18cm0106335 и 19cm0106310).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 10X Буфер для лизиса эритроцитов (многовидовой) | Thermo Fisher Scientific | 00-4300-54 | 50 мл |
| APC/Cyanine7 антитела к CD4 человека | BioLegend | 300518 | клон RPA-T4 |
| BD FACS Canto II проточный цитометр | BD | ||
| Brilliant Violet 510 антитело против человеческого CD8a | BioLegend | 301048 | клон RPA-T8 |
| фосфата Дульбекко Буферный физиологический раствор | nacalai tesque | 14249-95 | 500 мл |
| Falcon Круглодонные полистирольные пробирки | STEMCELL Technologies | 352058 | 5 мл |
| FcR Блокирующий реагент, человеческий | Miltenyi Biotec | 130-059-901 | 2 мл |
| FLOWJO | BD | ||
| Gibco Фетальная бычья сыворотка | Thermo Fisher Scientific | 12676029 | 500 мл |
| Мышь IgG1 моноклональная - контроль изотипа | abcam | ab81200 | |
| Мышь моноклональная Античеловек IgG4 Fc | abcam | ab99825 | Клон HP6025 |
| Тихоокеанская голубая мышь Античеловек CD3 | BD | 558117 | Клон UCHT1 |
| PE-Cy7 Мышь против человека CD279 (PD-1) | BD | 561272 | Клон EH12.1 |
| PE-Cy7 Мышь IgG1 κ Управление изотипом | BD | 557646 |
Ссылки
- Gong, J., Chehrazi-Raffle, A., Reddi, S., Salgia, R. Development of PD-1 and PD-L1 inhibitors as a form of cancer immunotherapy: a comprehensive review of registration trials and future considerations. Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 6 (1), 8(2018).
- Borghaei, H., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
