Основным преимуществом этой модели инфузии СМА для крыс является ее стойкость и долговечность в течение не менее 24 часов у подавляющего большинства животных. Инфузия антикоагулянта может удлинить этот временной интервал. Модель позволяет проводить достоверную инфузию препаратов избирательно в брыжеечную область, нацеливаясь на тонкую кишку и проксимальную часть толстой кишки.
Несколько шагов имеют решающее значение для успеха техники. Для достижения канюляции в очень маленьком сосуде важно отбирать крыс весом не менее 400 г; пол и возраст не имеют значения. Также важно правильно выбрать хирургические инструменты и тип канюли. Здесь меньшая полиуретановая канюля (0,4 мм O.D, 0,25 мм I.D.) вставляется на 1 см в большую канюлю (0,93 мм O.D, 0,5 мм I.D.) для получения функционального и полезного катетера, позволяющего как соединения с малой артерией, так и с более крупной инфузионной системой.
Первым хирургическим критическим этапом является очистка СМА и ветви, идентифицированной для канюляции, из окружающей жировой ткани (этап 3.5). Это помогает избежать введения канюли между тканью и артерией, что является распространенной ошибкой. Однако этот этап очистки сложен, так как маленькая ветвь СМА хрупкая и легко повреждается. Если ветка травмирована, можно остановить кровотечение лигатурой и выбрать другую проксимальную ветвь, чтобы не тратить животное впустую.
Чтобы предотвратить образование пузырьков воздуха внутри канюли и избежать газовой эмболии, канюля должна быть заполнена физиологическим раствором до кончика перед введением в ветку. Чтобы закрепить канюлю на месте, нанесение хирургической нити (4-0 шелка) должно быть между точкой введения в артерию и кончиком канюли, непосредственно поверх сосуда вокруг катетера. Хирургический узел должен быть достаточно плотным, чтобы зафиксировать канюлю, но не слишком плотным, чтобы закрыть его (шаг 3.12).
Лучший способ обеспечить правильную каннуляцию - увидеть кровоток обратно через канюлю (шаг 3.10). С точки зрения устранения неполадок, если этого не происходит, это может быть связано со следующими причинами:
канюля была неправильно вставлена в артерию;
канюля находится внутри артерии, но закупорена узлом в неправильном положении;
канюля находится внутри артерии, а пузырь воздуха в канюле замедляет поток;
сгусток образовался внутри канюли.
Неправильное введение может быть связано с расположением канюли в пространстве между артерией и жировой тканью. В этом случае необходима повторная вставка. Когда узел над сосудом закупоривает канюлю, можно очень осторожно ее развязать и переделать. Небольшие пузырьки воздуха в катетере, как правило, не ставят под угрозу канюляцию и не опасны для жизни; но если в канюле есть большой пузырь воздуха, необходимо оттянуть канюлю с помощью шприца или перепозиционировать катетер в другой ветви. Обычно можно избежать образования сгустков и сохранить патент канюли, вливая болюсы физиологического раствора в 0,2 мл время от времени во время работы.
Ограничением этого исследования является недооценка проходимости канюли в более длительное время инфузии: здесь 24-часовая инфузия была выполнена, когда крысы были размещены в метаболической клетке. Для получения более длительного инфузионного периода может быть полезно использовать антикоагулянтную терапию, не назначаемую в данном исследовании. Однако во время инфузии крыса должна быть размещена в метаболической клетке, потому что она единственная, которая поддерживает инфузионную систему. Это место неудобно для животного, которое может испытывать стресс при лечении в течение более длительного периода. Кроме того, для инфузии использовался только физиологический раствор, поэтому нет никаких результатов о конкретном введении препарата. Одним из ограничений метода является невозможность вливания в артериальные ветви (если они присутствуют) выше того, что используется для катетера. По этой причине рекомендуется каннюлировать ближайшую ветвь от аорты.
Ни одна другая модель долгосрочной инфузии СМА крыс для неограниченных животных не присутствует в литературе. По сравнению с моделью канюляции IMA, описанной много лет назад4, описанный здесь метод имеет более широкую экспериментальную цель, поскольку он позволяет инфузию лекарств в области перфузии СМА и не ограничивается толстой кишкой. Недавно впервые селективная канюляция ветви СМА была использована для инфузии ботулотоксина непосредственно в артериальной брыжеечной области для изучения влияния на гладкую мускулатуру кишечника10, но многие другие препараты могут быть опробованы в будущем. Например, антикоагулянты могут быть введены для изучения брыжеечного тромбоза, или препараты с действием кишечной микробиоты11 или даже препараты от воспалительных заболеваний кишечника12. Внутриартериальная инфузия полезна, в частности, для исследований кишечного метаболизма, потому что эффект препарата оценителен до того, как кровь пройдет через портальное кровообращение, где она подвержена печеночному метаболизму.