Этот протокол описывает мышиную модель с поражением дорсального ядра рафа (DRN) (>90% выживаемость у экспериментальных мышей) со стабильной потерей серотонинергических нейронов дорсального рапа путем стереотаксической инъекции 5,7-дигидрокситриптамина в DRN с использованием углового подхода для предотвращения повреждения верхнего сагиттального синуса.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Элиминация серотонинергических нейронов путем стереотаксического введения 5,7-дигидрокситриптамина в ядра дорсальной рафе мышей
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Стереотаксическая инъекция широко используется для прямой доставки соединений или вирусов в целевые области мозга у грызунов. Прямое нацеливание на серотонинергические нейроны в дорсальном ядре рафе (DRN) может вызвать чрезмерное кровотечение и смерть животного из-за его расположения ниже верхнего сагиттального синуса (SSS). Этот протокол описывает создание мышиной модели с серотонинергическим поражением нейронов DRN (выживаемость >90%) со стабильной потерей >70% 5-HT-положительных клеток в DRN. Поражение индуцируется стереотаксическим введением селективного серотонинергического нейротоксина 5,7-дигидрокситриптамина (5,7-ДГТ) в ДРН с использованием углового доступа (30° в переднем/заднем направлении) во избежание повреждения ССС. У мышей с серотонинергическим поражением нейронов DRN наблюдаются тревожные изменения в поведении, что помогает подтвердить успех операции по удалению DRN. Этот метод используется здесь при поражениях DRN, но он также может быть использован для других стереотаксических инъекций, требующих угловых инъекций для избежания срединных структур. Эта мышиная модель с серотонинергическим поражением нейронов DRN представляет собой ценный инструмент для понимания роли серотонинергических нейронов в патогенезе психических расстройств, таких как генерализованное тревожное расстройство и большое депрессивное расстройство.
Введение
Серотонин, или 5-гидрокситриптамин (5-HT), является важным нейромедиатором, в основном вырабатываемым в кишечнике и мозге и влияющим на различные психологические функции. В центральной нервной системе (ЦНС) серотонинергическая система играет центральную роль в регуляции настроения и социального поведения, сна и бодрствования, аппетита, памяти и сексуального желания. В ЦНС серотонин синтезируется серотонинергическими нейронами, которые можно разделить на следующие две группы: ростральная группа, которая имеет восходящие проекции, иннервирующие практически весь мозг; и каудальная группа, которая в основном проецируется на спинной мозг
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все хирургические вмешательства и процедуры по уходу за животными были одобрены Комитетом по животным Школы наук о жизни и технологий Университета Тунцзи, Шанхай, Китай.
1. Содержание животных
- Содержание самцов мышей C57BL/6NCrl (возраст 10 недель, 25 г, n = 21) в стандартных условиях (температура 24 °C; влажность 55%) в соответствии с циклом свет/темнота 12 ч/12 ч.
- Обеспечьте едой и водой в неограниченном количестве.
ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь три мыши используются для подтверждения следа иглы.
2. Приготовление реагентов
....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
В корональном разрезе расположение DRN находится чуть ниже SSS и акведука (рис. 1B,C); таким образом, нацеливание на DRN с использованием стандартных процедур может привести к массивному кровотечению и высокой смертности у мышей16. Поэтому здесь были выполнены стереотаксические инжекции с использованием углового подхода вместо стандартного вертикального, чтобы избежать повреждения НДСС (рис. 1A,B). Чтобы .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Этот протокол успешно описывает создание надежной модели мыши, пораженной серотонинергическими нейронами DRN, с высокой воспроизводимостью поражения и низким уровнем смертности. Наведение на ДРН является сложной задачей, поскольку оно может повредить ССС, расположенную чуть выше ДРН16 , и привести к чрезмерному кровотечению и даже смерти14. Поэтому стереотаксические инъекции выполняли путем установки манипулятора под углом 30° в направлении.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была поддержана Национальной программой ключевых исследований и разработок Китая [Номер гранта 2017YFA0104100]; Национальный фонд естественных наук Китая [Гранты No 31771644, 81801331 и 31930068]; и Фонды фундаментальных исследований для центральных университетов.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0,22 мкм шприцевой фильтр | Millipore | SLGPRB | |
| 3% перекись водорода | Caoshanhu Co., Ltd, Цзянси, Китай | ||
| 5,7-дигидрокситриптамин | Sigma-Aldrich | SML2058 | 3 мкг/мкл, 2 мкм |
| Компактный аппарат для анестезии мелких животных | RWD Life Science Co., Ltd | R500 series | |
| Cryostat | Leica Biosystems, Вецлар, Германия | CM1950 | |
| Cy 3 AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) | Jackson ImmunoResearch | 705-165-003 | 1:2,000 |
| dapi | Sigma-Aldrich | D8417 | |
| дезипрамина гидрохлорид | Sigma-Aldrich | PHR1723 | 25 мг/кг |
| Eppendorf tube | Quality Scientific Plastics | 509-GRD-Q | |
| козье антитело против 5-HT | Abcam | ab66047 | 1:800 |
| GraphPad Prism | Graphpad Software Inc, CA, US | ||
| Hamilton Микролитровый шприц | Hamilton | 87943 | |
| Кетопрофен | Sigma-Aldrich | K1751-1G | 5 мг/кг |
| L-аскорбиновая кислота | BBI Life Sciences | A610021-0500 | 0,10% |
| лидокаин мазь | Tsinghua Tongfang Pharmaceutical Co. Ltd | H20063466 | |
| глазную мазь офлоксацина | Shenyang Xingqi Pharmaceutical Co.Ltd, Китай | H10940177 | |
| перистальтический насос | Huxi Analytical Instrument Factory Co., Ltd, Шанхай, Китай | HL-1D | |
| RWD Life Science Co., Ltd | 68018 | ||
| сверхнизкотемпературный морозильник | Haier | DW-86L388 | |
| Вихревой | колокольчик Kylin-bell | VORTEX-5 |
Ссылки
- Goridis, C., Rohrer, H. Specification of catecholaminergic and serotonergic neurons. Nature Review Neurosciences. 3 (7), 531-541 (2002).
- Zmudzka, E., Salaciak, K., Sapa, J., Pytka, K. Serotonin receptors in depression and anxiety: Insights from animal studies. <....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
