Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Патологический анализ метастазирования в легкие после инъекции опухолевых клеток в латеральную хвостовую вену

9.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/61270

⸱

20 мая 2020 г.

 ,  ,  , 
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center, 2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

В этой статье

Уведомление об исправлении

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Краткое содержание

Внутривенное введение раковых клеток часто используется в исследованиях метастазирования, но метастатическую опухолевую нагрузку может быть трудно проанализировать. Здесь мы демонстрируем модель инъекции метастазирования в хвостовую вену и включаем новый подход к анализу результирующей метастатической опухолевой нагрузки на легкие.

Аннотация

Метастазы, основная причина заболеваемости и смертности для большинства больных раком, могут быть сложными для доклинического моделирования у мышей. Доступно несколько моделей спонтанного метастазирования. Таким образом, экспериментальная модель метастазирования, включающая инъекцию в хвостовую вену подходящих клеточных линий, является основой исследований метастазирования. Когда раковые клетки вводятся в боковую хвостовую вену, легкие являются их предпочтительным местом колонизации. Потенциальным ограничением этого метода является точная количественная оценка метастатической опухолевой нагрузки на легкие. В то время как некоторые исследователи подсчитывают макрометастазы заранее определенного размера и / или включают микрометастазы после разрезания ткани, другие определяют область метастатических поражений относительно нормальной области ткани. Оба этих метода количественной оценки могут быть чрезвычайно сложными, когда метастатическая нагрузка высока. Здесь мы демонстрируем внутривенную инъекционную модель метастазирования в легких с последующим передовым методом количественной оценки метастатической опухолевой нагрузки с использованием программного обеспечения для анализа изображений. Этот процесс позволяет исследовать несколько параметров конечной точки, включая средний размер метастазирования, общее количество метастазов и общую площадь метастазирования, для обеспечения всестороннего анализа. Кроме того, этот метод был рассмотрен ветеринарным патологоанатомом, сертифицированным Американским колледжем ветеринарных патологов (SEK), для обеспечения точности.

Введение

Несмотря на то, что метастазирование является очень сложным и неэффективным процессом1, оно вносит значительный вклад в заболеваемость и смертность больных раком2. Фактически, большинство смертей, связанных с раком, объясняются метастатическим распространением болезни3,4. Для того, чтобы опухолевые клетки успешно метастазировали, они должны отделяться от первичного участка, вторгаться через прилегающую строму, интравазать в кровообращение или лимфатическую систему, перемещаться в капиллярное русло вторичного участка, экстравазировать во вторичную ткань и размножаться или расти с образованием метастатических поражений5. Использование мышиных моделей имеет решающее значение для дальнейшего понимания молекулярных механизмов, ответственных за метастатическое посев и рост6,7. Здесь мы фокусируемся на метастазировании рака молочной железы, для которого часто используются как генетически модифицированные мышиные модели, так и методы трансплантации – каждый со своим набором преимуществ и ограничений.

Генетически модифицированные модели опухолей молочной железы используют специфические промоторы молочной железы, включая MMTV-LTR (длинный терминальный повтор вируса опухоли молочной железы мыши) и WAP (сывороточный кислотный белок), для стимулирования экспрессии трансгенов в эпителии молочной железы8. Онкогены, включая полиомный средний Т-антиген (PyMT), ErbB2/Neu, c-Myc, Wnt-1 и обезьяний вирус 40 (SV40), были экспрессированы таким образом9,10,11,12,13, и хотя эти генетические модели полезны для изучения первичного инициации и прогрессирования опухоли, немногие легко метастазируют в отдаленные органы. Кроме того, эти генетические мышиные модели часто являются более временными и дорогостоящими, чем модели спонтанного или экспериментального метастазирования. Учитывая ограниченность большинства генетически модифицированных моделей опухолей молочной железы для изучения метастазирования, методы трансплантации стали привлекательными методами изучения этого сложного процесса. Это включает в себя ортотопическую, заднюю вену, внутрисердечную и внутричерепную инъекцию подходящих клеточных линий.

Хотя несколько клеточных линий рака молочной железы легко метастазируют после ортотопической инъекции в жировую прокладку молочной железы14,15, консистенция и воспроизводимость метастатической опухолевой нагрузки могут быть проблемой, а продолжительность таких исследований может составлять порядка нескольких месяцев. Для оценки метастазирования в легких, в частности, внутривенная инъекция в хвостовую вену часто является более воспроизводимым и эффективным по времени методом с метастатическим распространением, обычно происходящим в течение нескольких недель. Однако, поскольку модель внутривенной инъекции обходит начальные этапы метастатического каскада, необходимо проявлять осторожность при интерпретации результатов этих исследований. В этой демонстрации мы показываем инъекцию опухолевых клеток молочной железы в хвостовую вену вместе с точным и комплексным методом анализа.

Несмотря на то, что исследовательское сообщество добилось значительного прогресса в понимании сложного процесса метастазирования рака молочной железы, по оценкам, более 150 000 женщин в настоящее время имеют метастатический рак молочной железы16. Из пациентов с раком молочной железы IV стадии >36% пациентов имеют метастазы в легкие17; однако сайт-специфическая картина и частота метастазов могут варьироваться в зависимости от молекулярного подтипа18,19,20,21. Пациенты с метастазами в легкие, связанными с раком молочной железы, имеют среднюю выживаемость всего 21 месяц, что подчеркивает необходимость выявления эффективных методов лечения и новых биомаркеров этого заболевания17. Использование экспериментальных моделей метастазирования, включая внутривенную инъекцию опухолевых клеток, будет продолжать расширять наши знания об этой важной клинической проблеме. В сочетании с патологией цифровой визуализации и методом анализа метастатической опухоли легкого, описанным в этом протоколе, инъекции в заднюю вену являются ценным инструментом для исследования метастазирования рака молочной железы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Использование животных соответствовало правилам Университета по ресурсам лабораторных животных (ULAR) в соответствии с утвержденным протоколом 2007A0120-R4 (PI: Dr. Gina Sizemore) Институциональным комитетом по уходу и использованию животных OSU (IACUC).

1. Инъекция клеток рака молочной железы в хвостовую вену

  1. Подготовка клеток и шприца к инъекциям
    1. Нанесите соответствующее количество клеток в зависимости от количества мышей и концентрации клеток, которые будут использоваться.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Количество вводимых клеток и время до развития метастазов будут зависеть от используемой клеточной линии и должны быть оптимизированы. В этой демонстрации 1 x 106 клеток MDA-MB-231 вводят внутривенно мышам NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG), а макроскопические поражения легких наблюдаются не позднее, чем через 24 дня после инъекции. Для клеточной линии опухоли молочной железы MVT1 3 x 106 вводят иммунокомпетентным мышам FVB/N с многочисленными метастазами в легкие, наблюдаемыми 14 дней22,23.
    2. Аспиратная среда и промывка ячеек пластин с 1x PBS. Трипсинизируют клетки в минимальном объеме, добавляют соответствующий объем среды и подсчитывают клетки с помощью гематоцитометра или другого предпочтительного метода. Трипан синий (0,4%) или другие красители живых / мертвых клеток могут быть использованы для определения количества жизнеспособных клеток.
    3. Грануляторы путем вращения при 180 х г в течение 5 мин.
    4. Повторно суспендировать соответствующее количество клеток в стерильном 1x PBS таким образом, чтобы объем 100 мкл вводился на мышь. Держите клеточную суспензию на льду для поддержания жизнеспособности.
    5. Перед инъекцией тщательно повторно суспендируйте клетки пипеткой 200 мкл или 1 мл, чтобы избежать слипания. Наберите 100 мкл в инсулиновом шприце 28 г (см. Таблицу материалов).
    6. Устраните любые пузырьки воздуха, удерживая шприц вертикально, постукивая по шприцу и медленно регулируя плунжер. Инъекция пузырьков воздуха в вену, вероятно, вызовет воздушную / газовую эмболию, которая может быть фатальной.
  2. Инъекция боковой хвостовой вены
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для экспериментальных анализов метастазирования рака молочной железы инъекции проводятся > 6-недельным самкам мышей.
    1. Обведите мышь за хвост и сдвиньте животное в щелевую трубку/удерживающее устройство соответствующего размера (см. Таблицу материалов для используемого удерживающего устройства).
    2. Вставьте заглушку удерживающего устройства и расположите мышь на боку таким образом, чтобы ее боковая хвостовая жилка была легко просматриваемой. Мышь имеет вентральную артерию на одной линии с гениталиями, дорсальную вену и две боковые хвостовые вены.
    3. Очистите поверхность хвоста мыши асептической салфеткой. Возьмите хвост между указательным и большим пальцами недоминирующей рукой и приложите небольшое напряжение.
    4. Начиная с дистальной части хвоста, вставьте иглу параллельно вене со скосом в конце.
    5. Если это разрешено, тщательно подведите итоги иглы и согните под углом 20-30°. Настоятельно рекомендуется использовать одноручный подход или устройство для повторного нанесения иглы.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Нет необходимости аспирировать, так как это может привести к коллапсу вены. Тем не менее, небольшая вспышка крови может быть замечена при первом размещении. Игла будет плавно продвигаться в вену при правильном размещении.
    6. Медленно дозируйте весь объем в вену. Не должно быть сопротивления при нажатии плунжера.
    7. Если чувствуется какое-либо сопротивление, своевременно извлеките шприцевую иглу. При необходимости повторно вводят иглу (в идеале не более 3 попыток), двигаясь в сторону проксимального конца хвоста или противоположной боковой вены.
    8. Небольшой объем крови, скорее всего, будет вытеснен после инъекции. Нанесите мягкое давление стерильной марлей и протрите асептической салфеткой.
    9. Своевременно утилизируйте шприц в соответствующий контейнер для острых предметов.
    10. Верните мышь в чистую, вентилируемую клетку и следите за признаками дистресса.
    11. Контролируйте мышей 2-3 раза в неделю на наличие признаков образования метастазов (затрудненное дыхание, сгорбленная осанка, потеря веса) и общего дистресса. Время до развития метастазирования будет зависеть от клеточной линии и штамма мыши.
    12. При использовании устройства визуализации живых животных in vivo изображение мышей сразу после инъекции в хвостовую вену для подтверждения успешной инъекции клеток и получения данных о времени «нуля» (конкретные сведения о биолюминесцентной визуализации in vivo не включены в настоящий документ, но описаны Yang et al.24).

2. Фиксация легочной ткани и анализ метастатической опухолевой нагрузки легкого

  1. Инфляция легочной ткани для поддержания структурного формата легких при гистопатологии
    1. После выполнения утвержденных процедур эвтаназии (например, углекислого газа при смещении 30 - 70% объема камеры в минуту) закрепите тушу мыши на рассеченной доске с помощью штифтов. Либо распылите, либо нанесите 70% этанола, чтобы шерсть мыши не мешала во время рассечения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Удушье углекислого газа может вызвать легочное кровоизлияние в качестве ожидаемого фонового поражения, особенно при более медленных скоростях потока.
    2. Откройте грудную клетку с помощью разреза средней линии, вытяните разрез краниально / каудально через брюшину и отрежьте диафрагму, захватив клифозный отросток.
    3. Используя отдельный набор ножниц, чтобы не затупить лезвия, отрежьте ребра вдоль каждой стороны грудины и аккуратно удалите грудную клетку, оставив место для расширения легких.
    4. Изолируют трахею путем удаления подчелюстных слюнных желез и инфрагиоидной мускулатуры. Размещение штифтов по обе стороны трахеи может предотвратить нежелательное движение во время введения иглы.
    5. Заполните шприц весом 26 г 2-3 мл 10% нейтрального буферизованного формалина и вставьте в трахею.
    6. Медленно вводите формалин и следите за расширением легких (обычно требуется ~ 1,5 мл формалина).
    7. Как только формалин начнет вытекать из легких (избегайте чрезмерной инфляции), отщипните трахею парой щипцов, удалите шприцевую иглу и отсоедините весь дыхательный аппарат. Поместите легкие, сердце и т. Д. Непосредственно в формалин, так как дополнительная обрезка ткани может быть сделана после фиксации.
    8. Полная обработка, встраивание, сечение ткани, а также окрашивание гематоксилином и эозином (H & E) с использованием стандартных методов.
  2. Анализ метастатической опухолевой нагрузки легкого
    1. Сканирование окрашенных H&E участков легких на слайд-сканере высокого разрешения с 40-кратным увеличением (рисунок 3).
    2. Импорт изображений в программное обеспечение для анализа изображений (например, Visiopharm Image Analysis) для количественной оценки метастазов в легких.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Мы рекомендуем новым пользователям пройти обучение на месте или в режиме онлайн для использования программного обеспечения для анализа изображений. Многочисленные вебинары также доступны через коммерческую веб-страницу.
    3. Выберите приложение Visiopharm 10118 H&E Lung Metastasis App из библиотеки приложений программного обеспечения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Целью этого приложения является маркировка и количественная оценка метастазирования в легких на слайдах, окрашенных H&E. В рамках приложения 10118 H&E Lung Metastasis App первый этап обработки изображений сегментирует легочную ткань с помощью приложения Tissue Detection. На втором этапе обработки изображений используется приложение Metastasis Detect, которое идентифицирует метастазы внутри легочной ткани. Метастазы идентифицируются по форме вместе с областями, которые либо слишком деформированы, либо слишком красные, либо слишком редкие, чтобы быть идентифицированными как метастазы.
    4. Отрегулируйте параметры, определяющие форму и разреженность, чтобы наилучшим образом соответствовать репрезентативным изображениям. Сегментированные участки метастазов опухоли и нормальная легочная ткань могут отображаться с использованием различных цветовых меток для каждого типа ткани.
      ПРИМЕЧАНИЕ: В случае, если приложение не может точно отделить метастазы от нормальной легочной ткани, может потребоваться написать пользовательское приложение, использующее программу Visiopharm Decision Forest, как это было сделано для экспериментов (см. Рисунок 2 и Рисунок 3). Подробная информация о написании пользовательского алгоритма приведена ниже. В противном случае перейдите к шагу 2.2.9.
    5. Откройте программу Decision Forest, которая работает путем обучения нескольких классов [т. Е. Легочная ткань (неопуляционная), метастазы, эритроциты, эпителий и / или белое пространство] на желаемом изображении. На рисунке 2 метастазы опухоли синие, нормальная ткань зеленая, а бронхиолярный эпителий желтый. Кроме того, красные кровяные тельца находятся в красном, а воздушные пространства в розовом.
    6. Следуйте предложенной серии вопросов «да» или «нет», чтобы соответствующим образом обучить каждый класс для изображения. Точность алгоритма будет определять количество вопросов «да/нет». Для анализа пользовательский алгоритм/приложение был написан с точностью, установленной на 50 (диапазон 0-100).
    7. Настройте функции для каждого класса, применив фильтры для резкости, размытия, сортировки по форме и т. Д., Чтобы повысить точность алгоритма /приложения. Visiopharm рассматривает каждый класс через одну или несколько линз, известных как функции. Функции изменяют способ просмотра изображения классом , чтобы выявить определенные цвета или интенсивности.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для пользовательского алгоритма метастазы размером 8500 мкм2 и выше маркируются и измеряются как метастазы. Это объясняет дисперсию размера и метастазы, слишком малые для обнаружения. Небольшие деформированные участки и небольшие метастатические участки под 8500 мкм2 были включены в нормальную количественную оценку тканей.
    8. Сохраните измененные настройки из приложения или пользовательского алгоритма, а затем примените алгоритм/приложение ко всему набору или серии тканей, окрашенных H&E.
    9. Наконец, экспортируйте все выходные переменные, включая переменные, перечисленные в таблице 1. Площадь в микронах в квадрате (мкм2) может быть количественно определена для каждого типа ткани, и проценты получены из общей чистой площади ткани образца (т.е. общей ткани минус воздушное пространство).
    10. При создании пользовательского алгоритма просмотрите разметку тканей в консультации с ветеринарным патологоанатомом, сертифицированным Американским колледжем ветеринарных патологов, чтобы обеспечить точные измерения и дифференцировать типы тканей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

При использовании немаркированных клеток для инъекции в хвостовую вену может быть трудно подтвердить колонизацию легких до (1) времени некропсии, если могут наблюдаться макрометастазы, или (2) после гистологического анализа, если существуют микроскопические метастазы. При обширной метастатической опухолевой нагрузке на легкие у мышей будет затрудненное дыхание. Как и при любом исследовании опухоли, мыши должны тщательно контролироваться на протяжении всей продолжительности исследования. Использование меченых клеток являе...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Поскольку исследователи продолжают использовать внутривенную инъекцию опухолевых клеток в качестве экспериментальной модели метастазирования, стандартные методы анализа результирующей метастатической опухолевой нагрузки отсутствуют. В некоторых случаях могут наблюдаться значительные различия в метастатической опухолевой нагрузке при манипулировании конкретными клеточными линиями и/или использовании химических соединений. Однако в других случаях тонкие различия в метастатическом посеве и росте могут быть упущены из виду и...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Репрезентативные данные финансировались через Национальный институт рака (K22CA218549 to S.T.S). В дополнение к их помощи в разработке комплексного метода анализа, о котором сообщается здесь, мы благодарим Комплексный онкологический центр Университета штата Огайо Сравнительная патология и общий ресурс фенотипирования мышей (директор - Криста Ла Перл, DVM, PhD) за услуги гистологии и иммуногистохимии и Pathology Imaging Core за разработку и анализ алгоритмов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
салфетки для приготовления спиртаFisher Scientific22-363-750для чистки хвоста перед инъекцией
dissection ножницыFisher Scientific08-951-5для вскрытия мышей и раздувания легочной ткани
DMEM с L-глутамином, 4,5 г/л глюкозы и пирувата натрияFisher ScientificMT10013CVКлеточная культуральная среда для клеточных линий MDA-MB-231 и MVT1
Dulbecco's Phosphate-Buffered Salt Solution 1xFisher ScientificMT21030CVиспользуется для ресуспендирования опухолевых клеток для инъекций
этанола (70 % раствора)OSUиспользуется для минимизации шерсти мышей при вскрытии; используйте с осторожностью - легковоспламеняющийся
синий краситель ЭванаMillipore SigmaE2129используется в концентрации 1 % в стерильном PBS для практики методом инъекции в хвостовую вену; Применение с осторожностью - опасный реагент
Фетальная бычья сывороткаMillipore SigmaF4135клеточная культура медиа добавка; используется в 10% в
клеточных щипцахDMEM FisherScientific 10-270для диссекции и надувания легочной ткани
FVB/NJ мышиThe Jackson Laboratory001800сингенный мышиный штамм для клеток MVT1
гемацитометр (Bright-Line)Millipore SigmaZ359629для использования в клеточных культурах для получения подсчета клеток
инсулиновый шприц (28 G)Fisher Scientific14-829-1Bдля инъекций в хвостовую вену (BD 329424)
MDA-MB-231 клеткиATCCклеточная линия рака молочной железы человека
MVT1 клеткимышиной опухоли молочной железы
иглы (26 G)Fisher Scientific14-826-15используется для надувания мышиной Нейтральный
буферный формалин легких (10%)Научный 245685 Фишераиспользуется в качестве фиксатора тканей и для надувания легочной ткани; с осторожностью - опасен реагент
NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) мышиЛаборатория Джексона005557поддерживается OSUCCC Target Validation Shared Resource
Пенициллин стрептомицин 100xThermoFisher15140163клеточной культуральной среды добавка
стерильная марляFisher ScientificNC9379092для нанесения давления на хвост мыши при возникновении
кровотечения шприц (5 мл)Fisher Scientific14-955-458используется для надувания мышиной легочной ткани
ограничителя хвостовой веныBraintree Scientific, Inc.TV-150 STDиспользуется для удержания мыши при инъекциях в хвостовую вену
Трипан синий (0,4 %)ThermoFisher15250061используется в культуре клеток для оценки жизнеспособности
Trypsin-EDTA 0,25 %ThermoFisher25200-114используется в клеточной культуре для отделения опухолевых клеток от планшета

Ссылки

  1. Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nature Reviews: Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).
  2. Steeg, P. S. Targeting metastasis. Nature Reviews: Cancer. 16 (4), 201-218 (2016).
  3. Gupta, G. P., Massague, J. Cancer metastasis: building a framework. Cell. 127 (4), 679-695 (2006).
  4. Steeg, P. S. Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges. Nature Medicine. 12 (8), 895-904 (2006).
  5. Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. A perspective on cancer cell metastasis. Science. 331 (6024), 1559-1564 (2011).
  6. Eckhardt, B. L., Francis, P. A., Parker, B. S., Anderson, R. L. Strategies for the discovery and development of therapies for metastatic breast cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 11 (6), 479-497 (2012).
  7. Gomez-Cuadrado, L., Tracey, N., Ma, R., Qian, B., Brunton, V. G. Mouse models of metastasis: progress and prospects. Disease Models & Mechanisms. 10 (9), 1061-1074 (2017).
  8. Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Research. 8 (4), 212(2006).
  9. Schoenenberger, C. A., et al. Targeted c-myc gene expression in mammary glands of transgenic mice induces mammary tumours with constitutive milk protein gene transcription. EMBO Journal. 7 (1), 169-175 (1988).
  10. Nusse, R., Varmus, H. E. Many tumors induced by the mouse mammary tumor virus contain a provirus integrated in the same region of the host genome. Cell. 31 (1), 99-109 (1982).
  11. Muller, W. J., Sinn, E., Pattengale, P. K., Wallace, R., Leder, P. Single-step induction of mammary adenocarcinoma in transgenic mice bearing the activated c-neu oncogene. Cell. 54 (1), 105-115 (1988).
  12. Lin, E. Y., et al. Progression to malignancy in the polyoma middle T oncoprotein mouse breast cancer model provides a reliable model for human diseases. American Journal of Pathology. 163 (5), 2113-2126 (2003).
  13. Green, J. E., et al. The C3(1)/SV40 T-antigen transgenic mouse model of mammary cancer: ductal epithelial cell targeting with multistage progression to carcinoma. Oncogene. 19 (1), 1020-1027 (2000).
  14. Iorns, E., et al. A new mouse model for the study of human breast cancer metastasis. PloS One. 7 (10), 47995(2012).
  15. Kim, I. S., Baek, S. H. Mouse models for breast cancer metastasis. Biochemical and Biophysical Research Communications. 394 (3), 443-447 (2010).
  16. Mariotto, A. B., Etzioni, R., Hurlbert, M., Penberthy, L., Mayer, M. Estimation of the Number of Women Living with Metastatic Breast Cancer in the United States. Cancer Epidemiology, Biomarkers and Prevention. 26 (6), 809-815 (2017).
  17. Xiao, W., et al. Risk factors and survival outcomes in patients with breast cancer and lung metastasis: a population-based study. Cancer Medicine. 7 (3), 922-930 (2018).
  18. Smid, M., et al. Subtypes of breast cancer show preferential site of relapse. Cancer Research. 68 (9), 3108-3114 (2008).
  19. Kennecke, H., et al. Metastatic behavior of breast cancer subtypes. Journal of Clinical Oncology. 28 (20), 3271-3277 (2010).
  20. Soni, A., et al. Breast cancer subtypes predispose the site of distant metastases. American Journal of Clinical Pathology. 143 (4), 471-478 (2015).
  21. Leone, B. A., et al. Prognostic impact of metastatic pattern in stage IV breast cancer at initial diagnosis. Breast Cancer Research and Treatment. 161 (3), 537-548 (2017).
  22. Pei, X. F., et al. Explant-cell culture of primary mammary tumors from MMTV-c-Myc transgenic mice. In Vitro Cellular and Developmental Biology: Animal. 40 (1-2), 14-21 (2004).
  23. Mathsyaraja, H., et al. CSF1-ETS2-induced microRNA in myeloid cells promote metastatic tumor growth. Oncogene. 34 (28), 3651-3661 (2015).
  24. Yang, S., Zhang, J. J., Huang, X. Y. Mouse models for tumor metastasis. Methods in Molecular Biology. 928, 221-228 (2012).
  25. La Perle, K. M. D. Comparative Pathologists: Ultimate Control Freaks Seeking Validation. Veterinary Pathology. 56 (1), 19-23 (2019).
  26. Blomberg, O. S., Spagnuolo, L., de Visser, K. E. Immune regulation of metastasis: mechanistic insights and therapeutic opportunities. Disease Models & Mechanisms. 11 (10), (2018).
  27. Gonzalez, H., Hagerling, C., Werb, Z. Roles of the immune system in cancer: from tumor initiation to metastatic progression. Genes and Development. 32 (19-20), 1267-1284 (2018).
  28. Borowsky, A. D., et al. Syngeneic mouse mammary carcinoma cell lines: two closely related cell lines with divergent metastatic behavior. Clinical and Experimental Metastasis. 22 (1), 47-59 (2005).
  29. Yang, Y., et al. Immunocompetent mouse allograft models for development of therapies to target breast cancer metastasis. Oncotarget. 8 (19), 30621-30643 (2017).
  30. Resch, M., Neels, T., Tichy, A., Palme, R., Rulicke, T. Impact assessment of tail-vein injection in mice using a modified anaesthesia induction chamber versus a common restrainer without anaesthesia. Laboratory Animals. 53 (2), 190-201 (2019).
  31. Rashid, O. M., et al. Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model. Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).
  32. Goodale, D., Phay, C., Postenka, C. O., Keeney, M., Allan, A. L. Characterization of tumor cell dissemination patterns in preclinical models of cancer metastasis using flow cytometry and laser scanning cytometry. Cytometry Part A. 75 (4), 344-355 (2009).
  33. Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer. Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).
  34. Wright, L. E., et al. Murine models of breast cancer bone metastasis. BoneKEy Reports. 5, 804(2016).
  35. Simmons, J. K., et al. Animal Models of Bone Metastasis. Veterinary Pathology. 52 (5), 827-841 (2015).
  36. Liu, Z., et al. Improving orthotopic mouse models of patient-derived breast cancer brain metastases by a modified intracarotid injection method. Scientific Reports. 9 (1), 622(2019).
  37. Kodack, D. P., Askoxylakis, V., Ferraro, G. B., Fukumura, D., Jain, R. K. Emerging strategies for treating brain metastases from breast cancer. Cancer Cell. 27 (2), 163-175 (2015).
  38. Brown, D. L. Practical Stereology Applications for the Pathologist. Veterinary Pathology. 54 (3), 358-368 (2017).
  39. Aeffner, F., et al. Digital Microscopy, Image Analysis, and Virtual Slide Repository. Institute for Laboratory Animal Research Journal. 59 (1), 66-79 (2018).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Исправление


Formal Correction: Erratum: Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells
Posted by JoVE Editors on 12/02/2020. Citeable Link.

An erratum was issued for: Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells. The author list was updated.

The author list was updated from:

Katie A. Thies1, Sue E. Knoblaugh2, and Steven T. Sizemore1
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center
2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

to:

Katie A. Thies1, Sarah Steck1, Sue E. Knoblaugh2, and Steven T. Sizemore1
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center
2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

Теги

Патологический анализ метастазирования в легкие после инъекции опухолевых клеток в латеральную хвостовую вену
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.