Представлено здесь протокол для Pseudomonas aeruginosa инфекции и фаг терапии применения в муковисцидоз (CF) эмбрионов зебры.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Фаг терапии Применение для противодействия Pseudomonas aeruginosa инфекции в муковисцидоз Зебрафиш Эмбрионы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Устойчивость к противомикробным препаратам, которое является одним из основных следствий диагностической неопределенности и чрезмерной предписания противомикробных препаратов, является все более признанной причиной тяжелых инфекций, осложнений и смертности во всем мире, что оказывает огромное воздействие на наше общество и систему здравоохранения. В частности, пациенты с ослабленной иммунной системой или уже существующими и хроническими патологиями, такими как муковисцидоз (CF), подвергаются частым антибиотикам для борьбы с инфекциями с появлением и распространением мультирезистентных изолятов. Поэтому существует настоятельная необходимость в решении альтернативных методов лечения для противодействия бактериальным инфекциям. Использование бактериофагов, естественных врагов бактерий, может быть возможным решением. Протокол, подробно описанный в этой работе, описывает применение фаговой терапии против инфекции Pseudomonas aeruginosa в эмбрионах зебры. Эмбрионы зебры были инфицированы P. aeruginosa, чтобы продемонстрировать, что фаг-терапия эффективна против инфекций P. aeruginosa, поскольку она снижает летальность, бактериальное бремя и провоспалительный иммунный ответ в эмбрионах CF.
Введение
Фаге терапии, использование естественных врагов бактерий для борьбы с бактериальными инфекциями, набирает новый интерес, как бактериальная устойчивость к антибиотикамстановится широко распространенным 1,2. Эта терапия, используемая в течение десятилетий в Восточной Европе, можно считать дополнительным лечением антибиотиков в лечении легочных инфекций у пациентов с CF и возможной терапевтической альтернативой для пациентов, инфицированных бактериями, которые устойчивы ко всем используемым в настоящее времяантибиотикам 2,3. Преимущества антибиотикотерапи....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Взрослые зебры(Danio rerio) из штамма AB (Европейский ресурсный центр Зебрафиш E'RC) поддерживаются в соответствии с международными (Директива ЕС 2010/63/EU) и национальными руководящими принципами(итальянский указ от 4 марта 2014 года, n. 26) о защите животных, используемых в научных целях. Стандартные условия устанавливаются на рыбном объекте с 14 ч темного цикла света/10 ч и температурой воды в резервуаре при температуре 28 градусов по Цельсию.
1. Подготовка решений и инструментов
- Подготовье 50-х стокового раствора и 1x рабочих решений для среды эмбриона E3 для выращивания эмбрионов зебры (см. таблиц....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Результаты и цифры, представленные здесь, ссылаются на эмбрионы CF, генерируемые путем инъекции cftr morpholinos,как описано ранее 10 и в шаге 5. Для проверки фенотипа CF были рассмотрены нарушения положения внутренних органов, таких как сердце, печень иподжелудочная железа, как описано ранее17 (рисунок 1). Аналогичные результаты были получены в случае эмбрионов WT, как сообщалось в нашей предыдущейпубликации 19.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В этой рукописи мы описали протокол для выполнения P. aeruginosa (PAO1) инфекции в эмбрионах зебры и как применять фаг терапии с коктейлем фагов ранее определены как способные заразить PAO1, чтобы решить ее. Использование бактериофагов в качестве альтернативы лечению антибиотиками представляет все более большой интерес с последних нескольких лет. Это объясняется главным образом распространением бактериальных инфекций с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ), которые представляют собой серьезную проблему.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторов нечего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была поддержана Итальянским фондом муковисцидоза (FFC No22/2017; Ассоциазионе "Gli amici della Ritty" Casnigo и FFC No23/2019; Un respiro в Пио Онлус Ла Мано теса Онлус).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Bacto Agar | BD | 214010 | |
| Кальция хлорид | Sigma-Aldrich | 10043-52-4 | |
| CsCl | Sigma-Aldrich | 289329 | |
| фоспатный солевой буфер Dulbecco PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| Этил3-аминобензоат метансульфонат | Sigma-Aldrich | 886-86-2 | общее название трикаин |
| Микроманипулятор Femtojet | Eppendorf | 5247 | |
| Fleming/brown P-97 | Sutter Instrument Company | P-97 | |
| LE-Agarose | Sigma-Aldrich | 11685660001 | |
| Легкоплавкая агароза | Sigma-Aldrich | CAS 9012-36-6 | |
| Сульфат магния | Sigma-Aldrich | 7487-88-9 | |
| Метиловый синий | Sigma-Aldrich | 28983-56-4 | |
| Иглы для микроинъекций | Гарвардский аппарат | ||
| N-Phenylthiourea >=98% | Aldrich-P7629 | 103-85-5 | |
| Олиго Морфолино | Генные инструменты | разработанные исследователем | |
| PEG6000 | Calbiochem | 528877 | |
| Феноловый красный раствор | Sigma-Aldrich | CAS 143-74-B | |
| Хлорид калия | Sigma-Aldrich | 7447-40-7 | |
| Проназа | Sigma-Aldrich | 9036-06-0 | |
| Реагент ACS хлорида натрия, ≥ 99,0% | Sigma-Aldrich | S9888 | |
| Стереомикроскоп | Leica | S9I | |
| Tris HCl | Sigma-Aldrich | T5941 | |
| Triton X | Sigma-Aldrich | T9284 | |
| Триптон | Оксоидный | LP0042B | |
| дрожжевой экстракт | Оксоидный | LP0021B | |
| Z-MOLDS Микроинъекция | Слово Прецизионные приборы |
Ссылки
- Cisek, A. A., Dąbrowska, I., Gregorczyk, K. P., Wyżewski, Z. Phage Therapy in Bacterial Infections Treatment: One Hundred Years After the Discovery of Bacteriophages. Current Microbiology. 74 (2), 277-283 (2017).
- Trend, S., Fonceca, A. M., Ditcham, W. G., Kicic, A., Cf, A.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
