Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Измерение посттактного церебрального отека, зоны инфаркта и пробок гемо-мозгового барьера в одном наборе образцов мозга грызунов

7.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/61309

⸱

23 октября 2020 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Anesthesiology and Critical Care, Soroka Medical Center, Ben-Gurion University of the Negev, 2Department of Anesthesiology, Yale University School of Medicine, 3Department of Neurosurgery, Soroka University Medical Center and the Faculty of Health Sciences, Ben-Gurion University of the Negev, 4Department of Physiology, Faculty of Biology, Ecology and Medicine, Dnepropetrovsk State University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает новый метод измерения трех наиболее важных параметров ишемической черепно-мозговой травмы на том же наборе образцов мозга грызунов. Использование только одного образца мозга является весьма выгодным с точки зрения этических и экономических издержек.

Аннотация

Одной из наиболее распространенных причин заболеваемости и смертности во всем мире является ишемический инсульт. Исторически сложилось так, что животное модель, используемая для стимулирования ишемического инсульта включает в себя окклюзию средней мозговой артерии (MCAO). Зона инфаркта, отек мозга и распад гемо-мозгового барьера (BBB) измеряются как параметры, отражающие степень черепно-мозговой травмы после MCAO. Существенным ограничением этого метода является то, что эти измерения, как правило, получены в различных образцах мозга крыс, что приводит к этическим и финансовым бременем из-за большого количества крыс, которые должны быть усыпляются для соответствующего размера выборки. Здесь мы представляем метод точной оценки черепно-мозговой травмы после MCAO путем измерения зоны инфаркта, отек мозга и BBB проницаемости в том же наборе крыс мозга. Этот новый метод обеспечивает более эффективный способ оценки патофизиологии инсульта.

Введение

Одной из наиболее распространенных причин заболеваемости и смертности во всем мире является инсульт. Во всем мире ишемический инсульт составляет 68% всех случаев инсульта, в то время как в Соединенных Штатах ишемический инсульт составляет 87% случаевинсульта 1,2. Подсчитано, что экономическое бремя инсульта достигает $ 34 млрд вСоединенных Штатах 2 и 45 млрд евро в Европейском союзе3. Модели инсульта животных необходимы для изучения его патофизиологии, разработки новых методов оценки и предложить новые терапевтическиеварианты 4.

Ишемический инсульт происходит при окклюзии основной мозговой артерии, обычно средней мозговой артерии или одной из ее ветвей5. Так, в моделях ишемического инсульта исторически задействованы окклюзия средней мозговой артерии(MCAO) 6,7,8,9,10,11,12. Вслед за MCAO, неврологические травмы чаще всего оценивается путем измерения зоны инфаркта (ИЗ) с использованием 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида (TTC)окрашивания метод 13, отек мозга (BE) с помощью сушки или расчета объемов полушария14 , 15,16,игемовогомозга барьер (BBB) проницаемость по технике спектрометрии с использованием Эванс синийокрашивания 17,18,19.

Традиционный метод MCAO использует отдельные наборы мозгов для каждого из трех измерений мозга. Для большого размера выборки, это приводит к значительному числу усыпляемых животных, с дополнительными этическими и финансовыми соображениями. Альтернативный метод для облегчения этих расходов будет включать измерения всех трех параметров в одном наборе мозгов грызунов после MCAO.

Предыдущие попытки были сделаны для измерения комбинаций параметров в том же образце мозга. Одновременно иммунофторесцентныеметоды окрашивания 20, а также другиемолекулярно-биохимические анализы 21 были описаны после окрашивания ТТК в том же образце мозга. Ранее мы вычислили объемы полушария мозга для оценки отеков мозга и выполнили Окрашивание ТТК для расчета зоны инфаркта в том же наборемозга 15.

В настоящем протоколе мы представляем модифицированный метод MCAO, который измеряет ишемическую черепно-мозговую травму путем определения проницаемости ИК, BE и BBB в том же наборе мозгов грызунов. Я измеряется TTC окрашивания, BE определяется путем расчета объема полушария, и BBB проницаемость получена методами спектрометрии19. В этом протоколе мы использовали модифицированную модель MCAO, основанную на прямой вставке и фиксации монофильтрного катетера во внутреннюю соонную артерию (ICA) и дальнейшем блокировании притока крови к средней мозговой артерии (MCA)22. Этот модифицированный метод показывает снижение уровня смертности и заболеваемости по сравнению с традиционным методомMCAO 16,22.

Этот новый подход обеспечивает финансово-звуковую и этическую модель для измерения неврологических травм после MCAO. Такая оценка основных параметров ишемической черепно-мозговой травмы поможет всесторонне исследовать ее патофизиологию.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Следующие процедуры были проведены в соответствии с рекомендациями Хельсинкской и Токийской деклараций и Руководящих принципов использования экспериментальных животных Европейского сообщества. Эксперименты были также одобрены Комитетом по уходу за животными в Университете Бен-Гуриона в Негеве.

1. Подготовка крыс к экспериментальной процедуре

  1. Выберите взрослых самцов крыс Спраг-Доули без явной патологии, каждая весом от 300 до 350 г.
  2. Поддерживайте всех крыс при комнатной температуре при температуре 22 градусов по Цельсию, с 12 часами световых и темных циклов перед экспериментом.
  3. Убедитесь, что пища и вода доступны объявление libitum.
  4. Выполните все процедуры с 6:00 .m до 14:00 .m.

2. Подготовка крыс к операции

  1. Обезболивать крыс в течение 30 мин с изофлураном (4% для индукции и 2% для обслуживания) и 24% кислорода (1,5 л/мин).
    1. Проверьте уровень анестезии у крыс, гарантируя, что они не имеют педаль вывода рефлекс.
  2. Вставьте катетер 24-го калибра в хвостовую вену.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Хвост потепление для вазодилатации не выполняется.
    1. Поместите крыс на стол в положении лежа. Используйте медицинскую ленту, чтобы прикрепить все четыре конечности крыс.
  3. Поместите зонд для измерения температуры в прямую кишку крысы перед операцией.
  4. Во время процедуры, поддерживать нагревательной пластины для поддержки температуры тела 37 градусов по Цельсию.
  5. Добавить мазь в обоих глазах крысы для защиты.
  6. Бритье хирургической области и дезинфицировать с тремя приложениями 10% povidone-йода следуют 70% изопропилового спирта.

3. Правая сторона средней мозговой артерии окклюзии

ПРИМЕЧАНИЕ: MCAO выполняется по модифицированной технике,как описано ранее 16,22,23, с использованием инструментов, описанных McGarry et al.24 и Ulu' et al.25.

  1. Рассекают кожу и поверхностную фасцию на брюшной средней линии шеи хирургическим пинцетом и ножницами с изогнутыми лезвиями.
  2. Определите мышечный треугольник, состоящий из ICA, внешней сонной артерии (ЭКА) и общей сонной артерии (CCA).
  3. Тщательно отделяйте правые CCA и ICA от блуждающего нерва с микросилами для сосудистой хирургии.
  4. Разоблачить право CCA и ICA. Блокируйте приток крови, поступающий из CCA в ICA, используя либо микро-клипы или специальные турникеты для сосудистой хирургии. Сделайте разрез (примерно 1 мм) на ICA с помощью микросхем для сосудистой хирургии.
  5. Вставьте монофильтрный катетер (4-0 нейлона) непосредственно через ICA, около 18,5-19 мм от точки бифуркации правой CCA в круг Уиллиса до достижения легкого сопротивления, чтобы окквил MCA26.
  6. Ligate вокруг ICA над bifurcation CCA.
  7. Для фиктивной контрольной группы выполните вставку нейлонового потока вместо шагов 3.5 и 3.616,22.
  8. Администрирование 5 мл 0,9% хлорида натрия путем внутриперитонеальной инъекции.
  9. Закройте рану швом и возьмите крысу в зону восстановления.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Через несколько минут после окончания анестезии, крыса проснется и двигаться самостоятельно вокруг клетки.
  10. На 23 ч после MCAO, вводить 2% Эванс синий в солевой раствор (4мл/кг) 23,26 в хвостовую вену для обеих эксплуатируемых групп через канюлю27.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Это используется в качестве кровевидного проницаемости трассировщика. Разрешить циркулировать в течение 60 минут.

4. Определение зоны инфаркта

  1. Измерьте ИК на 24 ч после MCAO,как описаноранее 9,15,18,19,26.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Крысы, которые потеряли более 20% своего веса или развитых судорог или гемиплегии исключены из эксперимента.
  2. Euthanize крысы, заменив вдохновил газовой смеси с 20% кислорода и 80% углекислого газа, пока крыса перестает дышать спонтанно.
  3. Откройте грудь с 5-6 см боковой разрез через брюшную стенку под грудной клеткой с помощью ножниц и хирургических типсов.
  4. Выполните диафрагматический разрез по всей длине грудной клетки с ножницами и хирургическими миппами.
  5. Тщательно вытесняя легкие, прорезать грудную клетку до ключицы справа и слева28.
  6. Перелив с 200 мл нормального солевого раствора через левый желудочек сердца.
  7. Прокол или резвиться правого атриума сердца с ножницами.
  8. Выполните обезглавливание с помощью гильотины и собирать ткани мозга.
  9. Используя ножницы радужной оболочки глаза, вырезать из foramen magnum к дистальной кромке задней поверхности черепа с обеих сторон.
  10. Отделить обонятельные луковицы, нервные соединения вдоль брюшной поверхности и спинной поверхности черепа от мозга.
  11. Удалите мозг из головы.
  12. Производить 6 ломтиков мозга, создавая 2 мм толщиной горизонтальные секции с 0,009 "нержавеющей стали, без покрытия, один край лезвие бритвы.
  13. Инкубация в течение 30 мин при 37 градусов по Цельсию в 0,05% TTC.
  14. Поместите ткани мозга на слайды микроскопа и выполните оптическое сканирование этих 6 ломтиков мозга с разрешением 1600x1600 dpi (см. дополнение 1, например).
  15. Добавьте синий фильтр с фоторедактором (например, Adobe Photoshop CS2) с помощью функции Channel Mixer (изображение и настройкии функции Channel Mixer)и сохраните изображение в формате файла JPEG.
    ПРИМЕЧАНИЕ: После применения синего фильтра изображение будет отображаться в сером масштабе.
  16. Откройте сохраненное изображение в ImageJ 1.37v29,30.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Эта компьютерная программа использует пороговую функцию для изоляции и расчета пикселей, которые являются черными или белыми (см. рисунок 1).
  17. Для каждого из 6 ломтиков мозга изображения, выберите и сохраните каждое полушарие (правый раненый ипсилатеральный и левый невредимым контралатеральный) в качестве отдельного файла изображения с использованием инструмента "полигон выбор" из основного меню.
  18. Установите отсею для определения ИК с помощью функции автоматического порога из основного меню программного обеспечения ImageJ, выбрав изображение и отрегулируйте пороговое значение иизмерьте количество пикселей в каждом полушарии одного набора мозга.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Макрос может быть использован для этого шага в программном обеспечении ImageJ (см. Дополнение 2 для кода). Отрезание является критическим параметром для определения того, какие пиксели преобразовать в белый, а какие преобразовать в черный в зависимости от оттенка серого (см. Дополнение 3 и дополнение 4 в качестве примеров). ImageJ затем сравнивает белые и черные пиксели, чтобы определить ИК. Основываясь на протоколе окрашивания и настройках сканера, мы использовали постоянное значение выреза 0.220.
  19. Выполните измерение коррекции ИК для отеков тканей с помощью соотношения ипсилатеральных и контралатеральных полушарий головного мозга (RICH)метод 13,23 (см. пример в дополнение 5).
    figure-protocol-1
    ПРИМЕЧАНИЕ: Размер инфаркта оценивается как процент от контралатерального полушария.

5. Определение отека мозга31

ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте ImageJ 1.37v для измерения BE32,33.

  1. Мера BE 24 h после MCAO. Для расчета BE используйте данные из объема левого и правого полушария (в единицах).
  2. Выполните оптическое сканирование с разрешением 1600x1600 dpi (см. дополнение 1, например).
  3. Выберите полушария мозга и установите отрезание для определения BE с ImageJ 1.37v, как описано выше в разделах 4.17-4.19.
  4. Выразите область BE в процентах от стандартных областей незатронутого контралатерального полушария, рассчитанного методом RICH с использованием следующего уравнения (см. пример в дополнении 5)23,34.
    figure-protocol-2
    ПРИМЕЧАНИЕ: Степень BE оценивается как процент от контралатерального полушария.

6. Определение нарушения BBB

  1. Мера BBB нарушения 24 ч после MCAO.
  2. Разделите правое и левое полушария на шесть ломтиков и положите каждое из них в микроцентрифугную трубку.
  3. Гомогенизировать каждый кусочек ткани мозга в трихлороатетической кислоте, основываясь на расчете 1 г ткани мозга в 4 мл 50% трихлороактической кислоты.
  4. Центрифуга при 10 000 х г в течение 20 мин.
  5. Разбавить супернатант жидкость 1:3 с 96% этанола.
  6. Выполните спектрофотометрию люминесценции, используя программное обеспечение спектрофотометрии, устанавливая пластину и выполняя показания образца, используя следующие параметры: Флуоресцентная интенсивность возбуждения длины волны 620 нм (ширина 10 нм) и длина волны выбросов 680 нм (ширина 10нм) 23,35; Мод сверху; Номер Плоть 25; Руководство 100; Встряхивание 1 сек, 1 мм.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте восклицательный длина волны 620 нм (ширина 10 нм) и длину волны выбросов 680 нм (ширина 10 нм). 23,35

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Измерение инфарктной зоны

Независимый образец t-test показал, что 19 крыс, которые прошли постоянный MCAO продемонстрировали значительное увеличение объема инфаркта мозга по сравнению с 16 фиктивных крыс (MCAO 7,49% ± 3,57 против. Шам - 0,31% ± 1,9, т(28,49) - 7,56, р-н; 0,01 (см. рисунок 2А)). Данные выражаются как средний процент контралатерального полушария ± SD.

Измерение отеков мозга

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Основная цель настоящего протокола состояла в том, чтобы продемонстрировать последовательные измерения трех основных параметров ишемической травмы: проницаемости ИЭЗ, BE и BBB. Предыдущие исследования в этой области продемонстрировали возможность совместного выполнения одного или двух из этих параметров в одной выборке. Помимо сокращения расходов, что этот метод из трех сторон предлагает, он также обеспечивает более желательно биоэтической модели, которая ограничивает количество животных, которые должны управляться, а за...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторов нечего раскрывать.

Благодарности

Благодарим Марину Кушерову, Максима Кривоносова, Дарину Якуменко и Евгению Гончару из кафедры физиологии, биологии, экологии и медицины, Олеся Гончара, Днепровского университета, Днепра, Украины за поддержку и полезный вклад в наши дискуссии. Полученные данные являются частью докторской диссертации Руслана Куца.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
2 мл ШприцBraun4606027V
2% хлоргексидин в 70% спиртовом раствореSigma-Aldrich500 ccОбеспечивает общую антисептическую обработку кожи в операционном поле
27 г Игла со шприцемBraun305620
3-0 Шелковые шовные материалыHenry Schein1007842
4-0 Нейлоновый шов4-00
Мозг и Тканевые матрицыSigma-Aldrich15013
Канюля Venflon 22 GKD-FIX
Центрифуга Sigma 2-16PSigma-AldrichКомпактные
аналитические весыSigma-AldrichHR-AZ/HR-A
Цифровые весы
Препарирующие ножницыПипетка Sigma-AldrichZ265969
EppendorfSigma-AldrichZ683884
трубка EppendorfSigma-AldrichEP0030119460
Флуоресцентный детекторTecan, Mä nnedorf SwitzerlandМодель: многорежимный считыватель Infinite 200 PROОпционально.
Флуоресцентный детекторMolecular Devices LLCVWR кат. # 10822 512 SpectraMax Paradigm Multi Mode Microplate Reader Базовый приборопционально.
Марлевые губкиFisher22-362-178
Нагреватель с термометромГрелка-1Модель: ГРЕЛКА-1/2
Кровоостанавливающие микроклипсыSigma-Aldrich
Horizon-XLMennen Medical Ltd
Инфузионная манжетаABNIC-500
МикрощипцыSigma-Aldrich
МикроножницыSigma-Aldrich
MultisetTeva Medical998702
микроскоп Olympus BX 40Операционные
Операционные ножницыSigma-Aldrich
3200 x 6400 точек на дюйм
Чашки ПетриSigma-AldrichP5606
Purina ChowPurina5001Лабораторный корм для грызунов, который дают крысам, мышам и хомякам, является пищей жизненного цикла, которая используется в биомедицинских исследованиях уже более 5 десятилетий. Предоставляется крысам в неограниченном количестве в этом эксперименте.
Клетки для крысTechniplast2000PОбычное жилье для грызунов. Клетки для содержания крыс использовались на протяжении всего эксперимента
Лезвия скальпеля #11Sigma-AldrichS2771
Software
Adobe Photoshop CS2 для WindowsAdobe ImageJ
1.37vNIHИсходный код находится в свободном доступе. Автор, Уэйн Расбанд (wayne@codon.nih.gov лет), работает в отделе исследовательских услуг Национального института психического здоровья, Бетесда, штат Мэриленд, США
SPSS Statistics 22IBM
Office 365 ProPlusMicrosoft-MicrosoftOffice Excel
Windows 10Microsoft
Reagents
2,3,5-трифенилтетразолия хлоридSigma-Aldrich298-96-4
50% трихлоруксусная кислотаSigma-Aldrich76-03-9
Этанол 96RomicalЛегковоспламеняющаяся жидкость
Evans blue 2%Sigma-Aldrich314-13-6
Изофлуран, USP 100%Piramamal Critical Care, IncNDC 66794-017
183603985447 Sigma-Aldrich Rs 4,000 щипцы Olympus Оптический сканер Sigma-Aldrich Canon Cano Scan 4200F Разрешение %

Ссылки

  1. Krishnamurthi, R. V., et al. Global and regional burden of first-ever ischaemic and haemorrhagic stroke during 1990-2010: findings from the Global Burden of Disease Study 2010. Lancet Global Health. 1, 259-281 (2013).
  2. Benjamin, E. J., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2017 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 135, 146(2017).
  3. Wilkins, E., et al. European cardiovascular disease statistics 2017. , (2017).
  4. Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research. Drug Design, Development and Therapy. 9, 3445-3454 (2015).
  5. Lloyd-Jones, D., et al. Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 119, 480-486 (2009).
  6. Shigeno, T., McCulloch, J., Graham, D. I., Mendelow, A. D., Teasdale, G. M. Pure cortical ischemia versus striatal ischemia. Circulatory, metabolic, and neuropathologic consequences. Surgical Neurology. 24, 47-51 (1985).
  7. Albanese, V., Tommasino, C., Spadaro, A., Tomasello, F. A transbasisphenoidal approach for selective occlusion of the middle cerebral artery in rats. Experientia. 36, 1302-1304 (1980).
  8. Hudgins, W. R., Garcia, J. H. Transorbital approach to the middle cerebral artery of the squirrel monkey: a technique for experimental cerebral infarction applicable to ultrastructural studies. Stroke. 1, 107-111 (1970).
  9. Waltz, A. G., Sundt, T. M., Owen, C. A. Effect of middle cerebral artery occlusion on cortical blood flow in animals. Neurology. 16, 1185-1190 (1966).
  10. Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 1, 53-60 (1981).
  11. Aspey, B. S., Cohen, S., Patel, Y., Terruli, M., Harrison, M. J. Middle cerebral artery occlusion in the rat: consistent protocol for a model of stroke. Neuropathology and Applied Neurobiology. 24, 487-497 (1998).
  12. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20, 84-91 (1989).
  13. O'Brien, M. D., Jordan, M. M., Waltz, A. G. Ischemic cerebral edema and the blood-brain barrier. Distributions of pertechnetate, albumin, sodium, and antipyrine in brains of cats after occlusion of the middle cerebral artery. Archives of Neurology. 30, 461-465 (1974).
  14. Chen, C. H., Toung, T. J., Sapirstein, A., Bhardwaj, A. Effect of duration of osmotherapy on blood-brain barrier disruption and regional cerebral edema after experimental stroke. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 26, 951-958 (2006).
  15. Boyko, M., et al. Establishment of Novel Technical Methods for Evaluating Brain Edema and Lesion Volume in Stroked Rats: a Standardization of Measurement Procedures. Brain Research. , (2019).
  16. Boyko, M., et al. An experimental model of focal ischemia using an internal carotid artery approach. Journal of Neuroscience Methods. 193, 246-253 (2010).
  17. Sifat, A. E., Vaidya, B., Abbruscato, T. J. Blood-Brain Barrier Protection as a Therapeutic Strategy for Acute Ischemic Stroke. AAPS Journal. 19, 957-972 (2017).
  18. Jiang, X., et al. Blood-brain barrier dysfunction and recovery after ischemic stroke. Progress in Neurobiology. 163-164, 144-171 (2018).
  19. Belayev, L., Busto, R., Zhao, W., Ginsberg, M. D. Quantitative evaluation of blood-brain barrier permeability following middle cerebral artery occlusion in rats. Brain Research. 739, 88-96 (1996).
  20. Li, L., Yu, Q., Liang, W. Use of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride-stained brain tissues for immunofluorescence analyses after focal cerebral ischemia in rats. Pathology - Research and Practice. 214, 174-179 (2018).
  21. Kramer, M., et al. TTC staining of damaged brain areas after MCA occlusion in the rat does not constrict quantitative gene and protein analyses. Journal of Neuroscience Methods. 187, 84-89 (2010).
  22. Kuts, R., et al. A middle cerebral artery occlusion technique for inducing post-stroke depression in rats. Journal of Visualized Experiments. , e58875(2019).
  23. Kuts, R., et al. A Novel Method for Assessing Cerebral Edema, Infarcted Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Post-stroke Rodent Brain. Frontiers in Neuroscience. 13, 1105(2019).
  24. McGarry, B. L., Jokivarsi, K. T., Knight, M. J., Grohn, O. H. J., Kauppinen, R. A. A Magnetic Resonance Imaging Protocol for Stroke Onset Time Estimation in Permanent Cerebral Ischemia. Journal of Visualized Experiments. , e55277(2017).
  25. Uluc, K., Miranpuri, A., Kujoth, G. C., Akture, E., Baskaya, M. K. Focal cerebral ischemia model by endovascular suture occlusion of the middle cerebral artery in the rat. Journal of Visualized Experiments. , e1978(2011).
  26. Boyko, M., et al. The effect of blood glutamate scavengers oxaloacetate and pyruvate on neurological outcome in a rat model of subarachnoid hemorrhage. Neurotherapeutics. 9, 649-657 (2012).
  27. Kuts, R., et al. A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats. Journal of Visualized Experiments. , e58875(2019).
  28. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of Visualized Experiments. , e3564(2012).
  29. Poinsatte, K., et al. Quantification of neurovascular protection following repetitive hypoxic preconditioning and transient middle cerebral artery occlusion in mice. Journal of Visualized Experiments. , e52675(2015).
  30. Rasband, W. S. ImageJ, U. S. National Institutes of Health. , Bethesda, Maryland, USA. Available from: https://imagej.nih.gov/ij (2018).
  31. Boyko, M., et al. Pyruvate's blood glutamate scavenging activity contributes to the spectrum of its neuroprotective mechanisms in a rat model of stroke. European Journal of Neuroscience. 34, 1432-1441 (2011).
  32. Collins, T. J. ImageJ for microscopy. Biotechniques. 43, 25-30 (2007).
  33. Rasband, W. S. ImageJ, U. S. National Institutes of Health. , Bethesda, Maryland, USA. Available from: https://imagej.nih.gov/ij (1997).
  34. Kaplan, B., et al. Temporal thresholds for neocortical infarction in rats subjected to reversible focal cerebral ischemia. Stroke. 22, 1032-1039 (1991).
  35. Kumai, Y., et al. Postischemic gene transfer of soluble Flt-1 protects against brain ischemia with marked attenuation of blood-brain barrier permeability. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 27, 1152-1160 (2007).
  36. Schuleri, K. H., et al. Characterization of peri-infarct zone heterogeneity by contrast-enhanced multidetector computed tomography: a comparison with magnetic resonance imaging. Journal of the American College of Cardiology. 53, 1699-1707 (2009).
  37. Singh, A., Kukreti, R., Saso, L., Kukreti, S. Oxidative Stress: A Key Modulator in Neurodegenerative Diseases. Molecules. 24, (2019).
  38. Di Napoli, M. Caplan's Stroke: A Clinical Approach. Journal of the American Medical Association. 302, 2600-2601 (2009).
  39. Deb, P., Sharma, S., Hassan, K. M. Pathophysiologic mechanisms of acute ischemic stroke: An overview with emphasis on therapeutic significance beyond thrombolysis. Pathophysiology. 17, 197-218 (2010).
  40. Simard, J. M., Kent, T. A., Chen, M., Tarasov, K. V., Gerzanich, V. Brain oedema in focal ischaemia: molecular pathophysiology and theoretical implications. Lancet Neurology. 6, 258-268 (2007).
  41. Klatzo, I. Pathophysiological aspects of brain edema. Acta Neuropathology. 72, 236-239 (1987).
  42. Yang, Y., Rosenberg, G. A. Blood-brain barrier breakdown in acute and chronic cerebrovascular disease. Stroke. 42, 3323-3328 (2011).
  43. Lin, T. N., He, Y. Y., Wu, G., Khan, M., Hsu, C. Y. Effect of brain edema on infarct volume in a focal cerebral ischemia model in rats. Stroke. 24, 117-121 (1993).
  44. Liu, C., et al. Increased blood-brain barrier permeability in contralateral hemisphere predicts worse outcome in acute ischemic stroke after reperfusion therapy. Journal of NeuroInterventional Surgery. 10, 937-941 (2018).
  45. Boyko, M., et al. Establishment of novel technical methods for evaluating brain edema and lesion volume in stroked rats: A standardization of measurement procedures. Brain Research. 1718, 12-21 (2019).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Окклюзия средней мозговой артерииизмерение зоны инфарктаанализ отека мозгаокрашивание ТТЦанализ в ImageJгомогенизация с использованием трихлоруксусной кислотылюминесцентная спектрофотометриямодель ишемического инсульта
Измерение посттактного церебрального отека, зоны инфаркта и пробок гемо-мозгового барьера в одном наборе образцов мозга грызунов
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.