Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Изготовление биомиметического нано-матрицы с нанотрубок Janus Base и фибронектина для агезии стволовых клеток

3.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/61317

⸱

10 мая 2020 г.

 ,  ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, University of Connecticut

В этой статье

Краткое содержание

Целью этого протокола является показать сборку биомиметического наноматрикса (NM) с нанотрубками Janus base (JBNTs) и фибронектином (FN). При совместной культуре с человеческими мезенхимальными стволовыми клетками (HMSCs), NMs обладают отличной биоактивностью в поощрении адгезии HMSCs.

Аннотация

Биомиметический НМ был разработан в качестве ткани инженерии биологических эшафот, который может повысить якорь стволовых клеток. Биомиметический НМ образуется из JBNTs и FN через самосвечение в aqueous растворе. JBNTs измеряют 200-300 мкм в длину с внутренними гидрофобными полыми каналами и внешними гидрофильные поверхности. JBNTs положительно взимается и FNs отрицательно взимается. Таким образом, при введении в нейтральный aqueous решение, они связаны друг с другом через noncovalent связи для формирования NM расслоения. Процесс самос сборки завершается в течение нескольких секунд без каких-либо химических инициаторов, источника тепла или УФ-излучения. Когда рН раствора NM ниже, чем изоэлектрический пункт FNs (pI 5.5-6.0), NM пучки будут самостоятельно выпускать из-за наличия положительно заряженных FN.

NM, как известно, имитирует внеклеточной матрицы (ECM) морфологически и, следовательно, может быть использован в качестве инъекционных эшафот, который обеспечивает отличную платформу для повышения hMSC адгезии. Анализ плотности клеток и эксперименты по визуализации флуоресценции показали, что НМ значительно увеличили крепление ГМС по сравнению с отрицательным контролем.

Введение

Мезенхимальные стволовые клетки человека (ГМСЦ) показали потенциал для самооб обновления и самооценки по различным мезенхимальным линиям, что помогает в регенерации и поддержаниитканей 1. Основываясь на потенциале дифференциации, HMSCs рассматриваются в качестве кандидатов для мезенхимальных травм тканей и гематопоэтического расстройстватерапии 2. HMSCs показали способность содействовать заживлению ран путем увеличения восстановления тканей, ангиогенез, и снижение воспаления3. Однако, без биохимической помощи или биоматериалов, эффективность для HMSCs для достижения целевой ткани и функции в нужном месте является низким4. Хотя различные инженерии леса были использованы для привлечения HMSCs придерживаться на поражения, некоторые сайты, такие как рост перелом пластины, в середине длинной кости, не легко доступны по обычным сборных лесов, которые не могут идеально вписываться в неправильной формы раненых сайта.

Здесь мы разработали биомиметический наноматериал, который может самостоятельно собираться на месте и вводиться в труднодоступную целевую область. Инъекционные био-эшафот NM состоит из Janus базовых нанотрубок (JBNTs) и фибронектин (FN). JBNTs, также известный как розетки нанотрубки (RNTs), являются производными от ДНК базовых пар, в частности, тимин иаденин, здесь 5,6,7. Как видно на рисунке 1, нанотрубки образуются, когда шесть молекул производных пар базы ДНК самосберуются через водородные связи, чтобы сформироватьплоскость 6. Шесть молекул затем укладываются друг на друга в плоскости через сильное взаимодействие pi-укладки7, который может быть до 200-300 мкм в длину. JBNTs предназначены для морфологически имитировать коллагеновых волокон, так что FN будет реагировать с ними.

FN является высоким молекулярным весом клей гликопротеин, который можно найти во внеклеточной матрицы (ECM)9. Они могут одолеть присоединение стволовых клеток к другим компонентам ECM, особенно коллагена10. Мы разработали JBNTs для морфологически имитировать коллагеновые волокна, чтобы FN может реагировать с ними, чтобы сформировать НМ в течение нескольких секунд с помощью нековалентной связи. Таким образом, NM является перспективным био-эшафот, который будет введен в кости перелом сайта, которые не могут быть доступны по условно изготовленные леса. Здесь, инъекционные НМ представляет собой отличную способность для повышения hMSC якорь в пробирке, демонстрировали свой потенциал, чтобы служить в качестве леса для регенерации тканей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Синтез JBNTs

ПРИМЕЧАНИЕ: JBNT мономер был подготовлен, как опубликовано ранее11.

  1. Синтез соединения А1
    1. Приготовьте раствор, содержащий 8,50 г 2-цианоацетической кислоты и 9,80 г этилкарбамата в 25 мл толуола и 2,5 мл N, N-диметилформамида. Добавьте 4,90 мл фосфорилхлорида. Затем нагрейте смесь до 70 градусов по Цельсию и продолжайте помешивать в течение 1,5 ч.
    2. Охладить реакционной смеси до комнатной температуры и влить 100 г ледяной воды. Извлекить акевый слой с этил ацетатом (3 х 250 мл) и промыть 100 мл рассола. Высушите органический слой над сульфатом натрия, прокрикните и испарите летучие вещества под вакуумом, чтобы получить бледно-желтый твердый.
    3. Субъект желтый твердый кремнезем гель флэш-колонки хроматографии (3% метанола / дихлорметана), чтобы дать 15,61 г соединения А1 в качестве белого порошка.
  2. Синтез соединения А2
    1. Смешайте 3,12 г соединения А1 и 2,75 г карбоната калия в 50 мл N, N-диметилформамида. Перемешать при комнатной температуре в течение 2 ч.
    2. Добавьте 2,6 мл дисульфида углерода в реакционной подвеске. Продолжайте помешивать в течение 4 ч.
    3. Добавьте абсолютный этанол в реакционной смеси при 0 градусов по Цельсию. Фильтр желтый осадок и мыть с диэтил эфира. Высушите под вакуумом на ночь, чтобы дать 6,18 г соединения А2 в качестве бледно-желтого твердого тела.
  3. Синтез соединения А3
    1. Добавьте 2,7 мл метилового йодида в 15 мл ацетонитрила. Также отдельно подготовьте раствор соединения А2, добавив 6,18 г А2 до 80 мл воды/ацетонитрила (7:3 соотношения). Смешайте растворы и перемешайте при комнатной температуре в течение 30 минут.
    2. Нагрейте реакционной смеси до 95 градусов по Цельсию и продолжайте помешивать в течение 3 ч.
    3. Охладить реакционной смеси до комнатной температуры, а затем испарять летучих веществ в вакууме.
    4. Извлекить остатки 3x с 100 мл этилового ацетата и промыть рассолом. Высушите органический слой над сульфатом натрия, прокрикните и испарите летучие вещества под вакуумом, чтобы получить желтую твердую.
    5. Субъект желтый твердый кремнезем гель флэш-колонки хроматографии (30% этилового ацетата / гексан), чтобы дать 4,52 г соединения A3 в качестве светло-желтого твердого тела.
  4. Синтез соединения А4
    1. Приготовьте раствор стиламина, добавив 925 л ариламина в 20 мл этанола. Добавьте этот раствор к раствору соединения A3, приготовленное путем добавления 3,14 г А3 в 75 мл абсолютного этанола, более 30 мин. Затем нагрейте реакционной смеси на рефлюкс в течение 16 ч.
    2. Охладить реакционной смеси до комнатной температуры и испарять летучих веществ, чтобы дать желтый твердых.
    3. Субъект желтого твердого кремнезема гель флэш-колонки хроматографии (50% этилового ацетата / гексанов до 2% метанола / дихлорметана), чтобы дать 1,80 г соединения А4 в качестве белого кристалла.
  5. Синтез соединения А5
    1. Добавьте 2,05 г гидрохлорида гуанидиния и 7,8 мл этиксида натрия (21 вт% этанола) в 14 мл абсолютного этанола. Нагрейте смесь до 45 градусов по Цельсию в течение 15 мин.
    2. Отфильтруйте нерастворимый материал и добавьте фильтрат непосредственно в раствор соединения А4, приготовленного путем добавления 2,70 г А4 в абсолютный этанол 40 мл. Нагрейте реакционной смеси на рефлюкс в течение 16 ч.
    3. Фильтр осадок, чтобы получить 2,65 г соединения A5 в качестве небелого твердого тела.
  6. Синтез соединения А6
    1. Добавьте 24,9 мл триэтиламина медленно в смесь суспензии, полученную путем добавления 2,11 г соединения A5 и 1,10 г 4-диметиламинопиридин в 120 мл тетрагидрофурана в течение 1 мин. Перемешать при комнатной температуре в течение 2 мин.
    2. Добавьте 20,7 мл ди-терт-бутила дикарбоната в реакционной смеси и продолжайте помешивать при комнатной температуре в течение 40 ч.
    3. Добавьте 20 мл воды, чтобы утолить реакцию. Испарить летучих веществ в вакууме.
    4. Извлекайте красный вязкий остаток с 500 мл этилового ацетата. Затем промойте его 250 мл воды, 75 мл 10% лимонной кислоты, 2x с 200 мл воды, 200 мл насыщенного бикарбоната натрия и 200 мл рассола. Высушите органический слой над сульфатом натрия, прокрикните и испарите летучие вещества под вакуумом, чтобы дать красный/оранжевый твердый.
    5. Субъект твердых кремнезема гель флэш-колонки хроматографии (0-20% этилового ацетата / гексан), чтобы дать 3,87 г соединения A6 в качестве белой пены.
  7. Синтез соединения A7
    1. Добавить N-метилморфолин N-оксид (50 wt.% в воде, 1,64 мл) dropwise к раствору соединения A6 (2,93 г) в ацетон / вода (8:1, 58,5 мл) и перемешать при комнатной температуре в течение 5 мин.
    2. Добавить осмий тетраоксид (4% aqueous раствор) dropwise к смеси в течение 3 мин и держать перемешивания при комнатной температуре в течение 24 ч.
    3. Утолить реакцию с 1,0 М aqueous сульфита натрия, пока раствор оказывается бесцветным. Удалите летучие веществ под вакуумом, чтобы привести к белой суспензии в воде. Извлекить остатки с 350 мл дихлорметана, а затем промыть 150 мл воды с последующим мытьем с 150 мл рассола.
    4. Высушите органический слой над сульфатом натрия, прокрикните и испарите летучие вещества под вакуумом, чтобы дать 2,45 г соединения A7 в качестве белого твердого тела.
  8. Синтез соединения A8
    1. Добавьте 760 г натрия в смесь 1,36 г соединения А7 в 35 мл дихлорметана/воды (6:1, 35 мл) и перемешайте при комнатной температуре 42 ч.
    2. Отфильтруй нерастворимый материал и сконцентрируй фильтрат в вакууме. Извлекить полученный остаток с 250 мл дихлорметана, а затем промыть 100 мл воды и 100 мл рассола. Высушите органический слой над сульфатом натрия, прокрикните и испарите летучие вещества под вакуумом, чтобы дать сырой продукт.
    3. Субъект сырой продукт кремнезема гель флэш-колонки хроматографии (5-40% этилового ацетата / гексанов, а затем 5% метанола / дихлорметана), чтобы дать 1,08 г соединения A8.
  9. Синтез соединения A9
    1. Приготовьте раствор из 830 мг соединения A8 в 15 мл 1,2-дихлороэтана. Добавить раствор dropwise в смесь 6-бензилоксикарбониламино-2-L-амино-гексаноиновой кислоты триметилсилил этилэстер (649,5 мг) и N,N-diisopropylethylamine (591 йл) в 24 мл 1,2-дихлороэтана в течение 3 мин и перемешать при комнатной температуре в течение 15 мин.
    2. Добавьте 360,3 мг триацетоксиборогидрида натрия в раствор и продолжайте помешивать при комнатной температуре в течение 24 ч.
    3. Утолить реакционной смеси с 6 мл воды. Извлекайте реакционной смеси 3x с 200 мл дихлорметана и мыть с 200 мл 10% лимонной кислоты в воде, 2x с 200 мл воды, 200 мл насыщенного бикарбоната натрия, и 200 мл рассола в этом порядке. Высушите органический слой над сульфатом натрия, прокрикните и испарите летучие вещества под вакуумом для получения сырого продукта.
    4. Подай сырой продукт кремнезема гель флэш-колонки хроматографии (5-30% этилового ацетата / гексана), чтобы дать 885 мг соединения A9.
  10. Синтез мономера JBNT
    1. Растворите 0,54 г соединения A9 (0,54 г) в 10 мл 94% трифтороакетической кислоты/тиоанисола раствора и перемешайте при комнатной температуре 72 ч.
    2. Добавьте диэтил эфир (80 мл) в реакционной смеси и центрифуга осадка вниз. Налейте четкую трифтороацетную кислоту, содержащую супернатант, и вымойте белый осадок диэтил эфиром и метанолом, чтобы дать 168,6 мг сырого мономера JBNT(дополнительный файл 1).
    3. Очистить сырой мономер JBNT высокой производительностью жидкой хроматографии (HPLC) с обратной фазовой колонкой. Программа изоляции приведена ниже: Solvent A: 100% вода; растворитель B: 100% ацетонитрил; растворитель C: раствор воды рН-1 HCl; скорость потока: 3 мл/мин (см. таблицу 1).
    4. Соберите самый большой пик примерно в 7,2 мин.

2. Изготовление для JBNT/FN

  1. Добавьте 80 л раствора 1 мг/мл JBNT в 40 л раствора FN и пипетки несколько раз.
  2. Проверьте наличие белой твердой подвески после пипетки около 10 с.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Видео было снято, чтобы захватить процесс самос сборки NM(Дополнительный файл 2).

3. Наблюдение за лиофилизированными образцами

ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг выполняется, чтобы показать эшафот структуры НМ из JBNTs и FN.

  1. Подготовка решений FN, JBNT и FN/JBNT NM для наблюдения за лиофилизированными материалами. Разбавить 10 МКЛ из 100 мкг/мл FN с 40 йл дистиллированной воды, чтобы сделать 20 мкг / мл раствор FN.
  2. Приготовьте раствор JBNTs на 100 мг/мл, разбавляя 5 МКЛ 1 мг/мл JBNTs в 45 МКЛ воды DI.
  3. Смешайте 10 МКЛ из 100 мкг/мл FN и 5 МКЛ 1 мг/мл JBNTs в 35 МКЛ воды DI для формирования раствора НМ.
  4. Пальто три скважины 96-ну ясно круглые круглые микроплоцы с FN, JBNT решения и NM решение, соответственно. Каждая колодец получает 50 йл раствора.
  5. Выполните лиофилизацию, как описано ниже, чтобы визуализировать структуру эшафота NM.
    1. Заморозить пластину при -80 градусов по Цельсию на ночь.
    2. Включите лиофилизированный инструмент и вакуумный насос.
    3. Нажмите кнопку охлаждения, чтобы снизить температуру системы до -50 градусов по Цельсию.
    4. Положите замороженную пластину в лиофилизированный инструмент и закройте все отверстия инструментов.
    5. Нажмите кнопку "Пуск", чтобы снизить давление в системе до 0,9 мбара.
    6. После 4 ч нажмите кнопку аэрата и откройте клапан, чтобы увеличить давление системы до атмосферного давления.
    7. Вывими тарелку из лиофилизированного инструмента.
    8. Используйте микроскоп для наблюдения за FN, JBNTs и в результате самостоятельно собранных НМ. Сделай несколько фотографий с камерой для материалов.

4. Измерение спектров абсорбции

ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте изменение спектров для FN и JBNTs, чтобы представить самосборные JBNT/FN NM12.

  1. Смешайте 30 МКЛ из 100 МКГ/мл FN с 15 л дистиллированной воды и 5 л 1 мг/мл JBNTs для подготовки раствора JBNT/FN NM. Белая твердая подвеска можно увидеть после трубы раствора несколько раз.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Окончательные концентрации JBNTs и FN в растворе 100 мкг/мл и 60 мкг/мл, соответственно. Решения JBNTs и FN в той же концентрации, что и решения NM, также были подготовлены в качестве контрольных решений.
  2. Разбавить 5 л 1 мг/мл JBNTs с 45 йл дистиллированной воды для подготовки раствора управления JBNT.
  3. Разбавить 30 МКЛ из 100 мкг/мл FN с 20 йл дистиллированной воды для подготовки FN контрольный раствор.
  4. Измерьте уф-виз абсорбционные спектры решений FN, JBNT и JBNT/FN NM с помощью спектрофотометра (см. таблицу материалов),чтобы охарактеризовать сборку NM.
    1. Нажмите кнопку UV-Vis. Очистите испытательную поверхность спектрофотометра и опустите на него 2 мл дистиллированной воды. Измерьте его как пустой от 190-850 nm.
    2. Очистите испытательную поверхность спектрофотометра и опустите на него 2 МКЛ раствора FN. Измерьте спектр поглощения UV-Vis раствора FN от 190 нм до 850 нм.
    3. Очистите испытательную поверхность спектрофотометра и опустите на него 2 мл раствора JBNT. Измерьте спектры поглощения раствора JBNT от 190 нм до 850 нм.
    4. Очистите испытательную поверхность спектрофотометра и опустите на него 2 МКЛ раствора JBNT/FN NM. Измерьте спектр поглощения раствора JBNT/FN NM со 190 нм до 850 нм.

5. Подготовка JBNT/FN NM к передаче электронной микроскопии (TEM)

  1. Очистите несколько сеток перед отрицательным окрашивание с помощью основного очистителя плазмы (см. таблицу материалов).
  2. Выполните отрицательное окрашивание для образцов после двух различных процессов.
    1. Падение 3 л 1 мг/мл aqueous раствора JBNTs и 3 л раствора JBNT/FN NM на разделенных сетках и оставьте его на 2 мин. Затем промойте каждую сетку раствором уранил ацетата (UA) 100 МКЛ 0,5%. Слейте излишки раствора с фильтровальной бумагой и высушите сетки.
    2. Смешайте 9 МКЛ раствора JBNT/FN NM с 3 йл раствора 2,0% UA и пипетка его несколько раз. Pipette смешанный раствор на сетках и держать его на сетках в течение 2 минут. Используйте фильтровальную бумагу, чтобы удалить смешанный раствор из сетки и высушить сетки при комнатной температуре.
  3. Наконец, характеризовать образец для JBNTs, JBNT / FN NM окрашенных шаг 5.2.1, и JBNT / FN NM окрашенных шаг 5.2.2 с TEM.

6. Анализ биологических функций in vitro

  1. Добавьте 200 мкл отрицательных элементов управления (NC, PBS), JBNTs, FN и РЕШЕНИЯ JBNT/FN NM в одну колодец 8-хорошо камерного слайда, соответственно.
  2. Заморозить сухой 8-хорошо камерный стекло с лиофилизированным инструментом для покрытия материалов на дне скважин. Протокол замораживания сушки такой же, как шаг 3.5.
  3. Затем добавьте 10 000 ячеек/колодцев HMSCs (Passage 3) в скважины и инкубировать их в течение 24 ч при 37 градусах Цельсия с 5% CO2.
  4. После инкубации, пипетка из среды клеточной культуры из колодцев и промыть культуру с 1x PBS раствор.
  5. Добавьте 100 МКЛ фиксаторного раствора в каждую колодец с клетками и оставьте на 5 минут. Промыть клетки осторожно с 1x PBS в два раза.
  6. Разбавить 1% Triton-X 100 до 0,1%. Добавьте 100 йл 0,1% Triton-X 100 к каждому колодец с клетками и оставьте на 10 мин. Промыть клетки осторожно с 1x PBS в два раза.
  7. Разбавить ромин фаллоидин до 1,65 МКМ. Добавить 100 МКЛ ромамина фаллоидин к каждому хорошо с клетками и инкубировать камерное стекло, удерживая от света при комнатной температуре в течение 30 мин. Промыть клетки осторожно с 1x PBS в два раза.
  8. Захват изображений клеток с помощью флуоресцентного микроскопа.
  9. Подсчитайте числа клеток на флуоресцентных изображениях для каждой группы. Рассчитайте плотность адгезии клеток путем усреднения трех случайных областей в каждой хорошо.
  10. Представить все данные в качестве среднего ± стандартного отклонения (SD). Выполняйте статистические анализы с использованием однохвостый t-тест, а затем анализ дисперсии (ANOVA) с p'lt;0.05, который считается статистически значимым.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Наши исследования показали, что образование NM JBNTs и FN быстро, что произошло в 10 секунд. Как показано на рисунке 2, белый floccule был получен, когда решение JBNT был смешан с раствором FN и pipetted несколько раз. Процесс образования НМ полностью биомиметичен. Внешние стимулы не нужны. Процесс изготовления гораздо проще, чем у некоторых новых биоматериалов, который основан на ультрафиолетовом свете или химическом инициаторе перекрестногопересечения 13.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом исследовании мы разработали самосборный биомиметический НМ, который был сформирован с помощью ДНК-вдохновил JBNTs и FN. При подготовке решения JBNT лиофилизированный порошок JBNT должен растворяться в воде вместо PBS, потому что PBS вызовет агломерацию JBNTs, которая препятствует их сборке. Кроме того, NM также должны быть собраны в воде, если мы хотим наблюдать нано-фибрилляции структур НМ, потому что соль в PBS будет в комплекте с NM волокон, которые могут значительно уменьшить разрешение изображений.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Д-р Yupeng Чэнь является соучредителем NanoDe терапии, Inc

Благодарности

Эта работа финансово поддерживается NIH (Гранты 1R01AR072027-01, 1R03AR069383-01), NSF Карьера премии (1653702) и Университета Коннектикута.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1,2-дихлорэтанAlfa Aesar39121
2-цианоуксусная кислотаSigma-AldrichC88505
4-диметиламинопиридинTCI AmericaD1450
8 лунок Камерное покровное стеклоThermo Fisher155409
96-луночный планшетCorning353072
абсолютного этанолаThermo FisherBP2818500
ацетонSigma-Aldrich179124
ацетонитрилSigma-Aldrich34851
аллиламинSigma-Aldrich145831
Основной очиститель плазмыHarrick PlasmaPDC32G
лимонная кислотаSigma-Aldrich251275
концентрированный соляная кислотаSigma-AldrichH1758
Деионизированная водаThermo Fisher15230147
дихлорметанSigma-Aldrich270997
диэтиловый эфирSigma-Aldrich296082
ди-трет-бутилдикарбонатSigma-Aldrich361941
этилацетатSigma-Aldrich319902
этилкарбаматSigma-AldrichU2500
фибронектинThermo FisherPHE0023
фиксирующий раствор (4% формальдегид, приготовленный в PBS)Thermo FisherR37814
гидрохлорид гуанидинияАльфа Аэсар A13543
гексаныSigma-Aldrich227064
человека мезенхимальные стволовые клеткиLonzaPT-2501
метанолSigma-Aldrich34860
метилйодидSigma-Aldrich289566
N,N-диизопропилэтиламинAlfa AesarA17114
N,N-диметилформамидSigma-Aldrich227056
N-метилморфолин N-оксидAlfa AesarA19802
Тетраоксид осмияАльфа Aesar45385
Пенициллин-стрептомицинThermo Fisher15140163
фосфатный буферный растворThermo Fisher20012050
фосфорилхлоридSigma-Aldrich201170
карбонат калияSigma-Aldrich347825
колонка обратной фазыThermo Fisher25305-154630
Родамин ФаллоидинThermo FisherR415
силикагельTCI AmericaS0821
бикарбонат натрияSigma-AldrichS6014
этоксид натрияAlfa AesarL13083
периодид натрияSigma-Aldrich71859
сульфат натрияSigma-Aldrich239313
сульфит натрияSigma-AldrichS0505
триацетоксиборогидриднатрия Alfa AesarB22060
спектрофотометр (NanoDrop One/Onec UV-Vis)Thermo FisherND-ONE-W
Среда для роста стволовых клеток BulletKitLonzaPT-3001
тетрагидрофуранSigma-Aldrich401757
тиоанизолSigma-AldrichT28002
толуолSigma-Aldrich179418
триэтиламиномAlfa Aesar A12646
трифторуксусная кислотаAlfa Aesar A12198
Triton X-100Thermo FisherHFH10
Раствор трипсин-ЭДТАThermo Fisher25200056

Ссылки

  1. Yao, W., et al. Improved mobilization of exogenous mesenchymal stem cells to bone for fracture healing and sex difference. Stem Cells. 34 (10), 2587-2600 (2016).
  2. Salasznyk, R. M., Williams, W. A., Boskey, A., Batorsky, A., Plopper, G. E. Adhesion to vitronectin and collagen I promotes osteogenic differentiation of human mesenchymal stem cells. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 1 (2004), 24-34 (2004).
  3. Hadjiargyrou, M., O'Keefe, R. J. The convergence of fracture repair and stem cells: interplay of genes, aging, environmental factors and disease. Journal of Bone and Mineral Research. 29 (11), 2307-2322 (2014).
  4. De Becker, A., Riet, I. V. Homing and migration of mesenchymal stromal cells: How to improve the efficacy of cell therapy. World Journal of Stem Cells. 8 (3), 73-87 (2016).
  5. Chen, Y., Song, S., Yan, Z., Fenniri, H., Webster, T. J. Self-assembled rosette nanotubes encapsulate and slowly release dexamethasone. International Journal of Nanomedicine. 6, 1035-1044 (2011).
  6. Song, S., Chen, Y., Yan, Z., Fenniri, H., Webster, T. J. Self-assembled rosette nanotubes for incorporating hydrophobic drugs in physiological environments. International Journal of Nanomedicine. 6, 101-107 (2011).
  7. Fenniri, H., et al. Helical Rosette Nanotubes: Design, Self-Assembly, and Characterization. Journal of the American Chemical Society. 123 (16), 3854-3855 (2001).
  8. Chen, Y., et al. Self-assembled rosette nanotube/hydrogel composites for cartilage tissue engineering. Tissue Engineering Part C Methods. 16 (6), 1233-1243 (2010).
  9. Van den Bogaerdt, A. J., et al. Collagen cross-linking by adipose-derived mesenchymal stromal cells and scar-derived mesenchymal cells: Are mesenchymal stromal cells involved in scar formation. Wound Repair and Regeneration. 17 (4), 548-558 (2009).
  10. Erickson, H. P., Carrell, N., McDonagh, J. Fibronectin molecule visualized in electron microscopy: a long, thin, flexible strand. Journal of Cell Biology. 91 (3), 673-678 (1981).
  11. Chen, Q., Yu, H. C., Chen, Y. P. U. S. Patent. , 20170362238A1 (2017).
  12. Zhou, L., et al. Self-assembled biomimetic Nano-Matrix for stem cell Anchorage. Journal of Biomedical Materials and Research. 108, 984-991 (2020).
  13. Jones, M., Leroux, J. Polymeric micelles - a new generation of colloidal drug carriers. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 48 (2), 101-111 (1999).
  14. Singh, P., Schwarzbauer, J. E. Fibronectin and stem cell differentiation - lessons from chondrogenesis. Journal of Cell Science. 125, 3703-3712 (2012).
  15. Martino, M. M., et al. Controlling integrin specificity and stem cell differentiation in 2D and 3D environments through regulation of fibronectin domain stability. Biomaterials. 30 (6), 1089-1097 (2009).
  16. Somaiah, C., et al. Collagen promotes higher adhesion, survival and proliferation of mesenchymal stem cells. PLoS One. 10 (12), 0145068(2015).
  17. Ogura, N., et al. Differentiation of the human mesenchymal stem cells derived from bone marrow and enhancement of cell attachment by fibronectin. Journal of Oral Science. 46 (4), 207-213 (2004).
  18. Do, A. V., Khorsand, B., Geary, S. M., Salem, A. K. 3D Printing of scaffolds for tissue regeneration applications. Advanced Healthcare Materials. 4 (12), 1742-1762 (2015).
  19. Shi, W., et al. Structurally and functionally optimized silk-fibroin-gelatin scaffold using 3D printing to repair cartilage injury in vitro and in vivo. Advanced Material. 29, 1701089(2017).
  20. Journeay, W. S., Suri, S. S., Moralez, J. G., Fenniri, H., Singh, B. Low inflammatory activation by self-assembling Rosette nanotubes in human Calu-3 pulmonary epithelial cells. Small. 4 (6), 817-823 (2008).
  21. Journeay, W. S., Suri, S. S., Moralez, J. G., Fenniri, H., Singh, B. Rosette nanotubes show low acute pulmonary toxicity in vivo. International Journal of Nanomedicine. 3 (3), 373-383 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Изготовление биомиметического нано-матрицы с нанотрубок Janus Base и фибронектина для агезии стволовых клеток
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.