Прогнозирование ампутации с использованием местных циркулирующих моноядерных клеток-предшественников в ангиопластике пациентов с критической ишемией конечностей

Summary

Ампутация нижних конечностей может произойти даже после ангиопластики затрудненных сосудов при критической ишемии конечностей (CLI). Моноядерные клетки-предшественники (MPCs) отражают сосудистый ремонт. В настоящем протоколе описывается количественная оценка МПЦ из циркуляции, близкой к ангиопластике, и его связь с эндотелиальной дисфункцией и прогнозированием ампутации нижних конечностей.

Abstract

Критическая ишемия конечностей (CLI) представляет собой передовую стадию периферического артериального заболевания. Ангиопластика улучшает приток крови к нижней конечности; однако, некоторые пациенты необратимо прогресс к ампутации конечностей. Степень повреждения сосудов и механизмы сосудистого ремонта являются факторами, влияющими на результат постангиопластики. Моноядерные клетки-предшественники (MPC) реагируют на повреждения и ремонт сосудов, с способностью отражать сосудистые заболевания. Настоящий протокол описывает количественную оценку МПЦ, полученных из кровообращения из сосуда вблизи места ангиопластики, а также его связь с эндотелиальной дисфункцией и его прогностический способность к ампутации конечностей в ближайшие 30 дней после ангиопластики у пациентов с CLI.

Introduction

Периферические артериальные заболевания (ПАД) характеризуются хронической и прогрессирующей сосудистой обструкцией с ограничением кровоснабжения^1. В глобальном масштабе, PAD нижних конечностей затрагивает около 10% пожилого населения, в то время как до 7% таких случаев представлены^{ампутации конечностей 2,3}.

Критическая ишемия конечностей (CLI) представляет собой наиболее серьезную презентацию PAD¹. Пациенты обычно испытывают боль в покое, язвы, или гангрена связано с окклюденых артерий; в то время как клинический прогноз неблагоприятны....

Protocol

Институциональный комитет по этике исследований из Национального центра "20 де Новиембре" ISSSTE одобрил этот перспективный протокол, все зачисленные пациенты предоставили письменное информированное согласие.

1. Оценка сосудистого блока нижних конечностей, взятия проб крови и ангиопластики воздушного шара

ПРИМЕЧАНИЕ: Образец исследования, используемый для этого эксперимента, состоял из 20 больных сахарным диабетом, в возрасте 68 лет и 10 из 20 были мужчинами. Половина выборки были курильщики и наиболее распространенными со-заболеваемости были типа 2 сахарный диабет, системная артериальная гипертензия и / или дислип....

Results

Образцы крови из заблокированных артерий, на сайте, адресованном для ангиопластики, были собраны из 20 больных сахарным диабетом, в возрасте 68 лет и 10 из 20 были мужчины. Половина выборочных групп населения были курильщиками. Сосудистые поражения были в основном забил, как Резерфорд класса VI; в то время как пациенты показали более высокую распространенность сахарного диабета 2 типа (100%), гипертонии (70%) дислипидемия (55%).

30 дней клинического последующего после нижней конечности ангиопл.......

Discussion

Сбор крови в точном месте сосудистого блока может показать технические трудности; Поэтому мы проводили сбор крови в непосредственной близости от сосудистого блока. Аналогичным образом, количество MPCs близко к сосудистой бляшки, как представляется, весьма динамичным и может возникнуть вариации до и после ангиопластики. Согласно нашим наблюдениям, рекомендуется оценить базовые и 30мин-постангиопластики изменения в количестве МПЦ, так как они могут отражать несколько патофизиологических процессов, происходящих в рамках пов.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BSA	Roche	10735086001	бычью сыворотку альбумин (BSA) в качестве буферного агента, стабилизатора, стандартного и для смешивания.
Калибровочные бусины	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-607	Калибровочные бусины MACQuant поставляются в водном растворе, содержащем 0,05% азида натрия. 3,5 мл для проведения до 100 тестов
CD133/1 (AC133)-PE	Milteny Biotec / MACS	#130-080-801	Антитело, конъюгированное с R-фикоэритрином в буфере PBS/EDTA
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770	Miltenyi Biotec / MACS#	130-103-798	Моноклональный, изотип рекомбинантный человеческий IgG1, конъюгированный
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-601	Антитело, конъюгированное с R-фикоэритрином в буфере PBS/EDTA
CD34-FITC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-081-001	Клон моноклонального антитела AC136 выделяет эпитоп класса III CD34
CD45- VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS#	130-092-880	Моноклональное антитело CD45, человеческие конъюгированные
конические пробирки	Thermo SCIENTIFIC	#339651	15 мл конические центрифужные пробирки
Цитометрические пробирки	FALCON Corning Brand	#352052	5 мл полистироловая трубка с круглым дном. 12x75 стиль. Стерильный.
EDTA	BIO-RAD	#161-0729	Тяжелые металлы, (как Pb) < 10 ppm, Fe< 0,01%, As< 1 ppm, нерастворимые< 0,005%
Улучшенный Neubauer	Без марки	Без каталожного номера	Гемоцитометр для подсчета клеток. (диапазон 0,1000 мм, 0,0025 мм2)
K2 EDTA Пробирки для сбора крови	BD Vacutainer	#367863	Сиреневая пластиковая пробирка для вакуума (K2E) 10,8 мг, 6 мл.
стволовых клеток	Lymphoprep	01-63-12-002-A	Стерильна и проверена на наличие эндотоксинов. Плотность: 1,077± 0,001 г/мл
Параформальдегид	SIGMA-ALDRICH		Фиксация биологических образцов, (порошок, 95%)
Пипетка Трансфер 1,3 мл	CRM Globe	PF1016, PF1015	Трансферная пипетка - это инструмент, который облегчает перенос жидкости с большей точностью.
Пробирки	KIMBLE CHASE	45060 13100	Термостойкие пробирки. РАЗМЕР/КОЛПАЧОК 13 x 100 мм