Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Конъюнктивальная комменсальная изоляция и идентификация у мышей

3.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/61672

⸱

1 мая 2021 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medicine, Division of Infectious Diseases, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 2Massachusetts Host-Microbiome Center, Department of Pathology, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 3Clinical Microbiology Laboratory, Department of Pathology, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School

В этой статье

Краткое содержание

Здесь представлен протокол выделения и амплификации аэробных и факультативных анаэробных конъюнктивальных комменсальных бактерий мышей с использованием уникального глазного мазка и этапа обогащения на основе культуры с последующей идентификацией микробиологическими методами и масс-спектрометрией MALDI-TOF.

Аннотация

Глазная поверхность когда-то считалась иммунной привилегированной и абиотической, но в последнее время кажется, что существует небольшое, но постоянное комменсальное присутствие. Идентификация и мониторинг видов бактерий в слизистой оболочке глаз были сложными из-за их низкой численности и ограниченной доступности соответствующей методологии для комменсального роста и идентификации. Существует два стандартных подхода: культуральные или методы секвенирования ДНК. Первый метод проблематичен из-за ограниченных восстанавливаемых бактерий, а второй подход идентифицирует как живые, так и мертвые бактерии, что приводит к аберрантному представлению глазного пространства. Мы разработали надежный и чувствительный метод бактериальной изоляции, основываясь на стандартных методах микробиологического культивирования. Это метод на основе тампонов, использующий «лабораторный» тонкий тампон, который нацелен на нижнюю конъюнктиву, за которым следует этап амплификации для аэробных и факультативных анаэробных родов. Этот протокол позволил нам выделить и идентифицировать виды конъюнктивы, такие как Corynebacterium spp., Coagulase Negative Staphylococcus spp., Streptococcus spp.и т. Д. Этот подход подходит для определения комменсального разнообразия у мышей в различных условиях заболевания.

Введение

Целью этого протокола является усиление специфического выделения жизнеспособных и редких аэробных и факультативных анаэробных микробов из глазной конъюнктивы для характеристики глазного микробиома. Обширные исследования профилировали комменсальные сообщества слизистой оболочки на коже, кишечнике, дыхательных и половых путях и показывают, что эти сообщества влияют на развитие иммунной системы и ответ1,2,3. Было показано, что глазные комменсальные сообщества изменяются во время некоторых патологий заболевания, таких как болезнь сухого глаза4,синдром Шегрена5 и диабет6. Тем не менее, способность определять типичную комменсальную общность глазной поверхности затруднена их относительно низким содержанием по сравнению с другими участками слизистойоболочки 6,7,8. Это вызывает споры о том, существует ли резидентный глазной микробиом и если он существует, отличается ли он от микробиома кожи и, следовательно, его местное влияние на развитие и реакцию врожденной иммунной системы. Этот протокол может помочь решить этот вопрос.

Как правило, подходы к определению окулярной комменсальной ниши основаны на методах секвенирования и культуры4,7,9. 16 Секвенирование S рДНК и анализ BRISK7 показывают более широкое разнообразие, чем методы, основанные на культурах, но не могут различать живые и мертвые микробы. Поскольку поверхность глаза враждебна многим микробам из-за антимикробных свойств слезной пленки4, генерирующих большой массив фрагментов ДНК, подходы, основанные на ДНК, будут обнаруживать эти артефакты, которые могут исказить данные в сторону идентификации мертвых бактерий как резидентных комменсалов, а не загрязняющих веществ. Это приводит к аберрантной комменсальной идентификации и характеристике глазного пространства как более высокого по численности и разнообразию микробов10. Это затрудняет определение резидентного глазного микробиома с помощью методов на основе ДНК. Принимая во внимание, что стандартные методы, основанные на культуре, не могут обнаружить комменсалы, потому что нагрузка слишком низкая11. Наш метод улучшает стандартную практику, используя тонкий тампон, который может нацеливаться на конъюнктиву, тем самым избегая загрязнения от соседней кожи, а также концепцию, что жизнеспособные организмы могут быть обогащены кратковременной культурой в питательных плотных средах с целью реанимации жизнеспособных, но не культивируемых, а также обогащения редкими жизнеспособными микробами.

Результаты, относительное обилие глазных комменсалов на глазной мазок, характеризуют конъюнктивный резидентный микробиом и важны для сравнительных целей. Наши данные показывают, что существует разница между микробиотой кожи и конъюнктивы, а также большее разнообразие с увеличением возраста и специфической для пола разницей в изобилии. Кроме того, этот подход воспроизводимо обнаружил комменсальные различия у нокаут-мышей12. Этот протокол может быть применен для описания глазного микробиома, который может варьироваться из-за практики клетки, географии или состояния заболевания, а также местных эффектов комменсальных метаболитов и продуктов на развитие и реакцию иммунной системы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры с участием мышей соответствуют руководящим принципам Институционального комитета по уходу за животными и их использованию. Следуйте лабораторным рекомендациям по безопасности (по указанию вашего институционального отдела гигиены и безопасности окружающей среды) при работе с микроорганизмами и потенциально загрязненными материалами. Использовать соответствующие сосуды для отходов и процедуры дезактивации до удаления потенциально биологически опасных загрязненных материалов.

1. Подготовка глазного тампона, настройка рабочего поля, мазок глаз мыши и обогащение образца

  1. Подготовьте стерильные глазные тампоны
    ПРИМЕЧАНИЕ: Стерильные глазные тампоны представляют собой тонко покрытые деревянные зубочистки с тонким волокнистым слоем хлопчатобумажной ватины и изготовленные в домашних условиях.
    1. Автоклав соответствующего количества хлопчатобумажных ватин и зубочисток для количества мышей, которые должны быть промапаны.
    2. Отщипьте кусок хлопчатобумажной ваты длиной в полсантиметра большим и указательным пальцами. Дразните ватин, потянув за края большими и указательными пальцами, чтобы сформировать плоский одиночный пористый слой, останавливаясь непосредственно перед тем, как ватин развалится (допускаются небольшие кусочки хлопка, рассеянные по всему растянутой ватине).
    3. Покрутите ватин вокруг одного из острых концов зубочистки, слегка удерживая растянутый кусок на кончике зубочистки, когда он скручен, см. Рисунок 1. «Завершенный» тампон для глаз будет иметь очень тонкий слой хлопка, натянутый на кончик, простирающийся примерно на половину до одного сантиметра от кончика.
    4. Вставьте «готовые» тампоны в маленький яблочник, смаковейте его стороной вниз и накройте крышкой. автоклав.
  2. Настройка рабочей области
    1. Готовят анестезию, содержащую 2 мл кетамина (100 мг/мл), 400 мкл ксилазина (100 мг/мл) и 27,6 мл стерильного физиологического раствора (0,9% NaCl в dH2O) в стерильной 50 мл стерильной центрифужной трубке. Фильтр стерилизуют и аликвотную анестезию для немедленного применения (могут храниться при 4 °C в течение 1 месяца; всегда позволяют уравновесить до комнатной температуры перед использованием).
    2. Очистите и очистите рабочую зону дезинфицирующим средством, чтобы свести к минимуму загрязнение.
    3. Aliquot 0,5 мл стерильной мозговой инфузионной среды сердца (BHI) в меченые 1,5 мл стерильных микроцентрифужных пробирок (1 трубка на мышь и контроль); устроить в стойку микроцентрифуги. Установите стойку на лед.
    4. Настройка рабочего потока следующим образом (слева направо): станция анестезии мыши (клетка, содержащая экспериментальных мышей, пустая стерильная клетка, анестезия комнатной температуры, игла 25 Г и шприц 1 мл), станция для мазка глаз (аликвотированный BHI на льду, стерилизованные глазные тампоны, чистые бумажные полотенца, 70% изопропаноловый спрей) и станция покрытия (пластины для агара крови комнатной температуры, пипетка 10 мкл , 10 мкл стерильных одноразовых наконечников, контейнер для отходов биологической безопасности).
  3. Мазок глаз
    1. Вводят 10 мкл анестезии на 1 г мышиной массы дозы кетамина и ксилазина соответственно внутрибрюшинно каждой взрослой мыши и помещают в автоклавную клетку. Испытать анестезию путем сдавливания подушечки задней ноги; ни одно движение не указывает на надлежащую анестезию.
    2. Назначьте одну руку, чтобы обрабатывать только анестезированных мышей, а другую руку, чтобы обрабатывать только мазок из глаз и культуру. Для мазка извлеките из клетки полностью обезболенную мышь; поместить поверх чистой рабочей поверхности, расположенной на боку с открытым левым глазом. Распылите на руки в перчатках изопропанол, сухая чистым бумажным полотенцем.
    3. Специально маркированная трубка для микроцентрифуги BHI с специальной рукой для обработки среды. Поместите трубку обратно в стойку микроцентрифуги на льду.  Окуните покрытый ватой кончик глазного тампона в BHI, выньте глазной тампон из трубки, вращая наконечник 2 раза о внутреннюю трубку, чтобы удалить лишнюю жидкость.
    4. Рукой мыши осторожно держите мышь за шею. Другой рукой поместите кончик глазного тампона против медиал-конъюнктивальной области левого глаза, см. Рисунок 2А. Слегка прижмите глазное яблоко и переместите тампон в движении мытья окна(рисунок 2B)вперед и назад, между нижним веком и глазом, 10 раз. Поддерживайте постоянное давление.
    5. Не касаясь меха, аккуратно извлеките кончик тампона, перпендикулярно тому месту, куда он был вставлен, и поместите тампон ватной стороной вниз непосредственно в меченую микроцентрифужную трубку, содержащую жижи BHI. Нанесите смазывающую глазную каплю на смазанный глаз.
    6. Верните мышь в клетку.
    7. Дайте тампону постоять в течение 10-15 минут на льду и удалите глазной тампон стерилизованной рукой в перчатке, перемешав наконечник в среде в течение 10 оборотов. Выньте тампон закручивающимся наконечником о внутреннюю стенку трубки микроцентрифуги на 5 оборотов. Утилизируйте тампон в контейнере для биологической области.
    8. Повторите шаги 1.3.2-1.3.7 для каждой мыши и для контрольных образцов (мазок из кожи или меха). Стерилизуйте перчатки соответствующим образом между каждым тампоном.
  4. обогащение
    1. Обогащайте образец путем статической инкубации трубки в течение 1 ч при 37 °C
    2. Во время инкубации маркируют одну триптиказу сои комнатной температуры 5% агаром овечьей крови (пластина TSA) на мышь и делят пополам.
    3. После инкубации посева мазка глаз вынимают обогащенные образцы из инкубатора и помещают на лед.
    4. Кратко вихревые образцы смешать и нанести по схеме на рисунке 3А. Аликвота 10 мкл образца на пластину TSA и наклон пластины для формирования полосы, повторите 2 раза.
    5. С другой стороны разделительной линии пластины, уставьте точку 10 мкл образца на агаров, повторите 9 раз.
    6. Инкубировать пластины при 37 °C в течение 18 ч, 2 дней и 4 дней (в чистой камере, которая предотвращает высыхание агаровых пластин). Подсчитайте колонии в полосках, обратите внимание на морфологию и рассчитайте колониеобразующие единицы (КОЕ) на мазок для морфологически сходных изолятов. Посмотрите на точки для уникальных организмов, не захваченных в полосках.

2. Главная пластина, характеристика и идентификация глазных микробов

  1. Мастер-пластина
    1. Нарисуйте сетки на обратной стороне пластины TSA(рисунок 3B). Выберите колонию со стерильной зубочисткой из каждой пластины для тампона глаз мыши и проведите квадрат (сетки) мастер-пластины, сетку меток с номером колонии и информацию о мыши. Выберите и размахйте три разные колонии для каждой морфологически отличной колонии.
    2. Инкубировать пластину в течение ночи при 37 °C. Продолжайте инкубацию в течение 96 часов, ежедневно проверяя появление новых изолятов.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Комменсальная популяция будет варьироваться в зависимости от возраста мыши, питания, состояния болезни и практики ведения в цех. Характеристика изолята основана на преобладающих аэробных и факультативных анаэробных бактериях, обнаруженных в нашей лаборатории.
  2. характеристика
    1. Дубликаты13 пластинчатых микробов на пластинах Маннитол Соляной Агар (MSA) и МакКонки (MAC), инкубируются в течение ночи при 37 °C. Обратите внимание на рост для каждого изолята и наличие восковых колоний или желтых колоний с ореолом на MSA.
    2. Для грамположительных кокков тест с каталазойтест 13,14. Поместите каплю 3% перекиси водорода на чистую стеклянную горку. Используя стерильную зубочистку, выхватывайте соответствующий микроб из глазной тампоновой пластины. Отсутствие образования пузырьков указывает на Streptococcus spp.,незначительное образование пузырьков указывает на Corynebacterium spp. и, возможно, Aerococcus spp., а быстрое образование пузырьков указывает на Staphylococcus spp.
  3. Идентификация: анализ MALDI-TOF MS
    ПРИМЕЧАНИЕ: Бактериальная идентификация осуществляется с использованием MALDI-TOF и базы данных программного обеспечения. Эта система использует матричную лазерную десорбционную ионизацию масс-спектрометрии времени полета (MALDI-TOF MS) для разработки профилей спектров, которые сравниваются с известными бактериальными спектрами для идентификации. E.coli,ATCC 8739, используется для калибровки системы.
    1. Пластинчатые бактериальные изоляты на пластинах TSA, содержащих 5% овечьей крови, и инкубируют в течение ночи с 5% углекислым газом при 37 °C.
    2. Используя петлю 1 мкл, нанесите тонкий слой чистых бактерий на целевой слайд MALDI-TOF; 1 мкл матричного раствора MALDI-TOF MS CHCA (альфа-циано-4-гидроксициновая кислота) накладывают и дают полностью высохнуть на воздухе перед загрузкой слайда в прибор MALDI-TOF.
    3. Каждый изолят замечен в двух экземплярах.
    4. Отчеты, содержащие оценки вероятности более 80%, которые указывают на высокое значение дискриминации, принимаются как надежные результаты, а бактериальная идентификация принимается.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Репрезентативные результаты для глазной тампоновой пластины, демонстрирующие различные методы нанесения покрытия, изображены на рисунке 3A, показывающем морфологически разнообразные изоляты от мыши C57BL/6. Для каждого отдельного изолята колонии были подсчитаны в полосе и относительное изобилие, уникальные колониеобразующие единицы (КОЕ) на глазной мазок, рассчитаны и построены для целей сравнения. Для микробиологической характеристики бактерии были отобраны из отдельных пластин для мазков г...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Из-за пауцибактериального состояния глазной поверхности многие лаборатории испытывали трудности с выделением глазных комменсалов7,20,что приводило к низкому количеству образцов с ростом, низкой численностью и низким разнообразием8. Этот метод значительно улучшает стандартную культурную практику4,21 путем добавления этапа обогащения, а также переработанного мазка для глаз и идентифи...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Отсутствие конфликта интересов для раскрытия.

Благодарности

Финансирование от P30 DK034854 поддержало VY, LB и исследования в Массачусетском центре микробиома хозяина, а финансирование от NIH / NEI R01 EY022054 поддержало MG.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
от 0,1 до 10 & микро; l наконечник для дозатораСША Scientific1110-300автоклав перед использованием
от 0,5 до 10 &; l Eppendorf pipetFisher Scientific13-690-026
1 мл шприцFisher ScientificBD3096231 шприц на каждый глазный тампон группы
1,5 мл Eppendorf tubesСША Scientific1615-5500автоклав перед использованием
1000 & мл наконечник для пипеткиСША Scientific1111-2021автоклав перед использованием
от 200 до 1000 мкр; l Gilson pipetman (P1000)Fisher ScientificF123602G
25 г иглаFisher Scientific14-826AA1 игла на глаз тампон группы
3% Перекись водородаFisherScientific S25359
37 ° C ИнкубаторЛабораторное оборудование
70 % изопропанолFisher ScientificPX1840-4
Ana-Sed Injection (Ксилазин 100 мг/мл)Santa Cruz Animal HealthSC-362949Rx
BD BBL Набор для окрашивания ГрамаFisher ScientificB12539
Bunsen BurnerЛабораторное оборудование
Чистые бумажные полотенцаЛаборатория оборудование
Ватин Стерильный рулонный хлопокCVS
Одноразовый 1 мл ПипецFisher Scientific13-711-9AMдля тестов на окрашивание и каталазу по Граму
E.coliATTCATCC 8739
Предметные стеклаFisher Scientific12-550-A3для тестов на окрашивание и каталазу по Граму
Кетамин ( 100 мг/мл)Henry Schein9950001
Mac Conkey Agar PlatesFisher Scientific4321270хранить в 4 ° C до готовности к использованию
Mannitol Salt AgarCarolina Biological Supply784641Подготовьте тарелки в соответствии с инструкциями mfr, храните при температуре 4 °°; C на 1 неделю
мышиJackson LabsC57/BL6J
ЧашкиПетри Fisher Scientific08-757-12для Mannitol Salt агаровые пластины
RPI Brain Heart Infusion MediaFisher Scientific50-488525приготовить в соответствии с инструкциями и автоклав
SteriFlip (0.22 µ m размер пор полиэфирсульфон)EMD/Millipore, Fisher ScientifcSCGP00525для стерилизации анестезии
Стерильная центрифуга Corning TubeFisher Scientific430829препарат для анестезии
Стерильная клетка для мышейЛабораторное оборудование
Зубочистки (круглый бамбук)Kitchen Essentialsавтоклав перед использованием и приготовлением
мазкаТриптиказ соевый агар II с 5% пластинами овечьей кровиFisher Scientific4321261хранить в 4 ° C до готовности к использованию
Vitek Target slideBioMerieux Inc. Дарем, Северная Каролина
Vitek-MSBioMerieux Inc. Дарем, Северная Каролина
Vitek-MS CHCA матричный растворBioMerieux Inc. Дарем, Северная Каролина411071
Одноразовые глазные каплиCVS PharmacyBausch and Lomb Soothe Lubricant Eye Drops, 28 флаконов, 0,02 жидких унций каждый

Ссылки

  1. Arpaia, N., et al. Metabolites produced by commensal bacteria promote peripheral regulatory T cell generation. Nature. 504 (7480), 451-455 (2013).
  2. Hooper, L. V., Littman, D. R., Macpherson, A. J. Interactions between the microbiota and the immune system. Science. 336 (6086), 1268-1273 (2010).
  3. Nagpal, R., et al. Human-origin probiotic cocktail increases short chain fatty acid production via modulation of mice and human gut microbiome. Scientific Reports. 8 (1), 12649(2018).
  4. Graham, J. E., et al. Ocular pathogen or commensal: a PCR based study of surface bacterial flora in normal and dry eyes. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (12), 5616-5623 (2007).
  5. Wang, C., et al. Sjögren-Like Lacrimal Keratoconjunctivitis in Germ-Free Mice. International Journal of Molecular Sciences. 19 (2), 565-584 (2018).
  6. Ham, B., Hwang, H. B., Jung, S. H., Chang, S., Kang, K. D., Kwon, M. J. Distribution and diversity of ocular microbial communities in diabetic patients compared with healthy subjects. Current Eye Research. 43 (3), 314-324 (2018).
  7. Doan, T., et al. Paucibacterial microbiome and resident DNA virome of the healthy conjunctiva. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (13), 5116-5126 (2016).
  8. Kugadas, A., Gadjeva, M. Impact of microbiome on ocular health. Ocular Surface. 14 (3), 342-349 (2016).
  9. Dong, Q., et al. Diversity of bacteria at healthy human conjunctiva. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 53 (8), 5408-5413 (2011).
  10. Zegans, M. E., Van Gelder, R. N. Considerations in understanding the ocular surface microbiome. American Journal of Opthalmology. 158 (3), 420-422 (2014).
  11. Fleiszig, S. M., Efron, N. Microbial flora in eyes of current and former contact lens wearers. Journal of Clinical Microbiology. 30 (5), 1156-1161 (1992).
  12. Lu, X., et al. Neutrophil L-Plastin Controls Ocular Paucibacteriality and Susceptibility to Keratitis. Frontiers in Immunology. 11, 547(2020).
  13. Johnson, T. R., Case, C. L. Laboratory Experiments in Microbiology. , Pearson Benjamin Cummings Pubs. San Francisco, CA. (2010).
  14. Reiner, K. Catalase Test Protocol. American Society for Microbiology. , (2010).
  15. UK SMI. Standards for Microbiology Investigation. UK SMI. , Gov.UK. (2014).
  16. Sharp, S. E., Searcy, C. Comparison of mannitol salt agar and blood agar plates for identification and susceptibility testing of Staphylococcus aureus in specimens from cystic fibrosis patients. Journal of Clinical Microbiology. 44 (12), 4545-4546 (2006).
  17. Siegman-Igra, Y., Azmon, Y., Schwartz, D. Milleri group streptococcus--a stepchild in the viridans family. European Journal of Clinical Microbiology and Infectious Diseases. 31 (9), 2453-2459 (2012).
  18. Mohan, B., Zaman, K., Anand, N., Taneja, N. Aerococcus Viridans: A Rare Pathogen Causing Urinary Tract Infection. Journal of Clinical and Diagnostic Research. 11 (1), 1-3 (2017).
  19. Senneby, E., Nilson, B., Petersson, A. C., Rasmussen, M. Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry is a sensitive and specific method for identification of aerococci. Journal of Clinical Microbiology. 51 (4), 1303-1304 (2013).
  20. Wan, S. J., et al. IL-1R and MyD88 contribute to the absence of a bacterial microbiome on the healthy murine cornea. Frontiers in Microbiology. 9, 1117(2018).
  21. Ozkan, J., et al. Temporal Stability and Composition of the Ocular Surface Microbiome. Scientific Reports. 7 (1), 9880(2017).
  22. Oliver, J. M. The viable but non-culturable state in bacteria. Journal of Microbiology. 43 (1), 93-100 (2005).
  23. Epstein, S. S. The phenomenon of microbial uncultivability. Current Opinion in Microbiology. 16 (5), 636-642 (2013).
  24. Whelan, F. J., et al. Culture-enriched metagenomic sequencing enables in-depth profiling of the cystic fibrosis lung microbiota. Nature Microbiology. 5 (2), 379-390 (2020).
  25. Raymond, F., et al. Culture-enriched human gut microbiomes reveal core and accessory resistance genes. Microbiome. 7, 56(2019).
  26. Peto, L., et al. Selective culture enrichment and sequencing of feces to enhance detection of antimicrobial resistance genes in third-generation cephalosporin resistant Enterobacteriaceae. PLoS One. 14 (11), 0222831(2019).
  27. Lauer, B. A., Masters, H. B. Toxic effect of calcium alginate swabs on Neisseria gonorrhoeae. Journal of Clinical Microbiology. 26 (1), 54-56 (1988).
  28. Dubois, D., et al. Performances of the Vitek MS matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry system for rapid identification of bacteria in routine clinical microbiology. Journal of Clinical Microbiology. 50 (8), 2568-2576 (2012).
  29. Kawakita, T., et al. double-blind study of the safety and Efficacy of 1%D-3-Hydroxybutyrate eye drops for Dry Eye Disease. Scientific Reports. 6, 20855(2016).
  30. Lee, H. S., Hattori, T., Stevenson, W., Cahuhan, S. K., Dana, R. Expression of toll-like receptor 4 contributes to corneal inflammation in experimental dry eye disease. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 53 (9), 5632-5640 (2012).
  31. Simmons, K. T., Xiao, Y., Pflugfelder, S. C., de Paiva, C. S. Inflammatory response to lipopolysaccharide on the ocular surface in a murine dry eye model. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (6), 2444-2450 (2016).
  32. Miller, D., Ioviano, A. The role of microbial flora on the ocular surface. Current Opinion in Allergy and Immunology. 9 (5), 466-470 (2009).
  33. Nayyar, A., Gindina, S., Barron, A., Hu, Y., Danias, J. Do epigenetic changes caused by commensal microbiota contribute to development of ocular disease? A review of evidence. Human Genomics. 14 (1), 11(2020).
  34. Stevenson, W., et al. Dry eye disease: an immune-mediated ocular surface disorder. Archives of Ophthalmology. 130 (1), 90-100 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Анализ микробиома глазаметод бактериального мазкааэробное обогащение бактерийидентификация методом MALDI-TOF MSколониеобразующие единицыпротокол взятия мазка с поверхности глазаповерхность глаза мышиобнаружение жизнеспособных микроорганизмовизоляция бактерий конъюнктивы
Конъюнктивальная комменсальная изоляция и идентификация у мышей
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.