Визуализация кальцитонина Гена связанных пептид иммунореактивной иннервации Крыса Краниал Дура Матер с иммунофторесценции и нейронной трассировки

Jia Wang; Dongsheng Xu; Jingjing Cui; Chen She; Hui Wang; Shuang Wu; Ling Zou; Jianliang Zhang; Wanzhu Bai

doi:10.3791/61742

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Визуализация кальцитонина Гена связанных пептид иммунореактивной иннервации Крыса Краниал Дура Матер с иммунофторесценции и нейронной трассировки

3.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/61742

⸱

6 января 2021 г.

Jia Wang^*¹ , Dongsheng Xu^*¹ , Jingjing Cui¹ , Chen She¹ , Hui Wang¹ , Shuang Wu¹ , Ling Zou¹ , Jianliang Zhang¹ , Wanzhu Bai¹

¹Institute of Acupuncture and Moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол для визуализации пространственной корреляции кальцитонина гена связанных пептид (CGRP)-иммунореактивных нервных волокон и кровеносных сосудов в черепно-мозговой матер с использованием иммунофторесценции и флуоресцентной гистохимии с CGRP и фаллоидин, соответственно. Кроме того, происхождение этих нервных волокон было ретроградным, прослеживаемым с помощью флуоресцентного нервного трассировщика.

Аннотация

Целью данного исследования было изучение распределения и происхождения пептида, связанного с геном кальцитонина (CGRP)-иммунореактивных сенсорных нервных волокон черепной мозговой оболочки с использованием иммунофторесценции, трехмерной (3D) реконструкции и ретроградной техники отслеживания. Здесь нервные волокна и кровеносные сосуды были окрашены с помощью иммунофлуоресценции и гистохимии методы с CGRP и флуоресцентный фаллоидин, соответственно. Пространственная корреляция дюральных CGRP-иммуореактивных нервных волокон и кровеносных сосудов была продемонстрирована 3D-реконструкцией. Между тем, происхождение CGRP-иммунореактивных нервных волокон были обнаружены нервной техники отслеживания с фторгольдом (FG) из области вокруг средней менингеальной артерии (MMA) в черепной dura mater к тригеминальной ганглиона (TG) и шейки матки (C) спинного корня ганглиев (DRGs). Кроме того, были также изучены химические характеристики нейронов, помеченных FG в TG и DRG, а также CGRP с использованием двойных иммунофлюоресценций. Воспользовавшись прозрачным образцом цельного монтажа и 3D-реконструкцией, было показано, что CGRP-иммунореактивные нервные волокна и артериолы с маркировкой фаллоидин работают вместе или отдельно образуют дурную нейрососудикулярную сеть в 3D-виде, в то время как FG-помеченные нейроны были найдены в офтальмологических, челюстно-челюстных и мандибулярной ветвях TG, а также C2-3 DRGs ipsilateral в сторону применения трассировщика, в котором некоторые из FG-помеченных нейронов, представленных с CGRP-иммунореактивным выражением. С помощью этих подходов мы продемонстрировали распределительные характеристики CGRP-иммунореактивных нервных волокон вокруг кровеносных сосудов в черепной матер-дуре, а также происхождение этих нервных волокон из ТГ и ДРГ. С точки зрения методологии, это может стать ценным справочником для понимания сложной нервно-мышечной структуры мозговой мозговой оболочки при физиологическом или патологическом состоянии.

Введение

Черепная dura mater является внешним слоем опоясывания для защиты мозга и содержит обильные кровеносные сосуды и различные виды^{нервных волокон 1,}². Многие исследования показали, что сенсибилизированные черепные dura mater может быть ключевым фактором, ведущим к возникновению головных болей, с участием ненормальной вазодилатации и иннервации^3,⁴^,⁵. Таким образом, знание нервно-мышечной структуры в черепной dura mater имеет важное значение для понимания патогенеза головных болей, особенно при мигрени.