Method Article

Микродиссекция мозга мыши на функционально и анатомически различные области

DOI:

10.3791/61941

⸱

February 15th, 2021

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Geneva Foundation, Medical Readiness Systems Biology, Walter Reed Army Institute of Research, 2Walter Reed Army Institute of Research, Medical Readiness Systems Biology, Center for Military Psychiatry and Neuroscience, 3ORISE Fellow, Medical Readiness Systems Biology, Walter Reed Army Institute of Research, 4Headquarter, Walter Reed Army Institute of Research

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы представляем практический, пошаговый, быстрый протокол для удаления мозга мыши и рассечения дискретных областей из свежей мозговой ткани. Получение областей мозга для молекулярного анализа стало рутиной во многих лабораториях нейробиологии. Эти области мозга немедленно замораживаются для получения высококачественных транскриптомных данных для анализа на системном уровне.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мозг является командным центром нервной системы млекопитающих и органом с огромной структурной сложностью. Защищенный внутри черепа, мозг состоит из внешнего покрытия серого вещества над полушариями, известного как кора головного мозга. Под этим слоем находятся многие другие специализированные структуры, которые необходимы для множественных явлений, важных для существования. Получение образцов конкретных грубых областей мозга требует быстрых и точных этапов рассечения. Понятно, что на микроскопическом уровне существует много субрегионов и, вероятно, пересекают произвольные региональные границы, которые мы налагаем с целью этого вскрытия.

Мышиные модели обычно используются для изучения функций и заболеваний человеческого мозга. Изменения в паттернах экспрессии генов могут быть ограничены конкретными областями мозга, нацеленными на определенный фенотип в зависимости от болезненного состояния. Таким образом, большое значение имеет изучение регуляции транскрипции в отношении ее четко определенной структурной организации. Полное понимание мозга требует изучения различных областей мозга, определения связей и выявления ключевых различий в деятельности каждой из этих областей мозга. Более полное понимание каждой из этих отдельных областей может проложить путь для новых и улучшенных методов лечения в области неврологии. Здесь мы обсуждаем пошаговую методологию рассечения мозга мыши на шестнадцать различных областей. В этой процедуре мы сосредоточились на удалении и рассечении мозга самцов мышей C57Bl / 6J (6-8 недель) на несколько областей с использованием нейроанатомических ориентиров для выявления и выборки дискретных функционально значимых и поведенчески значимых областей мозга. Эта работа поможет заложить прочный фундамент в области нейробиологии, что приведет к более целенаправленным подходам в более глубоком понимании функции мозга.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Головной мозг, наряду со спинным мозгом и сетчаткой, составляет центральную нервную систему, которая выполняет сложное поведение, контролируемое специализированными, точно расположенными и взаимодействующими типами клеток по всему телу1. Мозг представляет собой сложный орган с миллиардами взаимосвязанных нейронов и глии с точной схемой, выполняющей многочисленные функции. Это двусторонняя структура с двумя различными долями и разнообразными клеточными компонентами2. Спинной мозг соединяет головной мозг с внешним миром и защищен костью, мозговыми оболочками и спинномозговой жидкостью и направляет сообщения в мозг и из нег....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Обработка животных и экспериментальные процедуры проводились в соответствии с европейскими, национальными и институциональными руководящими принципами по уходу за животными. Все эксперименты на животных были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) в Центре исследований в области гигиены окружающей среды армии США, который в настоящее время является Институтом исследований армии Уолтера Рида (WRAIR) и выполнены в учреждении, аккредитованном Ассоциацией по оценке и аккредитации Международной организации по уходу за лабораторными животными (AAALAC).
ПРИМЕЧАНИЕ: Процедура будет проводиться на шести-восьминедельных самцах мы....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Наше понимание сложной структуры и функции мозга быстро развивается и улучшается. Мозг содержит несколько различных областей, и построение молекулярной карты может помочь нам лучше понять, как работает мозг. В этой статье мы обсудили рассечение мозга мыши на несколько различных областей (таблица 1). В этом протоколе структуры идентифицируются на основе критических ориентиров и достигаются путем поддержания ткани влажной с физиологическим раствором, сохраняя ее прочность для немедленного рассечения. Метод.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мозг млекопитающих представляет собой сложный орган, состоящий из массива морфологически различных и функционально уникальных клеток с разнообразными молекулярными сигнатурами и несколькими областями, которые выполняют специализированные и дискретные функции. Процедура вскрытия, описанная здесь, может иметь несколько целей в зависимости от требований лаборатории. В нашей лаборатории мы оценили транскрипцию в нескольких областях мозга, собранных у мышей, подвергшихся воздействию ПТСР, как стресс16 .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим г-жу Сешмалини Сринивасан, г-на Стивена Батлера и г-жу Памелу Спеллман за экспериментальную помощь и г-жу Дану Юсеф за редактирование рукописи. Финансовая поддержка со стороны USAMRDC благодарна. Женевский фонд внес свой вклад в эту работу и был поддержан средствами Из Управления исследований военной и оперативной медицины III через Исследовательское управление армии США.

Отказ:

Материал был рассмотрен Институтом исследований армии Уолтера Рида. Нет никаких возражений против его представления и/или публикации. Мнения или утверждения, содержащиеся в настоящем документе, являются част....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Brain Removal
Deaver ножницыRoboz Surgical StoreRS-67625,5" прямые острые/острые
ножницы DeaverRoboz Surgical StoreRS-67635,5" изогнутые острые/острые
Деликатные операционные ножницыRoboz Surgical StoreRS-67034,75" изогнутые острые/острые
Деликатные операционные ножницыRoboz Surgical StoreRS-67024,75" прямой острый/острый
Легкие операционные ножницыRoboz Surgical StoreRS-67535" изогнутый Острый/Острый
микрошпатель, радиус и конические плоские концыотделка из нержавеющей стали
Операционные ножницы 6,5"Roboz Surgical StoreRS-6846изогнутый острый/острый
Тканевые щипцыRoboz Surgical StoreRS-81604,5" 1X2 зуба 2мм ширина наконечника
Rongeur (опционально)Roboz Surgical StoreRS-8321 много стилей для выбораLempert Rongeur 6,5" 2X8 мм
<сильный>гипофиз Диссекция
Ручка для скальпеляRoboz Surgical StoreRS-9843Ручка для скальпеля #3 Твердая 4"
и лезвияRoboz Surgical StoreRS-9801-11Стерильные лезвия для скальпеля:#11 Коробка 100 40 мм
Супертонкие щипцы InoxRoboz Surgical StoreRS-4955размер наконечника 0,025 X 0,005 мм
<сильный>Рассечение мозга
А увеличение визораPenn Tool Col40-178-62,2x Внешнее и 3,3-кратное внутреннее увеличение линзы, Прямоугольная лупа
для рассечения холодной пластиныCellpath.comJRI-0100-00AIceberg холодная пластина и основание
Graefe щипцы, полный изгиб экстра деликатныйRoboz Surgical StoreRS-51380,5 мм Наконечник 4" (10 см)
длинные легкие операционные ножницыRoboz Surgical StoreRS-67535" изогнутая острая/острая
ручка скальпеляRoboz Surgical StoreRS-9843 (повторено выше)Ручка скальпеля #3 твердая 4"
и лезвия (особенно #11)Роботизированный хирургический магазин RobozRS-9801-11 (повторено выше)Стерильные лезвия скальпеля: #11 Коробка 100 40 мм
Шпатель AmazonMS-SQRD9-4Двусторонний шпатель с квадратным и круглым концом
тканевых щипцовRoboz Surgical StoreRS-8160 (повторено выше)4,5 дюйма 1X2 зуба
зеркальная

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zeisel, A., et al. Molecular Architecture of the Mouse Nervous System. Cell. 174 (4), 999-1014 (2018).
  2. Ackerman, S. Major Structures and Functions of the Brain. 2, National Academies Press. US. (1992).
  3. P, T. L. S.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mouse Brain DissectionBrain Region IsolationNeuroanatomical LandmarksCerebral Cortex RemovalCerebellum DissectionHypothalamus SeparationThalamus IsolationAmygdala ExtractionHippocampus DissectionSeptal Nuclei Identification

Related Articles