Отбор проб и обработка носовых зубов с помощью цифровой высокоскоростной цилиарной видеомикроскопии – адаптация к пандемии COVID-19

Noemie Bricmont; Lionel Benchimol; Anne-Lise Poirrier; Christine Grignet; Claire Seaton; Mark A. Chilvers; Marie-Christine Seghaye; Renaud Louis; Philippe Lefebvre; Celine Kempeneers

doi:10.3791/61949

Method Article

Отбор проб и обработка носовых зубов с помощью цифровой высокоскоростной цилиарной видеомикроскопии – адаптация к пандемии COVID-19

DOI:

10.3791/61949

⸱

November 7th, 2020

Noemie Bricmont¹ , Lionel Benchimol² , Anne-Lise Poirrier² , Christine Grignet³ , Claire Seaton⁴ , Mark A. Chilvers⁴ , Marie-Christine Seghaye⁵ , Renaud Louis¹^,⁶ , Philippe Lefebvre² , Celine Kempeneers¹^,⁷

¹Pneumology laboratory, I3 Group, GIGA Research Center, University of Liège, ²Department of ENT, University Hospital of Liège, ³Department for Occupational Safety and Health, Biosafety and Biosecurity Unit, University of Liège, ⁴Division of Respirology, Department of Pediatrics, University of British Columbia and British Columbia Children's Hospital, ⁵Division of Cardiology, Department of Pediatrics, University Hospital of Liège, ⁶Department of Pneumology, University Hospital of Liège, ⁷Division of Respirology, Department of Pediatrics, University Hospital of Liège

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Чтобы гарантировать успешный и высококачественный цилиарный функциональный анализ для диагностики ПМД, необходим точный и тщательный метод отбора проб и обработки респираторного эпителия. Для продолжения оказания услуг по диагностике ПМС во время пандемии COVID-19 протокол цилиарной видеомикроскопии был обновлен с учетом соответствующих мер инфекционного контроля.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Первичная цилиарная дискинезия (ПЦД) представляет собой генетическую подвижную цилиопатию, приводящую к значительному отозинолегочному заболеванию. Диагноз PCD часто пропускается или задерживается из-за проблем с различными методами диагностики. Цилиарная видеомикроскопия с использованием цифровой высокоскоростной видеомикроскопии (DHSV), одного из диагностических инструментов для ПМД, считается оптимальным методом для выполнения цилиарного функционального анализа (CFA), включающего анализ частоты цилиарных биений (CBF) и паттерна биения (CBP). Однако в DHSV отсутствует стандартизированная, опубликованная рабочая процедура обработки и анализа образцов. Он также использует живой респираторный эпителий, что является серьезной проблемой инфекционного контроля во время пандемии COVID-19. Для продолжения предоставления диагностических услуг во время этого кризиса в области здравоохранения протокол цилиарной видеомикроскопии был адаптирован для включения адекватных мер инфекционного контроля.

Здесь мы описываем пересмотренный протокол отбора проб и лабораторной обработки мерцательных респираторных образцов, в котором освещаются адаптации, внесенные в соответствии с мерами инфекционного контроля COVID-19. Описаны репрезентативные результаты CFA из образцов чистки носа, полученных от 16 здоровых испытуемых, обработанных и проанализированных в соответствии с этим протоколом. Мы также иллюстрируем важность получения и обработки эпителиальных реснитчатых полосок оптимального качества, поскольку образцы, не соответствующие критериям отбора качества, теперь допускают CFA, что потенциально снижает диагностическую надежность и эффективность этого метода.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Первичная цилиарная дискинезия (ПКД) представляет собой наследственную гетерогенную гетерогенную подвижную цилиопатию, при которой дыхательные реснички являются стационарными, медленными или дискинетическими, что приводит к нарушению мукоцилиарного клиренса и хроническому ото-сино-легочному заболеванию 1,2,3,4. Клиническими проявлениями ПМД являются хронический влажный кашель и хроническая заложенность носа, начинающаяся в раннем младенчестве, рецидивирующие или хронические инфекции верхних и нижних дыхательных путей, приводящие к бронхоэкта....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Одобрение было получено от комитета по этике больницы и факультета Льежа и Департамента гигиены и охраны здоровья на рабочем месте университета.

1. Забор проб дыхательного мерцательного эпителия

Перед отбором проб убедитесь, что субъекты не заражены инфекцией в течение как минимум 4-6 недель и не имеют назальных и ингаляционных лекарств.
Приготовьте дополненный препарат M199: добавьте среду для культивирования клеток 199 (M199) (500 мл) раствором антибиотика (5 мл стрептомицина/пенициллина (50 мкг/мл)) и противогрибковым раствором (5 мл амфотерицина B (2,5 мкг/мл)).
Подготовьте 2 (по одной на каждую ноздрю) кон....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Чтобы проиллюстрировать эффективность методики, мы представляем результаты CFA в серии из 16 здоровых взрослых добровольцев (5 мужчин, возрастной диапазон 22-54 года).

Образцы для чистки носа от 14 (4 мужчин, возрастной диапазон 24-54 года) из общего числа 16 добровольцев обеспечили достаточно подходящих краев эпителия, которые удовлетворяли критериям отбора, необходимым для выполнения CFA. Из этих 14 образцов для чистки носа было зарегистрировано в общей сложности 242 реснитчатых края, а 212 .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот документ направлен на то, чтобы предоставить стандартную операционную процедуру для CFA с использованием образцов для чистки носа с поправками, внесенными с учетом соответствующих соображений инфекционного контроля во время пандемии COVID-19. Диагностика ПМД является сложной задачей и в настоящее время требует проведения ряда различных диагностических тестов в соответствии с международными рекомендациями, включая измерение оксида азота в носу, CFA с использованием DHSV, ультраструктурный анализ цилиарий с использова.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этим авторам раскрывать нечего.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы хотели бы поблагодарить Жана-Франсуа Папона, Бруно Луи, Эстель Эскудье и всех членов команды диагностического центра PCD в Париже за их доступность и сердечный прием во время посещения их диагностического центра PCD, а также за многочисленные обмены мнениями. Мы также благодарим Роберта Херста и всех членов команды центра PCD в Лестере за их прием и время, советы и опыт.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
15 мл конические тубы	FisherScientific	352096	15 мл Высокопрозрачный полипропилен Коническая трубка с крышкой
Амфотерицин B	LONZA	17-836E	Противогрибковый раствор
Блейксли-вейл носовые щипцы	NOVO SURGICAL	E7739-12	Используется для удержания щетки для выполнения носовой чистки
Бронхиальная цитологическая щетка	CONMED	129	Используется для носовой чистка зубов
Ватный тампон	NUOVA APTACA	2150/SG	Используется для тестирования на COVID-19
Цифровая высокоскоростная видеомикроскопическая камера	IDTeu Инновации в движении	CrashCam Mini 1510
Предметный стекал	ThermoScientific	12372098	Предметные стекла микроскопа, используемые для создания камеры визуализации
Нагреваемый бокс	IBIDI в фокусе	10918	Используется для нагрева
образец Микроскоп с инвертированным светом	Zeiss	AXIO Vert.A1
Нагреватель линз	TOKAI HIT	TPiE-LH	Используется для нагрева масляной иммерсионной линзы
Medium 199 (M199), HEPES	TermoFisher Scientific	12340030	Cell Culture Medium
Motion Studio X64	IDT Motion	версия 2.14.01	Программное обеспечение
Oil	FischerScientific, Carl Zeiss
Прямоугольный покровный колпак	VWR	631-0145	Используется для покрытия камеры визуализации
Спейсер (Ispacer) 0,25 мм	Sunjinlab	IS203	Используется для создания герметичной закрытой камеры
визуализации Квадратный покровный колпак	VWR	631-0122	Используется для создания лабораторной открытой камеры визуализации
Стрептомицин/Пенициллин	FisherScientific, Gibco	11548876	раствор для антибиотиков

11825153

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chilvers, M. A., Rutman, A., O'Callaghan, C. Ciliary beat pattern is associated with specific ultrastructural defects in primary ciliary dyskinesia. Journal of Allergy Clinical Immunology. 112 (3), 518-524 (2003).
Werner, C., Onnebrink, J. G., Omran, H.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Отбор проб и обработка носовых зубов с помощью цифровой высокоскоростной цилиарной видеомикроскопии – адаптация к пандемии COVID-19

In This Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgements

Materials

References

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles