Методическая статья

Пошаговое руководство по электроантенографии комаров

DOI:

10.3791/62042

⸱

10 марта 2021 г.

1Department of Biochemistry; The Fralin Life Science Institute; The Global Change Center; Department of Entomology and the Center for Emerging Zoonotic and Arthropod-Borne Pathogens, Virginia Polytechnic Institute and State University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В настоящей статье подробно описан пошаговый протокол успешных и малошумных электроантэннограмм у нескольких родов комаров, включая как самок, так и самцов.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Самки комаров являются самыми смертоносными животными на земле, ежегодно унося жизни более 1 миллиона человек из-за патогенов, которые они передают при приобретении кровяной муки. Чтобы найти хозяина для питания, комары полагаются на широкий спектр сенсорных сигналов, включая визуальные, механические, тепловые и обонятельные. В исследовании подробно описывается метод, электроантеннография (EAG), который позволяет исследователям оценить, могут ли комары обнаруживать отдельные химические вещества и смеси химических веществ в зависимости от концентрации. В сочетании с газовой хроматографией (ГХ-ЭАГ) этот метод позволяет подвергать антенны воздействию полной смеси свободного пространства / сложного пространства и определяет, какие химические вещества, присутствующие в интересующем образце, комар может обнаружить. Это применимо к запахам тела хозяина, а также к цветочным букетам растений или другим экологически значимым запахам (например, одорантам для мест яйцекладки). Здесь мы описали протокол, который допускает длительные сроки реакции на приготовление и применим как к самкам, так и к самцам комаров из нескольких родов, включая комаров Aedes, Culex, Anopheles и Toxorhynchitis . Поскольку обоняние играет важную роль во взаимодействии комаров и хозяев и в биологии комаров в целом, ЕАГ и ГХ-ЕАГ могут выявлять соединения, представляющие интерес для разработки новых стратегий борьбы с переносчиками болезней (например, приманки). В дополнение к поведенческим анализам можно определить валентность (например, аттрактанта, репеллента) каждого химического вещества.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Комары являются самыми смертоносными организмами на Земле, унося жизни более миллиона человек в год и подвергая более половины населения мира риску воздействия патогенов, которые они передают, при укусах1. Эти насекомые полагаются на широкий спектр сигналов (т. е. тепловых, визуальных, механических, обонятельных, слуховых), чтобы найти хозяина, которым можно питаться (как растение, так и животное), для спаривания и яйцекладки, а также избегать хищников как на личиночной, так и на взрослой стадиях 2,3. Среди этих чувств обоняние играет решающую роль в вышеупомянутом поведении, в частности, для обнаружения молекул одоранта на среднем и большом расстоянии 2,3. Запахи, испускаемые хозяином или местом яйцекладки, обнаруживаются различными специфическими обонятельными рецепторами (например, GR, OR, IR), расположенными на хоботке, лапках и антеннах 2,3 щупика комара.

Поскольку обоняние является ключевым компонентом их поведения по поиску хозяина (растений и животных), спаривания и яйцекладки, он, таким образом, представляет собой идеальную цель для изучения с целью разработки новых инструментов для борьбы с комарами4. Исследования репеллентов (например, DEET, IR3535, пикаридин) и приманок (например, человеческая приманка BG Sentinel) чрезвычайно плодотворны5, но из-за текущих проблем в борьбе с комарами (например, устойчивость к инсектицидам, инвазивные виды) важно разработать новые эффективные методы борьбы, основанные на биологии комаров.

Многие методы (например, ольфактометр, анализы посадки, электрофизиология) использовались для оценки биологической активности соединений или смесей соединений у комаров. Среди них электроантеннография (или электроантеннограммы (EAG)) может быть использована для определения того, обнаруживаются ли одоранты усиками комаров. Этот метод был первоначально разработан Schneider6 и с тех пор использовался во многих различных родах насекомых, включая мотыльков 7,8,9, шмелей 10,11, медоносных пчел 12,13 и плодовых мушек14,15, и это лишь некоторые из них. Электроантеннография также использовалась с использованием различных протоколов, включая одну или несколько антенн у комаров 16,17,18,19,20,21,22,23,24,25.

Комары – относительно небольшие и нежные насекомые с довольно тонкими усиками. В то время как выполнение ЭАГ на более крупных насекомых, таких как мотыльки или шмели, относительно легко из-за их большего размера и более толстых усиков, проведение ЭАГ у комаров может быть сложной задачей. В частности, поддержание хорошего соотношения сигнал/шум и длительная оперативная подготовка являются двумя основными требованиями к воспроизводимости и надежности данных.

Предлагаемое здесь пошаговое руководство по малошумным EAG напрямую предлагает решения этих ограничений и делает этот протокол применимым к нескольким видам комаров из различных родов, включая Aedes, Anopheles, Culex и Toxorhynchites, и описывает технику как для самок, так и для самцов. Электроантеннография предлагает быстрый, но надежный способ скрининга и определения биологически активных соединений, которые затем могут быть использованы при разработке приманки после определения валентности с помощью поведенческих анализов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Приготовление солевого раствора

  1. Заранее подготовьте солевой раствор и храните в холодильнике.
  2. Следуйте за Beyenbach и Masia26 , чтобы приготовить раствор.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Рецепт физиологического раствора в мМ: 150,0 NaCl, 25,0 HEPES, 5,0 глюкозы, 3,4 KCl, 1,8 NaHCO3, 1,7 CaCl 2 и 1,0 MgCl2. рН доводят до 7,1 с 1 М NaOH. Не добавляйте глюкозу или сахарозу в препарат в это время, чтобы увеличить срок хранения. Добавьте необходимое количество в физиологический раствор непосредственно перед запуском ЭАГ (около 50 мл на эксперимент).

2. Приготовление и хранение запаха

  1. Заранее приготовьте смеси одорантов или разбавления отдельных соединений во флаконах янтарного цвета объемом 1,5 мл и храните при -20 ° C, чтобы предотвратить разложение соединения.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Концентрации будут зависеть от проводимого теста. 0,1% или 1% обычно используются для определения того, может ли соединение быть обнаружено или нет. Для кривой доза-реакция подготовьте последовательные разведения данного химического вещества и проверьте их от самых низких до самых высоких концентраций.
  2. Приготовьте разбавления в воде, этаноле, гексане, парафиновом масле или минеральном масле, в зависимости от растворимости тестируемого химического вещества.
  3. Обязательно подготовьте для эксперимента контрольный растворитель (флакон, содержащий только растворитель).
  4. Удалите одоранты из морозильной камеры за 30 минут до начала экспериментов, чтобы они оттаяли. Перемешайте каждый флакон перед использованием, чтобы хорошо перемешать химическое вещество и растворитель.
  5. Пипетка 10 мкл раствора на лист фильтровальной бумаги (0,5 см х 2 см), загруженный внутрь маркированного стеклянного шприца или пастеровской пипетки.
  6. Загрузите каждое соединение или смесь в специальную пипетку или шприц Пастера, чтобы предотвратить загрязнение.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Загрузите шприц за 10 минут до начала эксперимента, чтобы запах мог рассеяться в шприце, но не дольше, чтобы предотвратить деградацию. Пусть пипетка или шприц Пастера остаются закрытыми в это время, чтобы обеспечить хорошую диффузию химического вещества до начала эксперимента.
  7. После каждого прогона EAG утилизируйте кусок фильтровальной бумаги и замените его новым, чтобы бумага не переначивалась и не могла засорить иглу. Регулярно заменяйте иглы (каждые 10 заходов).

3. Отделение комаров

  1. Изолируйте комаров в день экспериментов.
  2. Используйте комаров, которым в день экспериментов не менее 6 дней, чтобы увеличить вероятность спаривания самок, чтобы усилить их реакцию на одоранты, связанные с хозяином.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Отрегулируйте возраст комаров во время теста в зависимости от проекта. Проверьте и согласуйте физиологический статус (например, на кровяном вскармливании, голодали, никогда ранее не кормили и т. д.).
  3. Морить комаров голодом до 12 часов (т.е. без доступа к сахару), чтобы повысить их мотивацию и чувствительность.
  4. Поместите контейнер с комарами в холодильник (4 ° C) до тех пор, пока они не перестанут летать, чтобы людей можно было легко аккуратно перенести в отдельные чашки с помощью щипцов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Виды с более высокой устойчивостью к холоду можно усыпить с помощью подушечки от мух CO2 . Следите за тем, чтобы комары не оставались на нем в течение длительного времени, чтобы предотвратить высыхание, которое снизит реакцию препарата EAG от комаров.
  5. Храните чашки с отдельными комарами при комнатной температуре до проведения EAG и выбросьте всех комаров, которые нельзя использовать в течение дня.

4. Электрододержатель и капиллярная подготовка

  1. Вытягивание, подготовка и хранение капилляров
    1. Используйте боросиликатные капилляры с нитями (внутренний диаметр: 0,78 мм, наружный диаметр: 1 мм). Потяните их в зависимости от снаряжения27.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Храните вытянутые капилляры в чашке Петри. Поместите чашку Петри на кусочки воска или пластилина без запаха, чтобы они не двигались и не ломались.
    2. Перед запуском эксперимента ЭАГ аккуратно разорвите кончик 2 капилляров парой щипцов под микроскопом.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что один из них немного больше другого, чтобы соответствовать либо шее (больший капилляр), либо кончикам усиков (меньший капилляр). Убедитесь, что разрез чистый, на стенке капилляра нет трещин. Это требует терпения и практики.
    3. Если они все еще не повреждены, повторно используйте эти капилляры после промывки деионизированной (DI) водой после завершения эксперимента. Удалите лишнюю воду, аккуратно приложив чистящую салфетку к наконечнику. Поместите обратно в хранилище чашку Петри. Если кончик искривлен, откажитесь от капилляра.
  2. Электрододержатель и капиллярный монтаж
    1. Пометьте два электрододержателя как «записывающий» и «эталонный», используя кусочки лабораторной ленты разных цветов. Это поможет установить голову комара и электроды.
    2. Убедитесь, что держатели электродов чисты внутри и на них нет боросиликатного мусора.
    3. Хлорирование: Замочите серебряные провода электрододержателей в чистом отбеливателе примерно на 5 минут. Провода превращаются из блестящих светло-серых в матовые темно-серые.
    4. Ослабьте резиновую пробку и заполните внутреннюю часть капилляра 10% физиологическим раствором с помощью иглы 20 г.
    5. Заполните боросиликатный капилляр физиологическим раствором с помощью шприца. Убедитесь, что ни в держателе электрода, ни в вытянутом капилляре нет пузырьков.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы уменьшить вероятность образования пузырьков в капилляре, продолжайте проталкивать физиологический раствор в капилляр, осторожно вытаскивая иглу, и используйте капилляры с нитью. Можно нагружать капилляры раствором, состоящим из электродного геля 1:3 и физиологического раствора. Это может помочь предотвратить испарение физиологического раствора и может быть особенно полезно при изучении и практике ЭАГ, так как экспериментатору потребуется больше времени для выполнения различных шагов.
    6. После замачивания промойте серебряные провода деионизированной водой и вставьте их в два капилляра. Следите за тем, чтобы наконечник проволоки находился на расстоянии менее 1 мм от кончика капилляра. Убедитесь, что капилляр проходит через резиновое кольцо внутри держателя электрода, не сломавшись. Аккуратно затяните резиновую пробку. Убедитесь, что пузырьки воздуха отсутствуют.
    7. Используйте капилляр с более широким отверстием на держателе электрода сравнения (шейка) и меньшим отверстием на держателе записывающего электрода (антенны).
    8. Оставьте два установленных держателя электродов на влажной чистящей салфетке, чтобы предотвратить высыхание наконечника до тех пор, пока он не будет готов к установке головки.

5. Подготовка буровой установки ЕАГ (рис. 1)

  1. Убедитесь, что воздушный стол поднят, что в авиакомпании нет засоров. Убедитесь, что бак с медицинским воздухом все еще полон, чтобы не менять его в середине эксперимента. Убедитесь, что в увлажнителе есть пузырьки.
  2. Система подачи воздуха и импульсов
    1. Включите бензобак медицинского воздуха.
    2. Проверьте уровень двух расходомеров.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Расходомер, контролирующий основной поток воздуха, омывающий препарат в течение всего эксперимента, должен быть на уровне 140 мл / мин, а другой, связанный с пульсом запаха, должен показывать 15 мл / мин.
  3. Если вы выполняете GC-EAD, включите машину, бензобаки и создайте/загрузите файл/метод.
  4. Включите компьютеры, программные приложения, блок питания клапана и проверьте подключение к Интернету для работы программного приложения.
    1. Программное приложение: Короткий сценарий может быть написан для доставки импульса.
    2. Программное обеспечение EAG: используйте любое программное обеспечение для электрофизиологии.
    3. Реализуйте параметры в программном обеспечении (например, усилитель, продолжительность записи, длительность импульсов и т. д.).
  5. Подайте управляющий импульс, чтобы убедиться, что клапан, подающий импульсы, исправен.
  6. Установите блок питания на 5.2 В. Проверьте параметры усилителя.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для представленных здесь данных используются следующие параметры: фильтр низких среза 0,1 Гц; фильтр с высокой частотой среза 500 Гц; Усиление х100.

6. Подготовка и установка головы комара (рис. 2)

  1. Положите алюминиевую пластину на лед и положите на нее салфетку для влажной уборки.
  2. Положите небольшую ложку электродного геля в угол.
  3. Поставьте противомоскитную чашку на лед и дайте комару остыть в течение нескольких минут или пока он не перестанет летать.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Некоторые виды устойчивы к холоду, и для спуска может потребоваться быстрая анестезия над подушечкой CO2 . Чем меньше комар останется на них, тем лучше.
  4. Положите комара на спину и обрежьте кончик каждой антенны (только небольшую часть последнего сегмента) микроножницами.
  5. Используйте щипцы, чтобы протащить комара рядом с ложкой электродного геля, и аккуратно окуните кончик каждой антенны в гель. Избегайте погружения в электродный гель больше, чем самый последний сегмент.
  6. С помощью щипцов вытащите усики комара, удерживая их рядом друг с другом. Пусть вместе выйдут из геля. Следите за тем, чтобы усики не касались поверхности чистящей салфетки, иначе они могут отделиться.
  7. Положите комара на бок и отрубите голову микроножницами или лезвием бритвы.
    ПРИМЕЧАНИЕ: После того, как голова отрублена, быстро переходите к следующим шагам и к установке EAG, чтобы начать запись. Препарат должен оставаться чувствительным в течение примерно 30 минут.
  8. Возьмите электрод сравнения и осторожно погрузите наконечник в гель. Держите контакт с тканями шеи и дайте голове прилипнуть к ней.
  9. Переместите держатели электродов под микроскоп EAG и посмотрите через микроскоп, чтобы поместить головной (т.е. эталонный) электрод на микроманипулятор. Убедитесь, что усики находятся в центре.
  10. Возьмите записывающий электрод, поместите его перед кончиками усиков. Переместите и выровняйте его как можно ближе к кончикам с помощью микроманипулятора. С помощью микроскопа переместите кончик записывающего электрода в сторону усиков.
  11. Подсоедините оба электрододержателя к усилителю перед установкой наконечников, чтобы предотвратить их смещение после введения.
  12. Вставьте наконечники антенн в записывающий электрод. Убедитесь, что они просто контактируют с физиологическим раствором и электродным гелем и видны прозрачностью через капилляр. Антенна входит за счет «эффекта всасывания».
  13. При необходимости отрегулируйте положение головки и наконечников щипцами под микроскопом.
  14. Поместите трубку рядом с подготовкой головы комара (расстояние: 1 см).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если голова отваливается, вернитесь на станцию вскрытия и установите голову на место или приготовьте новую, если она была утеряна или если прошло более 5 минут с момента отрезания головы. Хорошее соединение между капилляром и шеей/антеннами имеет важное значение для низкого уровня шума и надежной записи. В идеале наконечники антенн должны находиться на расстоянии менее 1 мм от провода записывающего электрода после вставки.
  15. Выключите источник света, если он используется.
  16. Расположите вакуумную линию рядом с подготовкой головы комара (расстояние: 20 см) и выровняйте с основной авиацией.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Вакуум поможет удалить химические вещества, окружающие подготовку головы после стимула, что может привести к ответам ЭАГ после применения импульсов.

7. Записи

  1. После вставки наконечников усиков включите усилитель и шумоподавление. Наблюдайте за базовым сигналом и следите за тем, чтобы он не был шумным.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Обратите внимание на наличие больших колебаний в электрическом сигнале. При необходимости отрегулируйте положение головы и наконечников антенн до тех пор, пока сигнал не станет чистым. Используйте зажимы типа «крокодил», чтобы заземлить все, что вносит шум в клетку Фарадея или воздушный стол. Базовый сигнал с амплитудой менее 0,01 мВ идеально подходит для обнаружения и различения мельчайших откликов ЭАГ.
  2. Как только уровень шума будет удовлетворительным, вставьте первый шприц для проверки запаха в отверстие авиакомпании.
  3. Закройте клетку Фарадея. Не оставайтесь перед препаратом, чтобы уменьшить шум.
  4. Нажмите «Запись» в программном обеспечении EAG.
  5. Доставьте импульс (импульсы) с помощью программного приложения.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Количество и продолжительность импульсов будут варьироваться в зависимости от экспериментов. Здесь использовались однократные импульсы 1 с. на одорант. Одоранты были разделены на 45 с.
  6. Обратите внимание на реакцию усиков комаров в лабораторной тетради.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если одорант обнаруживается усиками комара, наблюдается явное отклонение сигнала (см. рис. 3A).
  7. Приступайте к следующему запаху или концентрации. Не забывайте рандомизировать представление одорантов, если не выполняется кривая доза-реакция.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В экспериментах следует использовать отрицательный контроль и положительный контроль. Это гарантирует, что наблюдаемые реакции действительно являются обонятельными реакциями, а не механическими или электрическими шумами.
  8. В конце записи примените положительный элемент управления, чтобы убедиться, что антенны все еще реагируют.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте 0,1% или 1% бензальдегида, так как все виды комаров, протестированные до сих пор, реагировали на это соединение.
  9. Приступайте к следующему препарату от комаров.

8. Уборка

  1. Выключите усилитель, шумоподавший, авиакомпанию и компьютер.
  2. Верните отдушки в морозильную камеру.
  3. Снимите фильтровальную бумагу со стеклянных шприцев и очистите 100% этанолом, если на стенках видны остатки. Дайте высохнуть на чистящей салфетке на ночь.
  4. Очистите держатели электродов деионизированной водой, чтобы удалить любые возможные следы соли. Высушите, аккуратно нанеся на чистящую салфетку.
  5. Поместите остатки комаров в морозильную камеру и утилизируйте через 24 часа.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если вы работаете с инфицированными комарами, соблюдайте требования безопасности в вашем учреждении.

9. Анализ данных

  1. Измеряйте ответы ЕАГ вручную или автоматически.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь измеряется амплитуда ЭАГ (-мВ). Усредненное, если для каждого соединения было применено несколько импульсов. В зависимости от используемого программного обеспечения EAG могут быть автоматически обнаружены и измерены. Тем не менее, важно проверять каждый ответ в отдельности, чтобы проверить форму ответа и оценить возможный перенос, отсроченный ответ и т. Д. Идеальная реакция ЭАГ совмещена с импульсом, показывает четкое отклонение и повторяется между препаратами от комаров (рис. 3).
  2. Представьте необработанные данные, чтобы показать минимальную изменчивость, низкий уровень шума и четкие отклики (рис. 3B).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Данные также могут быть нормализованы (например, Z-оценка). Отрицательное контрольное значение (например, минеральное масло) (т.е. базовый уровень) может быть вычтено из ответа, а если нет, то должно быть представлено на рисунках. Также должен быть представлен положительный контроль.
  3. Выполняйте статистический анализ с помощью любого статистического программного обеспечения28.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Электроантеннография является мощным инструментом для определения того, обнаруживается ли химическое вещество или смесь химических веществ антенной насекомого. Его также можно использовать для определения порога обнаружения данного химического вещества с использованием постепенного увеличения концентрации (т.е. реакции на кривую дозы, рис. 4B). Кроме того, полезно проверить влияние репеллента на реакцию на запахи, связанные с хозяином29.

В ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

На обонятельное опосредованное поведение влияет множество факторов, включая физиологические (например, возраст, время суток) и экологические (например, температура, относительная влажность)30. Таким образом, при проведении ЭАГ важно использовать насекомых, находящихся в одинаковом физиологическом состоянии (т.е. наблюдение за возрастом, голодание, спаривание)31 , а также поддерживать теплую и влажную среду вокруг препарата, чтобы избежать высыхания. Температура около 25 ° C...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Автору раскрывать нечего.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Я благодарен д-ру Клеману Виногеру и д-ру Джеффри Риффеллу за полезные дискуссии. Следующие реагенты были получены через BEI Resources, NIAID, NIH: Anopheles stephensi, штамм STE2, MRA-128, предоставленный Марком К. Бенедиктом; Aedes aegypti, Strain ROCK, MRA-734, предоставлено Дэвидом В. Северсоном; Culex quinquefasciatus, штамм JHB, яйца, NR-43025. Автор благодарит доктора Джейка Ту, доктора Нишу Дуггал, доктора Джеймса Вегера и Джеффри Марано за предоставление яиц комаров Culex quinquefasciatus и Anopheles stephensi (штамм: Liston). Aedes albopictus и Toxorhynchites rutilus septentrionalis получены от полевых комаров, собранных автором в районе долины Нью-Ривер (Вирджиния, США). Эта работа была поддержана Департаментом биохимии и Институтом наук о жизни Фралина.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Воздушный стол Clean BenchTMChttps://www.techmfg.com/products/labtables/cleanbench63series/accessoriessШумоподавление
Аналого-цифровая платаNational InstrumentsBNC-2090A
Настольный Flowbuddy CompleteGenesee Scientific59-122BCДля обезболивания комаров
Боросилликатное стекло капиллярныйSutter InstrumentВ100-78-10Для записи и референса капилляры
ХимикатыСигма ОлдричБензальдегид: 418099-100 мл; масляная кислота: B103500-100 мл; 1-гексанол: 471402-100 мл; Минеральное масло: M8410-1LХимикаты, использованные для представленных здесь экспериментов
CO2Airgas или PraxairN/AДля обезболивания комаров
Холодный источник светаVolpiNCL-150
Одноразовые шприцыBD1 мл (309628)  / 3 мл (309657)
Электродные кабелиWorld Precision Instruments5371
Электродный гель бессолевойParkerlabs12-08-Spectra-360
Клетка ФарадеяTMChttps://www.techmfg.com/products/electric-and-magnetic-field-cancellation/faradaycagesШумоподавление
РасходомерыBel-art65 мм (H40406-0010) / 150 мм (H40407-0075)По одному флакону
и крышке GCMSThermo-fisher scientific2-SVWKA8-CPKДля приготовления разведений одорантов
Стеклянные шприцы (Fortuna)Sigma AldrichZ314307Для доставки запаха на преп EAG Humbug
Quest Scientifichttp://www.quest-sci.com/Шумоподавление
2 мм Jack Holder, узкий, 90 град., с проволокойA-M системы675748Электрододержатель
Магнитные основанияKanetecMB-FXx 2
MATLAB + Ящикидля инструментовMathworkshttps://www.mathworks.com/products/matlab.htmlДля подачи импульсов
Медицинский воздухAirgas или PraxairN/AДля основной авиакомпании
МикроскопNikkonSMZ-800N
Микроманипуляторы Трехосевой компактный микроманипулятор грубой/тонкойNarishigeMHW-3x 2
Микроэлектродный усилитель с напорнымA-M SystemsМодель 1800
Принадлежности для разведения комаровBioquiphttps://www.bioquip.com/Search/WebCatalog.asp
ИглыBD25G (305127) / 21G (305165)
Пипетки ПастераFisher Scientific13-678-6AДля доставки запаха на подготовку EAG
Трубки из ПТФЭ разного диаметраMc Master CarrN/AДля подключения электромагнитного клапана, расходомер, авиационный и т.д.
Источник питания постоянного тока 30 В/5 А. MeterPS-305DM
R версия 3.5.1R проектhttps://www.r-project.org/Для анализа данных
Реле для электромагнитногоклапана Н/ДИзготовленный
серебряный провод 0,01"A-M Systems782500
Электромагнитный клапан (3-ходовой)The Lee CompanyLHDA0533115H
программное обеспечение WinEDRПрограммное обеспечение для электрофизиологии StrathclydeWinEDR V3.9.1Для записи EAG
Ватман бумагаCole ParmerUX-06648-03Для загрузки химического вещества в стеклянный шприц / пипетку Пастера
очистки сценой Drна заказ

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. World Health Organization. World health statistics 2019: monitoring health for the SDGs, sustainable development goals. World Health Organization. , Geneva. (2019).
  2. Takken, W. The role of olfaction in host-seeking of mosquitoes: a review. International Journal of Tropical Insect Science. 12 (1-2-3), 287-295 (1991).
  3. Zwiebel, L. J., Takken, W. Olfactory regulation of mosquito-host interactions. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 34 (7), 645-652 (2004).
  4. Potter, C. J. Stop the biting: targeting a mosquito's sense of smell. Cell. 156 (5), 878-881 (2014).
  5. Paluch, G., Bartholomay, L., Coats, J. Mosquito repellents: a review of chemical structure diversity and olfaction. Pest Management Science. 66 (9), 925-935 (2010).
  6. Schneider, D. Electrophysiological investigation on the antennal receptors of the silk moth during chemical and mechanical stimulation. Experientia. 13 (2), 89-91 (1957).
  7. Raguso, R. A., Light, D. M., Pickersky, E. Electroantennogram responses of Hyles lineata (Sphingidae: Lepidoptera) to volatile compounds from Clarkia breweri (Onagraceae) and other moth-pollinated flowers. Journal of Chemical Ecology. 22 (10), 1735-1766 (1996).
  8. Schweitzer, E. S., Sanes, J. R., Hildebrand, J. G. Ontogeny of electroantennogram responses in the moth, Manduca sexta. Journal of Insect Physiology. 22 (7), 955-960 (1976).
  9. Martel, V., Anderson, P., Hansson, B. S., Schlyter, F. Peripheral modulation of olfaction by physiological state in the Egyptian leaf worm Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae). Journal of Insect Physiology. 55 (9), 793-797 (2009).
  10. Spaethe, J., Brockmann, A., Halbig, C., Tautz, J. Size determines antennal sensitivity and behavioral threshold to odors in bumblebee workers. Naturwissenschaften. 94 (9), 733-739 (2007).
  11. Suchet, C., et al. Floral scent variation in two Antirrhinum majus subspecies influences the choice of naïve bumblebees. Behavioral Ecology and Sociobiology. 65 (5), 1015-1027 (2011).
  12. De Jong, R., Pham-Delègue, M. H. Electroantennogram responses related to olfactory conditioning in the honeybee (Apis mellifera ligustica). Journal of Insect Physiology. 37 (4), 319-324 (1991).
  13. Patte, F., Etcheto, M., Marfaing, P., Laffort, P. Electroantennogram stimulus-response curves for 59 odourants in the honeybee, Apis mellifica. Journal of Insect Physiology. 35 (9), 667-675 (1989).
  14. Alcorta, E. Characterization of the electroantennogram in Drosophila melanogaster and its use for identifying olfactory capture and transduction mutants. Journal of Neurophysiology. 65 (3), 702-714 (1991).
  15. Park, K. C., Ochieng, S. A., Zhu, J., Baker, T. C. Odor discrimination using insect electroantennogram responses from an insect antennal array. Chemical Senses. 27 (4), 343-352 (2002).
  16. Du, Y. J., Millar, J. G. Electroantennogram and oviposition bioassay responses of Culex quinquefasciatus and Culex tarsalis (Diptera: Culicidae) to chemicals in odors from Bermuda grass infusions. Journal of Medical Entomology. 36 (2), 158-166 (1999).
  17. Costantini, C., et al. Electroantennogram and behavioural responses of the malaria vector Anopheles gambiae to human-specific sweat components. Medical and Veterinary Entomology. 15 (3), 259-266 (2001).
  18. Collins, L. E., Blackwell, A. Electroantennogram studies of potential oviposition attractants for Toxorhynchites moctezuma and T. amboinensis mosquitoes. Physiological Entomology. 23 (3), 214-219 (1998).
  19. Seenivasagan, T., Sharma, K. R., Sekhar, K., Ganesan, K., Prakash, S., Vijayaraghavan, R. Electroantennogram, flight orientation, and oviposition responses of Aedes aegypti to the oviposition pheromone n-heneicosane. Parasitology Research. 104 (4), 827-833 (2009).
  20. Puri, S. N., Mendki, M. J., Sukumaran, D., Ganesan, K., Prakash, S., Sekhar, K. Electroantennogram and behavioral responses of Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) females to chemicals found in human skin emanations. Journal of Medical Entomology. 43 (2), 207-213 (2014).
  21. Cooperband, M. F., McElfresh, J. S., Millar, J. G., Carde, R. T. Attraction of female Culex quinquefasciatus Say (Diptera: Culicidae) to odors from chicken feces. Journal of Insect Physiology. 54 (7), 1184-1192 (2008).
  22. Dekker, T., Ignell, R., Ghebru, M., Glinwood, R., Hopkins, R. Identification of mosquito repellent odours from Ocimum forskolei. Parasites & Vectors. 4 (1), 183(2011).
  23. Choo, Y. M., et al. Reverse chemical ecology approach for the identification of an oviposition attractant for Culex quinquefasciatus. Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (4), 714-719 (2018).
  24. Wolff, G. H., Lahondère, C., Vinauger, C., Riffell, J. A. Neuromodulation and differential learning across mosquito species. bioRxiv. , 755017(2019).
  25. Lahondère, C., et al. The olfactory basis of orchid pollination by mosquitoes. Proceedings of the National Academy of Sciences. 117 (1), 708-716 (2020).
  26. Beyenbach, K., Masia, R. Membrane conductances of principal cells in Malpighian tubules of Aedes aegypti. Journal of Insect Physiology. 48, 375-386 (2002).
  27. Oesterle, A. The Pipette Cookbook. , (2018).
  28. R Core Team. R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing. , Vienna, Austria. (2018).
  29. Afify, A., Betz, J. F., Riabinina, O., Lahondère, C., Potter, C. J. Commonly used insect repellents hide human odors from Anopheles mosquitoes. Current Biology. 29 (21), 3669-3680 (2019).
  30. Martin, F., Riveron, J., Alcorta, E. Environmental temperature modulates olfactory reception in Drosophila melanogaster. Journal of Insect Physiology. 57 (12), 1631-1642 (2011).
  31. Qiu, Y. T., Gort, G., Torricelli, R., Takken, W., van Loon, J. J. Effects of blood-feeding on olfactory sensitivity of the malaria mosquito Anopheles gambiae: application of mixed linear models to account for repeated measurements. Journal of Insect Physiology. 59 (11), 1111-1118 (2013).
  32. Taylor, B., Jones, M. D. R. The circadian rhythm of flight activity in the mosquito Aedes aegypti (L.): the phase-setting effects of light-on and light off. Journal of Experimental Biology. 51 (1), 59-70 (1969).
  33. Eilerts, D. F., VanderGiessen, M., Bose, E. A., Broxton, K., Vinauger, C. Odor-specific daily rhythms in the olfactory sensitivity and behavior of Aedes aegypti mosquitoes. Insects. 9 (4), 147(2018).
  34. Krishnan, B., Dryer, S. E., Hardin, P. E. Circadian rhythms in olfactory responses of Drosophila melanogaster. Nature. 400 (6742), 375-378 (1999).
  35. Pelletier, J., Guidolin, A., Syed, Z., Cornel, A. J., Leal, W. S. Knockdown of a mosquito odorant-binding protein involved in the sensitive detection of oviposition attractants. Journal of Chemical Ecology. 36 (3), 245-248 (2010).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи