Анализ перевода в развивающемся мозге мыши с использованием полисомного профилирования

Shreeya Kedia; Sarah L. Erickson; Guang Yang

doi:10.3791/62088

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Анализ перевода в развивающемся мозге мыши с использованием полисомного профилирования

5.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/62088

⸱

22 мая 2021 г.

Shreeya Kedia¹^,³ , Sarah L. Erickson²^,³ , Guang Yang¹^,²^,³

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology; Cumming School of Medicine, University of Calgary, ²Department of Medical Genetics, Cumming School of Medicine, University of Calgary, ³Alberta Children's Hospital Research Institute, University of Calgary

В этой статье

Краткое содержание

Развитие мозга млекопитающих требует надлежащего контроля экспрессии генов на уровне перевода. Здесь мы описываем систему поликомного профилирования с помощью простой в сборке градиентной градиентной и фракционной платформы для оценки трансляционного состояния мРНК в развивающемся мозге.

Аннотация

Правильное развитие мозга млекопитающих опирается на тонкий баланс пролиферации нервных стволовых клеток и дифференциации на различные типы нервных клеток. Этот баланс жестко контролируется экспрессией генов, которая достроена на нескольких уровнях, включая транскрипцию, посткриптацию и перевод. В этой связи растущее количество фактических данных подчеркивает важную роль трансляционной регуляции в координации решений о судьбе нервных стволовых клеток. Полисомная фракционирование является мощным инструментом для оценки трансвеститного статуса мРНК как на глобальном, так и на индивидуальном уровне генов. Здесь мы представляем внутриутверенные полисомные профилирования трубопровода для оценки трансляционной эффективности в клетках из развивающейся коры головного мозга мыши. Мы описываем протоколы для подготовки градиента сахарозы, лиза тканей, ультрацентрифугации и дробного анализа переводного статуса мРНК.

Введение

Во время развития мозга млекопитающих, нервные стволовые клетки размножаются и дифференцируются для генерации нейронов и^{глии 1,}^2. Возмущение этого процесса может привести к изменениям в структуре и функции мозга, как видно из многих расстройств нейроразвития³^,⁴. Правильное поведение нервных стволовых клеток требует организованного выражения конкретных генов^5. В то время как эпигенетический и транскрипционные контроль этих генов был интенсивно изучен, последние результаты показывают, что регуляции генов на других уровнях также сп....