Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

3D-визуализация коллагеновых волокон PDL во время ортодонтического движения зубов в модели нижнечелюстной мыши

5.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/62149

⸱

15 апреля 2021 г.

 ,  ,  , 
1Department of Oral Medicine, Infection and Immunity, School of Dental Medicine, Harvard University

В этой статье

Краткое содержание

Представлен протокол генерации ортодонтического движения зубов у мышей и методы 3D визуализации коллагеновых волокон и кровеносных сосудов пародонтальной связки без сечения.

Аннотация

Ортодонтическое движение зубов представляет собой сложный биологический процесс изменения ремоделирования мягких и твердых тканей в результате внешних сил. Чтобы понять эти сложные процессы ремоделирования, крайне важно изучить ткани зуба и пародонта в их 3D-контексте и, следовательно, свести к минимуму любые сечения и тканевые артефакты. Мышиные модели часто используются в биологии развития и структурной биологии, а также в биомеханике из-за их небольшого размера, высокой скорости метаболизма, генетики и простоты обращения. В принципе, это также делает их отличными моделями для стоматологических исследований. Однако основным препятствием является их небольшой размер зубов, в частности моляров. Данная работа направлена на предоставление пошагового протокола генерации ортодонтического движения зуба и двух методов 3D-визуализации фиброзного компонента пародонтальной связки мышиного моляра нижней части. Первый представленный метод основан на микро-КТ-установке, позволяющей фазовую визуализацию свежих коллагеновых тканей. Второй метод представляет собой метод очистки кости с использованием этилциннамата, который позволяет визуализировать кость без сечения и сохраняет эндогенную флуоресценцию. Сочетание этого метода очистки с репортерными мышами, такими как Flk1-Cre; TdTomato предоставил первую в своем роде возможность изобизировать 3D-сосудистую в PDL и альвеолярной кости.

Введение

Основным биологическим процессом в ортодонтическом движении зубов (OTM) является ремоделирование кости. Триггер для этого процесса ремоделирования приписывается изменениям в структуре пародонтальной связки (PDL), таким как напряжение внеклеточного матрикса (ECM), некроз, а также разрушение кровеносных сосудов и образование1,2,3. Другие возможные триггеры для ремоделирования альвеолярной кости связаны с зондированием силы остеоцитами в кости, а также механической деформацией самой альвеолярной кости; однако их роль в ОТМ до сих пор до конца не выяснена4,5.

Несмотря на множество исследований, направленных на выявление структурно-функциональных отношений PDL при OTM, четкий функциональный механизм еще предстоит определить6,7. Основной причиной этого является проблема с получением данных о мягких тканях (PDL), расположенных между двумя твердыми тканями (цементом и альвеолярной костью). Принятые методы сбора структурной информации обычно требуют фиксации и секционирования, которые нарушают и изменяют структуру PDL. Более того, большинство из этих методов дают 2D-данные, которые даже если и не искажены, дают лишь частичную и локализованную информацию. Поскольку PDL не является однородным по своей структуре и функциям, оправдан подход, который обращается к неповрежденной 3D-структуре всего комплекса зуб-PDL-кость.

В этой статье будет описан метод генерации OTM у мышей и два метода, которые позволяют 3D-визуализацию коллагеновых волокон в PDL без какого-либо сечения образца.

Мышиные модели широко используются для экспериментов in vivo в медицине, биологии развития, доставке лекарств и структурных исследованиях. Они могут быть генетически модифицированы для устранения или усиления специфических белков и функций; они обеспечивают быстрый, воспроизводимый и предсказуемый контроль развития; они также легко изобразимы из-за их небольшого размера8. Несмотря на свои многочисленные преимущества, мышиные модели в стоматологических исследованиях используются не часто, особенно когда клинические манипуляции оправданы, в основном из-за небольших размеров зубов. Животныемодели,такие как крысы9,10,11,собаки12,13,свиньи14,15,16 и обезьяны17, используются чаще, чем мыши. С недавним развитием методов визуализации с высоким разрешением преимущества использования мышиной модели для расшифровки запутанных процессов в OTM многочисленны. В данной работе представлен метод генерации мезиального движения молярного зуба в мандибле с постоянными силовыми уровнями, которые вызывают ремоделирование кости. Большинство экспериментов OTM на грызунах проводятся в верхней челюсти, так как подвижность мандиблы и наличие языка добавляют еще один уровень сложности. Тем не менее, мандибля имеет много преимуществ, когда желательна 3D-структурная целостность. Его можно легко рассекать как целую кость; у некоторых видов он может быть разделен на две геми-мандиблы через волокнистый симфиз; он компактный, плоский и содержит только зубы без каких-либо синусовых пространств. Напротив, верхняя челюсть является частью черепа и тесно связана с другими органами и структурами, поэтому необходимо обширное сечение, чтобы рассекать альвеолярную кость с ассоциированными зубами.

Используя камеру влажности в доме, соединенную с системой загрузки внутри микро-КТ высокого разрешения, которая позволяет фазовое усиление, мы разработали метод визуализации свежих волокнистых тканей в 3D, как описаноранее 9,18,19,20,21,22,23. Свежие ткани сканируются сразу после жертвоприношения животного без какого-либо окрашивания или фиксации, что уменьшает тканевые артефакты, а также изменения биомеханических свойств. Эти 3D-данные могут быть использованы для распределения и анализа направления волокон, как описано в другом месте19.

Второй 3D-метод визуализации целых тканей, представленный здесь, основан на оптической очистке мандиблы, которая позволяет визуализировать волокна PDL через кость без какого-либо сечения. Интересно, что он также позволяет визуализировать коллагеновые волокна самой кости, однако это не будет обсуждаться здесь. В целом, существует два метода очистки тканей. Первый представляет собой очистку на водной основе, когда образец погружается в водный раствор с показателем преломления более 1,4 либо путем простого погружения, гипергидратации или встраивания гидрогеля. Однако этот метод ограничен в уровне прозрачности, а также структурной сохранности ткани и поэтому требует фиксации ткани. Вторым способом, который дает высокопрозрачные образцы и не требует фиксации, является метод очистки на основе растворителей24,25. Мы создали модифицированный метод очистки на основе растворителей на основе этил-3-фенилпропа-2-еноата (этилциннамат, ECi) для образцов нижней и нижней впальца. Этот метод имеет преимущества использования нетоксичного пищевого очищающего агента, минимального усадки тканей и сохранения флуоресцентных белков.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты на животных проводились в соответствии с Руководящими принципами NIH по уходу за лабораторными животными и их использованию и руководящими принципами Комитета по институциональному уходу за животными и их использованию Гарвардского университета (Протокол No 01840).

1. Ортодонтическое движение зубов

  1. Чтобы создать кровать для мыши, используйте плоскую пластиковую платформу с клиновидным подголовником под углом 45 °. Подголовник может быть получен путем разрезания пластиковой коробки.
    1. Поднимите головной конец платформы, чтобы создать угол примерно 30° между подголовником и плоскостью стола. Прикрепите изогнутую толстую скрепку (диаметром 0,036 дюйма) к головному боковому концу, чтобы удерживать верхние резцы.
    2. На хвостовом конце создайте приподнятую поверхность, к которой может быть прикреплена ортодонтическая силовая цепь для удержания нижних резцов. Пример платформы приведен на рисунке 1.
  2. Обезболить мышь путем внутрибрюшинной инъекции ксилазина в 10 мг/кг и кетамина 100 мг/кг с использованием шприца 1 мл и иглы 27 калибра.
  3. Поместите обезболенную мышь на изготовленную по индивидуальному заказу платформу и обездвиживайте верхнюю челюсть, зацепив верхние резцы за петлю скрепки. Откройте нижнюю челюсть мыши ортодонтической силовой цепью, зацепленной за нижние резцы. Держите щеки втянутыми с помощью втягивателя рта мини-колибри.
  4. Поместите платформу под хирургический микроскоп или любой другой стереоскоп, который может достигать 5-6-кратного увеличения.
  5. Нанесите 50 мкл физиологического раствора (примерно 1 капля) на глаза мыши, чтобы предотвратить обезвоживание роговицы. Пополняйте физиологический раствор каждые 20 мин.
  6. Вырежьте кусок алюминиевой проволоки (диаметром 0,08 мм) длиной 1 см. Сдвиньте проволоку с щечной стороны на язычно в межпроксимальной области ниже точки контакта между первым и вторым моляром с помощью микрохирургического игольчатого держателя. Оставьте 2 мм свободного края перед первым коренным голеном, чтобы вставить его в конец пружины.
  7. Вырежьте кусок никель-титановой (NiTi) катушки длиной от 7 до 9 нитей.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Упругие свойства катушки обеспечат постоянную силу для ортодонтического движения. Общая ненапряженная длина катушки должна быть короче зазора между резцем и моляром. Имейте в виду, что на каждом конце необходимы дополнительные 2 резьбы, чтобы закрепить катушку к зубу. Алюминиевая проволока выбирается для того, чтобы уменьшить артефакты сканирования, такие как закалка луча во время микро-КТ сканирования.
  8. Вставьте пружину катушки NiTi (диаметр проволоки 0,15 мм, внутренний диаметр катушки 0,9 мм; обеспечивает усилие 10 г) между нижним первым моляром и нижним резцем. Используйте проволочную лигатуру, вставленную вокруг первого моляра на шаге 1.6, плотно скрутите проволоку вокруг 2 резьбы пружины катушки, чтобы закрепить катушку на молярной стороне.
  9. Для обеспечения равномерного уровня силы используйте ровно 3 активные нити между первым моляром и резцей. Временно снимите силовую цепь с резцового резка и петлю от 2 до 3 ненатянутых резьб над резцем, чтобы закрепить катушку. Сдвиньте нити вниз к свободному от резцов краю дева.
  10. Поместите слой текучих композитных смол на резцевую границу катушки и отвержите ее зубным отверждающим светом. Замените силовую цепь после отверждения смолы.
  11. Используя тот же отверждающий свет, нагрейте катушку NiTi в течение 20 с. Это позволит затянуть катушку NiTi. Готовое размещение показано на рисунке 1С.
  12. Либо оставьте контралатеральную сторону неповрежденной, либо вставьте фикцию, такую как проволока между первым и вторым коренными лярами.
  13. Поместите анестезируемую мышь под нагретый свет, чтобы держать мышь в тепле до выздоровления.
  14. Поместите мышь обратно в индивидуальную клетку и следите за ней ежедневно. Во время ортодонтического движения не требуется менять диету.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Устройство OTM с одной стороны вызывает некоторый дискомфорт, но не ухудшает кормление. Тем не менее, вставка устройств с обеих сторон не рекомендуется из-за дополнительного количества дискомфорта. Обезболивающие препараты не нужны, если не видны внешние признаки боли.

2. Микро-КТ волокон PDL в свежих геми-мандиблях

  1. Монтаж геми-мандиблы (Рисунок 2)
    1. После желаемой продолжительности ортодонтического движения жертвуйте мышью через вывих шейки матки. Снимите мандиблю и разделите на геми-мандибли.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку образец не будет зафиксирован, крайне важно выполнить рассечение челюсти и монтаж как можно скорее, в идеале в течение 30 минут.
    2. Аккуратно удалите окружающие мягкие ткани чистой безворсовой салфеткой.
    3. Извлеките ортодонтическое устройство с помощью микрохирургических ножниц и пинцета под стереомикроскопом с увеличением не менее 4 раз.
    4. Держите образец влажным в микроцентрифужной трубке объемом 1,5 мл вместе с кусочком безворсовой салфетки, смоченным водой.
    5. Поместите упаковываемую стоматологическую композитную смолу в прорезь образца на сцене, затем поместите свежую геми-мандиму в композит. Перед монтажом убедитесь, что поверхность кости, контактировка с зубным композитом, свободна от каких-либо мягких тканей и суха, иначе стоматологический композит не будет затвердеть должным образом.
    6. Отрегулируйте положение геми-мандиблы до тех пор, пока первый моляр не будет центрирован в средней канавке сцены. Убедитесь, что окклюзионная поверхность горизонтальна. Отверждите композит, когда удовлетворены позиционированием.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Дополнительные небольшие количества стоматологических композитов могут быть размещены по бокам получелюсти и/или поперек резца, чтобы помочь стабилизировать образец.
    7. Поместите влажную безворсовую салфетку внутрь влагоемких бассейнов на стадии отбора проб. Поместите зубной композит на окклюзионную поверхность первого моляра. Прежде чем закрыть камеру, убедитесь, что ничто не блокирует рентгеновский путь на уровне образца.
    8. Прикрепите камеру в микро-КТ. Вкрутите камеру в стадию образца микро-КТ, чтобы движение во время визуализации было сведено к минимуму.
    9. Включите рентгеновские лучи и делайте 2D-изображения, опуская наковальню вертикально, пока кончик наковальни не будет окружен композитом, но увеличения силы не будет обнаружено.
    10. Как только наковальня будет встроена в композит, закройте источник рентгеновского излучения. Затем откройте камеру микро-КТ и отвержите композит через прозрачное окно из плексигласа.
  2. Настройки микро-КТ
    1. Установите напряжение источника на 40 кВ и ток на 200 мкА. Используя детектор 10-кратного увеличения, поместите образец в рамки обзора. Используйте биннинг 2 для захваченных изображений.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку PDL значительно менее плотный, чем кость и зуб, визуализация PDL требует более высокой мощности и времени воздействия. Этот протокол предоставляет параметры для визуализации PDL.
    2. Установите время экспозиции одного изображения на 25 с. Установите поворот ступени образца в диапазоне 183 градусов и более. Установите сканирование для 2500 проекций. Не используйте фильтр источника рентгеновского излучения, полученные сканы имеют размер вокселя 0,76 мкм с каждой стороны.
    3. Соберите эталонное сканирование для правильной реконструкции в соответствии с рекомендациями микро-КТ. Используйте 1/3 количества эталонных изображений в качестве общих проекций. Восстановите том без дополнительного биннинга, используя алгоритм фильтрации обратной проекции.

3. Метод очистки(рисунок 3)

  1. Подготовьте пять микроцентрифужных трубок по 1,5 мл.
  2. Готовят 1,4 мл следующих растворов в микроцентрифужных пробирках по 1,5 мл: 4% параформальдегид (PFA) в фосфатно-буферном физиологическом растворе (PBS), 50% этанол (EtOH) в деионизированной (DI) воде, 70% EtOH в воде DI и две трубки 100% EtOH.
    ПРИМЕЧАНИЕ: PFA используется для фиксации образца. Очистка ECi также будет работать на нефиксированных образцах. Чтобы очистить нефиксированные образцы, просто пропустите шаг PFA.
  3. Поместите рассеченную геми-мандиблю в 4% PFA. Накрыть алюминиевой фольгой и поместить на коромысло на щадящую установку при комнатной температуре на 6 ч.
  4. Переместите геми-мандиблю на 50% EtOH. Поместите его на коромышку, закрытую от света на 16 ч.
  5. Переместите геми-мандиблю на 70% EtOH. Поместите его на коромышку, закрытую от света на 16 ч.
  6. Переместите геми-мандиму до 100% EtOH. Поместите его на коромышку, закрытую от света на 16 ч.
  7. Повторите 3.6. во второй 100% etOH трубке.
  8. Приготовьте 5 мл ECi в стеклянной или полипропиленовой трубке.
    ПРИМЕЧАНИЕ: ECi растворяет полистирол, но не полипропилен. Кроме того, если не использовать ткань с флуоресцентными белками, образец может подвергаться воздействию света во время процедуры очистки.
  9. Переместите геми-мандиму в трубку ECi. Накройте трубку алюминиевой фольгой и поместите на коромышку на щадящую установку минимум на 12 ч.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь протокол можно приостановить. Обезвоженный образец может храниться в ECi при комнатной температуре. Температура замерзания или плавления ECi составляет от 6,5 до 8,0 °C. Не хранить при 4 °C.
  10. Геми-мандибля готова к визуализации с помощью флуоресцентного микроскопа.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Во время визуализации образец должен быть погружен в ECi, чтобы оставаться оптически прозрачным.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

В этой статье представлен метод получения OTM, а также два метода для 3D-визуализации коллагеновых волокон внутри PDL без какого-либо сечения. Для целей исследования на животных, когда выравнивание зубов не требуется, движение зуба считается ортодонтическим, если оно генерирует ремоделирование альвеолярной кости на всех уровнях корней. Постоянный уровень силы, приложенной к зубам, необходим для создания надежного OTM. Здесь активированная катушка NiTi с памятью формы используется для создания постоянной силы в 10 г в теч...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Генерация OTM у мышей очень желательна из-за размера, генетики и преимуществ обработки. Использование мандиблы обеспечивает простоту обращения как с точки зрения рассечения тканей, так и с точки зрения подготовки образцов и визуализации. Здесь мы представили метод генерации OTM с трансляционным движением зуба внутри кости в течение 7 дней OTM. Используя этот протокол, общая продолжительность движения зуба может быть увеличена, так как активированная катушка обеспечивает постоянный уровень силы для движения примерно до 1 ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Это исследование было поддержано NIH (NIDCR R00- DE025053, PI: Naveh). Мы хотели бы поблагодарить Гарвардский центр биологической визуализации за инфраструктуру и поддержку. Все цифры генерируются с biorender.com.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1-мл BD шприц Luer-LokBD309628
1X фосфатный буферный растворVWR Life Sciences0780-10L
200 proof этанолVWR Life SciencesV1016
Алюминиевый сплав 5019 проволокаSigma-aldrichGF158288130,08 мм диаметр проволока, длина 100-й, твердая. Используется в качестве проволочной лигатуры вокруг моляра.
Avizo 9.7Thermo Fisher ScientificN/AИспользуется для анализа микрокомпьютерной томографии
Castroviejo Micro NeedleHolder Fine Science Tools12060-01
Clr Plan-Apochromat 20x/1.0, CorrVIS-IR M27 85mmZeissN/AИспользуется для визуализации второй гармоники
Конусная рукоятка гнезда, односторонняяя, ручная формаG.Hartzell and son126-CSH3Ручка зеркало для осмотра
EC Plan-Neofluar 5x/0.16Zeiss440321-9902Используется для световой визуализации
Elipar DeepCure-S Светодиодный полимеризационный светильник3M ESPE76985
Eppendorf safe-lock tubes, 1,5 млEppendorf22363204
этилциннамат, >= 98%Sigma-aldrichW243000-1KG-K
Игла для подкожных инъекций, 27G x 1/2'' BD305109
Кетатезия 100 мг/млHenry Schein Animal HealthNDC:11695-0702-1
KIMWIPES деликатные салфеткиKimberly-Clark21905-026 (номер по каталогу VWR)Приобретено у VWR
LightSheet Z.1 двойная световая микроскопическая системаZeissLightSheet Z.1/LightSheet 7Используется для световой визуализации
LSM 880 NLO многофотонный микроскопZeissLSM 880 NLOИспользуется для двухфотонной визуализации
MEGAmicro, плоскость, диаметр 5 мм, резьба SSHahnenkratt6220Передняя поверхность зеркала
Микрокомпьютерная томография аппарат, MicroXCT-200XradiaMICRO XCT-200
Mini-ColibriFine Science Tools17000-01
PermaFlo Текучий композитныйультразубец948
Процедурная платформаН/ДН/ДИзготовлена на заказ из лабораторных материалов
Стандартный стереомикрофон M80Leica MicosystemsM80
Sentalloy NiTi открытая спиральная пружинаTOMY Inc.Закрытая катушка NiTi диаметром 0,15 мм с внутренним диаметром катушки 0,9 мм обеспечивает усилие 10 г. Аналогичные продукты можно приобрести в Dentsply Sirona.
T-304 лигатурная проволока из нержавеющей стали, диаметр 0,009 дюймаОртодонтияSBLW109диаметром 0,009 дюйма (0,23 мм), Мягкий темперамент
X-Ject E (ксилазин) 100 мг/млHenry Schein Animal HealthNDC: 11695-7085-1
Z100 Восстановительный, оттенок A23M ESPE5904A2

Ссылки

  1. Li, Y., et al. Orthodontic tooth movement: The biology and clinical implications. The Kaohsiung Journal of Medical Sciences. 34 (4), 207-214 (2018).
  2. Meikle, M. C. The tissue, cellular, and molecular regulation of orthodontic tooth movement: 100 years after Carl Sandstedt. European Journal of Orthodontics. 28, 221-240 (2006).
  3. Krishnan, V., Davidovitch, Z., molecular, Cellular, molecular, and tissue-level reactions to orthodontic force. American Journal of Orthodontics and Dentofacial Orthopedics. 129 (4), 1-32 (2006).
  4. Shoji-Matsunaga, A., et al. Osteocyte regulation of orthodontic force-mediated tooth movement via RANKL expression. Scientific Reports. 7 (1), 8753(2017).
  5. Oppenheim, A. Tissue changes, particularly of the bone, incident to tooth movement. European Journal of Orthodontics. 29, suppl 1 2-15 (2007).
  6. Unnam, D., et al. Accelerated Orthodontics-An overview. Journal of Archives of Oral Biologyogy and Craniofacial Research. 3 (1), 4(2018).
  7. von Bohl, M., Kuijpers-Jagtman, A. M. Hyalinization during orthodontic tooth movement : a systematic review on tissue reactions. European Journal of Orthodontics. 31 (1), 30-36 (2009).
  8. Kirschneck, C., et al. Comparative assessment of mouse models for experimental orthodontic tooth movement. Scientific Reports. 10 (1), 1-12 (2020).
  9. Naveh, G. R. S., Weiner, S. Initial orthodontic tooth movement of a multirooted tooth: a 3D study of a rat molar. Orthodontics & Craniofacial Research. 18 (3), 134-142 (2015).
  10. Nakamura, Y., et al. Time-lapse observation of rat periodontal ligament during function and tooth movement, using microcomputed tomography. European Journal of Orthodontics. 30 (3), 320-326 (2008).
  11. Kawarizadeh, A., Bourauel, C., Jager, A. Experimental and numerical determination of initial tooth mobility and material properties of the periodontal ligament in rat molar specimens. European Journal of Orthodontics. 25 (6), 569-578 (2003).
  12. Jónsdóttir, S. H., Giesen, E. B. W., Maltha, J. C. Biomechanical behavior of the periodontal ligament of the beagle dog during the first 5 hours of orthodontic force application. European Journal of Orthodontics. 28, 547(2006).
  13. Lindhe, J., et al. Experimental breakdown of peri-implant and periodontal tissues. A study in the beagle dog. Clinical Oral Implants Research. 3 (1), 9-16 (1992).
  14. Salamati, A., et al. Functional tooth mobility in young pigs. Journal of Biomechanics. 104, 109716(2020).
  15. Maria, R., et al. An unusual disordered alveolar bone material in the upper furcation region of minipig mandibles: A 3D hierarchical structural study. Journal of Structural Biology. 206 (1), 128-137 (2019).
  16. Wang, S., et al. The miniature pig: a useful large animal model for dental and orofacial research. Oral Diseases. 10, 1-7 (2007).
  17. Melsen, B. Tissue reaction to orthodontic tooth movement--a new paradigm. European Journal of Orthodontics. 23 (6), 671-681 (2001).
  18. Naveh, G. R. S., et al. Direct MicroCT imaging of non-mineralized connective tissues at high resolution. Connective Tissue Research. 55 (1), 52-60 (2014).
  19. Naveh, G. R. S., et al. Nonuniformity in ligaments is a structural strategy for optimizing functionality. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (36), 9008(2018).
  20. Naveh, G. R. S., et al. Tooth periodontal ligament: Direct 3D microCT visualization of the collagen network and how the network changes when the tooth is loaded. Journal of Structural Biology. 181 (2), 108-115 (2013).
  21. Naveh, G. R. S., et al. Tooth movements are guided by specific contact areas between the tooth root and the jaw bone : A dynamic 3D microCT study of the rat molar. Journal of Structural Biology. 17 (2), 477-483 (2012).
  22. Naveh, G. R. S., et al. Tooth-PDL-bone complex: Response to compressive loads encountered during mastication -A review. Archives of Oral Biology. 57 (12), 1575-1584 (2012).
  23. Ben-Zvi, Y., et al. Response of the tooth-periodontal ligament-bone complex to load: A microCT study of the minipig molar. Journal of Structural Biology. 205 (2), 155-162 (2019).
  24. Klingberg, A., et al. Fully Automated Evaluation of Total Glomerular Number and Capillary Tuft Size in Nephritic Kidneys Using Lightsheet Microscopy. Journal of the American Society of Nephrology. 28 (2), 452(2017).
  25. Richardson, D. S., Lichtman, J. W. Clarifying Tissue Clearing. Cell. 162 (2), 246-257 (2015).
  26. Taddei, S. R. dA., et al. Experimental model of tooth movement in mice: A standardized protocol for studying bone remodeling under compression and tensile strains. Journal of Biomechanics. 45 (16), 2729-2735 (2012).
  27. Nakamura, K., Sahara, N., Deguchi, T. Temporal changes in the distribution and number of macrophage-lineage cells in the periodontal membrane of the rat molar in response to experimental tooth movement. Archives of Oral Biology. 46 (7), 593-607 (2001).
  28. Rygh, P., et al. Activation of the vascular system: A main mediator of periodontal fiber remodeling in orthodontic tooth movement. American Journal of Orthodontics and Dentofacial Orthopedics. 89 (6), 453-468 (1986).
  29. Nagao, M., et al. Vascular endothelial growth factor in cartilage development and osteoarthritis. Scientific Reports. 7 (1), 13027(2017).
  30. Licht, A. H., et al. Endothelium-specific Cre recombinase activity in flk-1-Cre transgenic mice. Developmental Dynamics. 229 (2), 312-318 (2004).
  31. Connizzo, B. K., Naveh, G. R. S. In situ AFM-based nanoscale rheology reveals regional non-uniformity in viscoporoelastic mechanical behavior of the murine periodontal ligament. Journal of Biomechanics. 111, 109996(2020).
  32. Connizzo, B. K., et al. Nonuniformity in Periodontal Ligament: Mechanics and Matrix Composition. Journal of Dental Research. 2, 179-186 (2020).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Микро-КТ визуализацияоптическое просветлениеэтилциннаматпериодонтальная связкаремоделирование костиплоскостная световая микроскопия
3D-визуализация коллагеновых волокон PDL во время ортодонтического движения зубов в модели нижнечелюстной мыши
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.