Использование куриного эмбриона в качестве мощного инструмента в оценке кардиотоксицитов развития

Summary

Куриные эмбрионы, как классическая модель развития, используются в нашей лаборатории для оценки кардиотоксицности развития после воздействия различных загрязнителей окружающей среды. В данной рукописи описаны методы воздействия и установленные методы морфологической/функциональной оценки.

Abstract

Куриные эмбрионы являются классической моделью в исследованиях развития. Во время развития куриных эмбрионов временное окно развития сердца четко определено, и относительно легко достичь точного и своевременного воздействия с помощью нескольких методов. Кроме того, процесс развития сердца у куриных эмбрионов аналогичен млекопитающим, что также приводит к четырехкамерному сердцу, что делает его ценной альтернативной моделью в оценке кардиотоксицитов развития. В нашей лаборатории модель куриного эмбриона обычно используется для оценки кардиотоксичности развития после воздействия различных загрязнителей окружающей среды, включая пер- и полифторалкильные вещества (PFAS), твердые частицы (PMs), дизельные выхлопные газы (DE) и наноматериалы. Время воздействия может быть свободно выбрано в зависимости от необходимости, от начала развития (эмбриональный день 0, ЭД0) до дня, предшествуя вылуплению. Основные методы воздействия включают инъекцию воздушных клеток, прямую микроинъекцию и вдыхание воздушных клеток (первоначально разработанные в нашей лаборатории), а доступные в настоящее время конечные точки включают сердечную функцию (электрокардиография), морфологию (гистологические оценки) и молекулярно-биологические оценки (иммуногистохимия, qRT-ПЦР, вестерн-блоттинг и т. Д.). Конечно, модель куриного эмбриона имеет свои ограничения, такие как ограниченная доступность антител. Тем не менее, поскольку все больше лабораторий начинают использовать эту модель, она может быть использована для внесения значительного вклада в изучение кардиотоксицитов развития.

Introduction

Куриный эмбрион является классической моделью развития, которая используется уже более двухсот лет^1. Модель куриного эмбриона имеет различные преимущества по сравнению с традиционными моделями. Прежде всего, еще более 70 лет назад нормальное развитие куриного эмбриона было очень четко проиллюстрировано в руководстве по постановке Гамбургера-Гамильтона^2,в котором в общей сложности 46 стадий развития куриного эмбриона были определены с точным временем и морфологическими характеристиками, облегчающими обнаружение аномального развития. Кроме того, модель куриного эмбриона имеет и другие особенности, такие как относительно ни....

Protocol

Все описанные процедуры были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) Университета Циндао. В нашей лаборатории яйца инкубировали в двух инкубаторах. Яйца держали вертикально в инкубаторе и случайным образом размещали на полках. Условия инкубации яиц были следующими: температура инкубации начиналась с 37,9 °C и постепенно снижалась до 37,1 °C по мере инкубации; влажность началась с 50% и постепенно увеличивалась до 70%.

1. Методы воздействия

ПРИМЕЧАНИЕ: Воздействие загрязнителей окружающей среды на куриные эмбрионы может быть достигнуто несколькими способами. В этом разде....

Results

Результаты экспозиции
Инъекция воздушных клеток
Инъекция воздушных клеток может эффективно подвергать развивающиеся куриные эмбрионы воздействию различных агентов, которые впоследствии могут быть обнаружены в собранных образцах (сыворотка, ткань и т. д.) эмбрионов / птенцов цыплят. Вот пример, в котором перфтороктановая кислота (PFOA) вводилась в воздушную клетку, а концентрации PFOA в сыворотке крови затем определяли с помощью ультраэффективной жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии. Сывороточные концентрации.......

Discussion

Куриный эмбрион был классической моделью в исследованиях развития в течение 200 лет¹. Наши методы, представленные в этой рукописи, были использованы при оценке нескольких загрязнителей окружающей среды, включая перфтороктановую кислоту, твердые частицы и дизельные выхлопные газы с успехом^{5,7,8,9,10,11,}.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
4% фосфатный буферный формальдегидефиксатор	Biosharp, Хэфэй, Китай	REF: BL539A
75% этанол	Guoyao, Шанхай, Китай	CAS: 64-17-5
Биосигнальный монитор BL-420E+	Taimeng, Чэнду, Китай	BL-420E+
Лампа миражирования	Zhenwei, Дэчжоу, Китай	WZ-001
Одноразовый шприц	Чжиюй, Цзянсу, Китай
Инкубатор для яиц	Кею, Дэчжоу, Китай	KFX
Электрические весы	OHAUS, Шанхай, Китай	AR 224CN
Электротермальный инкубатор	Шэньсянь, Шанхай, Китай	DHP-9022
Абсолютный этанол	Guoyao,Шанхай, Китай	CAS:64-17-5
Оплодотворенное куриное яйцо	Цзяньуо, Цзинин, Китай Набор
окрашивания гематоксилина и эозина	Beyotime, Пекин, Китай	C0105
Гистологический парафин	Аладдин, Шанхай, Китай	P100928-500 г	Температура плавления 52 ~ 54 градуса; C
Гистологический парафин	Аладдин, Шанхай, Китай	P100936-500 г	Температура плавления 62 ~ 64 градуса; С
катетер для внутривенных вливаний	KDL, Чжэцзян, Китай		Катетеры должны быть мягкими, пластиковыми.
Lentivirus	Genechem, Шанхай, Китай		Лентивирусы были индивидуально разработаны/синтезированы компанией Genechem.
Набор для окрашивания трихрома Masson's	Solarbio, Пекин, Китай	G1340
Металлический зонд	Jinuotai, Пекин, Китай
Микроинъектор (5 мкл)	Anting, Шанхай, Китай
Микроскоп	CAIKON, Шанхай, Китай	XSP-500
Microtome	Leica,	Германия HistoCore BIOCUT
Microtome лезвие	Leica, Германия	Leica 819
Пентобарбитуал натрия	Yitai Technology Co. Ltd.,  Ухань, Китай	CAS: 57-33-0
Pipetter(10ul)	Sartorius, Германия
Повидон йодид	Longyuquan, Тайан, Китай
Ножницы	Anqisheng,Сучжоу, Китай
Стерильный физиологический раствор	Келунь,Чэнду, Китай Подсолнечное
масло	Mighty Jiage, Цзянсу, Китай		Любое коммерческое подсолнечное масло для употребления в пищу должно работать
Tape	M& G, Шанхай, Китай
Мешок Tedlar PVF (5 л)	Делин, Далянь, Китай
Вихревой миксер	SCILOGEX, Роки Хилл, Коннектикут, США	MX-F
Xylene	Guoyao, Шанхай, Китай	CAS:1330-20-7