Методическая статья

Использование куриного эмбриона в качестве мощного инструмента в оценке кардиотоксицитов развития

DOI:

10.3791/62189

⸱

21 марта 2021 г.

 ,  ,  , 
1School of Public Health, Qingdao University, 2Department of Pharmacology & Toxicology, Brody School of Medicine, East Carolina University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Куриные эмбрионы, как классическая модель развития, используются в нашей лаборатории для оценки кардиотоксицности развития после воздействия различных загрязнителей окружающей среды. В данной рукописи описаны методы воздействия и установленные методы морфологической/функциональной оценки.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Куриные эмбрионы являются классической моделью в исследованиях развития. Во время развития куриных эмбрионов временное окно развития сердца четко определено, и относительно легко достичь точного и своевременного воздействия с помощью нескольких методов. Кроме того, процесс развития сердца у куриных эмбрионов аналогичен млекопитающим, что также приводит к четырехкамерному сердцу, что делает его ценной альтернативной моделью в оценке кардиотоксицитов развития. В нашей лаборатории модель куриного эмбриона обычно используется для оценки кардиотоксичности развития после воздействия различных загрязнителей окружающей среды, включая пер- и полифторалкильные вещества (PFAS), твердые частицы (PMs), дизельные выхлопные газы (DE) и наноматериалы. Время воздействия может быть свободно выбрано в зависимости от необходимости, от начала развития (эмбриональный день 0, ЭД0) до дня, предшествуя вылуплению. Основные методы воздействия включают инъекцию воздушных клеток, прямую микроинъекцию и вдыхание воздушных клеток (первоначально разработанные в нашей лаборатории), а доступные в настоящее время конечные точки включают сердечную функцию (электрокардиография), морфологию (гистологические оценки) и молекулярно-биологические оценки (иммуногистохимия, qRT-ПЦР, вестерн-блоттинг и т. Д.). Конечно, модель куриного эмбриона имеет свои ограничения, такие как ограниченная доступность антител. Тем не менее, поскольку все больше лабораторий начинают использовать эту модель, она может быть использована для внесения значительного вклада в изучение кардиотоксицитов развития.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Куриный эмбрион является классической моделью развития, которая используется уже более двухсот лет1. Модель куриного эмбриона имеет различные преимущества по сравнению с традиционными моделями. Прежде всего, еще более 70 лет назад нормальное развитие куриного эмбриона было очень четко проиллюстрировано в руководстве по постановке Гамбургера-Гамильтона2,в котором в общей сложности 46 стадий развития куриного эмбриона были определены с точным временем и морфологическими характеристиками, облегчающими обнаружение аномального развития. Кроме того, модель куриного эмбриона имеет и другие особенности, такие как относительно низкая стоимость и избыточность по количеству, относительно точный контроль дозы воздействия, независимая, закрытая система внутри оболочки и легкое манипулирование развивающимся эмбрионом, что гарантирует его потенциал для использования в качестве мощной токсикологической модели оценки.

При кардиотоксичности куриный эмбрион имеет четырехкамерное сердце, похожее на сердца млекопитающих, но с более толстыми стенками, что позволяет легче проводить морфологические оценки. Кроме того, куриный эмбрион допускает ингаляционное воздействие на развитие, что невозможно в моделях млекопитающих: на более поздней стадии развития куриный эмбрион перейдет от внутреннего дыхания к внешнему дыханию (получение кислорода через легкие); последний требует, чтобы эмбрион проник через воздушную клеточную мембрану клювом, и начал дышать воздухом3,делая воздушную клетку мини-ингаляционной камерой. Используя это явление, токсикологическое воздействие газовых загрязнителей на сердце (и другие органы) может быть оценено без необходимости использования специальных инструментов ингаляционной камеры.

В этой рукописи описано несколько методов оценки экспозиции/конечных точек, все из которых служат для того, чтобы сделать куриный эмбрион мощным инструментом в оценке кардиотоксичности развития после воздействия загрязнителей окружающей среды.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все описанные процедуры были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) Университета Циндао. В нашей лаборатории яйца инкубировали в двух инкубаторах. Яйца держали вертикально в инкубаторе и случайным образом размещали на полках. Условия инкубации яиц были следующими: температура инкубации начиналась с 37,9 °C и постепенно снижалась до 37,1 °C по мере инкубации; влажность началась с 50% и постепенно увеличивалась до 70%.

1. Методы воздействия

ПРИМЕЧАНИЕ: Воздействие загрязнителей окружающей среды на куриные эмбрионы может быть достигнуто несколькими способами. В этом разделе подробно описаны три обычно используемых метода.

  1. Впрыск воздушных клеток (Рисунок 1)
    ПРИМЕЧАНИЕ: Это классический метод воздействия на куриные эмбрионы4,5,6,подходящий для широкого спектра материалов, и может быть выполнен в очень широком временном окне, от начала развития (эмбриональный нулевой день, ED0) до дня, предшествующих вылуплению (ED20). В качестве транспортного средства используется подсолнечное масло. Предыдущие исследования показали, что между необработанными эмбрионами и эмбрионами, введенными подсолнечным маслом7,не наблюдалось существенных изменений в смертности, выводимости или массе тела.
    1. Подготовьте следующие необходимые реагенты/инструменты: 75% этанол, папиросная бумага, металлический зонд (может заменить любой острой металлической иглой/палочкой/шилом), расплавленный парафин, щетка, раствор йодида повидона, пипетка, наконечники пипеток, лампа для консервирования, дозирование смеси. Приготовить дозировку смеси с подсолнечным маслом (рекомендуется)4. Чтобы использовать другие разлучительные вещества, выполните контроль транспортного средства (по сравнению с необработанными эмбрионами).
    2. Очистите поверхность яиц раствором повидона йодида (коммерчески доступный раствор йодида повидона 1:5, разбавленный деионизированной водой) и окуните яичную скорлупу папиросной бумагой без очистки. Скрабирование разрушит защитный слой покрытия внешней стороны оболочки.
    3. Засвейте яйца в темной комнате и пометьте воздушную ячейку карандашом. Исключите яйца с трещинами на скорлупе. Исключите яйца с воздушными клетками сбоку вместо тупого кончика, так как они вряд ли вылупятся нормально.
    4. Продезинфицируйте область воздушной ячейки 75% этанолом, а затем просверлите небольшое отверстие в центре области воздушной ячейки металлическим зондом. Не втыкайте зонд глубоко в воздушную ячейку, иначе внутренняя мембрана может быть повреждена, вместо этого только разбейте оболочку кончиком зонда. Если отверстие недостаточно велико, чтобы поместиться в тонком наконечнике пипетки, снова разбейте оболочку в непосредственной близости от существующего отверстия, пока отверстие не будет достаточно большим, чтобы позволить вставить наконечник пипетки 10 мкл.
    5. Энергично вращаем дозировку смеси и сразу же вытягиваем раствор до кончика пипетки. Рекомендуемый объем инъекции составляет 1 мкл на 10 грамм яйцеклетки (например, 5 мкл для инъекционного объема для 50-граммового яйца), поскольку большие объемы инъекций могут создавать гипоксические или неоксические условия для развивающегося эмбриона. Рассчитайте концентрацию дозированного раствора для желаемой дозы мг/яйцо кг.
    6. Вставьте наконечник пипетки в отверстие, при этом наконечник касается внутренней мембраны. Медленно выталкивайте дозирующую смесь, подерживайте не менее десяти секунд (дайте вязкому маслу полностью дозироваться), а затем извлеките наконечник.
    7. Запечатайте отверстие щеткой и каплей расплавленного парафина. Будьте осторожны, чтобы не капать расплавленным парафином на внутреннюю мембрану.
    8. После запечатывания поместите яйца в инкубатор до тех пор, пока они не достигнут желаемой эмбриональной стадии. На уже развивающихся эмбрионах выполните весь процесс как можно скорее, чтобы предотвратить потенциальную потерю эмбрионов из-за низких температур окружающей среды.
  2. Микроинъекция (Рисунок 2)
    ПРИМЕЧАНИЕ: Это более прямой метод воздействия, приводящий к окончательному воздействию интересующего вещества, и особенно подходящий для соединений с короткой продолжительностью действия (например, лентивируса), поскольку классическая инъекция воздушных клеток требует времени для проникновения соединений во внутреннюю мембрану. Этот метод также может быть опробован, если удовлетворительные результаты не могут быть достигнуты путем инъекции воздушных клеток. Этот метод лучше всего подходит для ранних эмбрионов (до ED2), но также может быть выполнен на более старых эмбрионах (с более высоким риском потери эмбрионов).
    1. Подготовьте следующие необходимые реагенты/инструменты: 75% этанол, раствор йодида повидона, микроинжектор (5 мкл), металлический зонд (может заменить любой острой металлической иглой/палочкой/шилом), тонкие щипцы, лента. Приготовьте дозировку смеси со стерильным физиологическим раствором, который также служит в качестве контроля впрыска, не влияя существенно на выводимость. Обеспечьте стерильность физиологического раствора, так как зараженная инъекция резко увеличит смертность.
    2. Очистите яйца, как описано в 1.1.2.
    3. Подсвейте яйца, как описано в 1.1.3.
    4. Продезинфицируйте область воздушной ячейки 75% этанолом, а затем просверлите небольшое отверстие в центре области воздушной ячейки металлическим зондом. Не втыкайте зонд глубоко в воздушную ячейку, иначе внутренняя мембрана может быть повреждена, вместо этого только разбейте оболочку кончиком зонда. Затем используйте тонкие щипцы, чтобы осторожно увеличить отверстие до тех пор, пока диаметр не будет примерно 2 мм, что позволит визуально подтвердить внутреннюю мембрану.
    5. Загрузите раствор в микроинжектор (максимальный объем инъекции: 0,5 мкл/10 г яйца. (например, 2,5 мкл на яйцо 50 г) и осторожно ввести иглу через отверстие во внутреннюю мембрану примерно на 2-3 мм. Аккуратно дозируйте раствор и удалите иглу. Держите иглу как можно более перпендикулярной мембране.
    6. Запечатайте отверстие небольшим кусочком ленты. Полностью закройте отверстие, чтобы предотвратить обезвоживание эмбриона и гибель во время последующей инкубации. Тем не менее, избегайте кусочков ленты, которые слишком велики, чтобы предотвратить гипоксию.
    7. После запечатывания поместите яйца в инкубатор до тех пор, пока они не достигнут желаемой эмбриональной стадии. На уже развивающихся эмбрионах выполните весь процесс как можно скорее, чтобы предотвратить потенциальную потерю эмбриона из-за низкой температуры окружающей среды.
  3. Вдыхание воздушных клеток(Рисунок 3)
    ПРИМЕЧАНИЕ: Это новый метод вдыхания, используя преимущества воздушной клетки, из которой эмбрион курицы поздней стадии начнет дышать воздухом. Он подходит для воздействия газов или аэрозолей и может достигать очень ранних в жизни ингаляционных воздействий и заполнять легкие целевым газом / аэрозолем, когда они открываются впервые в жизни.
    1. Подготовьте следующие необходимые реагенты/инструменты: Мешок для отбора проб (мешок PVF, для хранения образца газа/аэрозоля перед воздействием), игла катетера, шприц, металлический зонд (может заменить любой острой металлической иглой/шилом должен работать), лента, вытяжной капюшон.
    2. Очистите яйца, как описано в 1.1.2, и подсвейте их, как описано в 1.1.3 (не обязательно маркировать воздушную клетку перед инкубацией), а затем инкубируйте яйца без обработки до ED17.
    3. Подсвейте яйца при ED17, чтобы отметить область воздушной ячейки.
    4. При ED18 выньте яйцо из инкубатора, продезинфицируйте область воздушной ячейки 75% этанолом, а затем тщательно просверлите два небольших отверстия с двух сторон воздушной ячейки. Один предназначен для впрыска газа/аэрозоля, другой - для выталкивания воздуха. Тщательно контролируйте размер отверстий, чтобы размера инъекционного отверстия было достаточно для введения иглы катетера, при этом диаметр выталкивного отверстия немного больше (примерно 1 мм).
    5. Осторожно вводят 10 мл целевого газа/аэрозоля из инъекционного отверстия шприцем, прикрепленным к игле катетера. Впрыскивайте воздух для ингаляционной контрольной группы, которая не должна иметь существенных отличий от отрицательной контрольной группы8. Приложите давление к игле катетера (при соответствующем давлении эластичная игла может быть прижата к оболочке), чтобы свести к минимуму утечку из инъекционного отверстия. После этого оба отверстия сразу же запечатайте скотчем и верните яйцо в инкубатор.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Эта процедура должна выполняться в вытяжном капюшоне для предотвращения вдыхания газа/аэрозоля оператором.
    6. Повторите описанную процедуру через один час, чтобы в дальнейшем убедиться, что вся воздушная ячейка заполнена целевым газом / аэрозолем (необязательно).
    7. Повторите описанную процедуру при ED19 еще раз (необязательно). Повторение экспозиции помогает обеспечить постоянное воздействие до вылупления. Запишите время вывода для приблизительной оценки продолжительности воздействия.
    8. После того, как желаемые экспозиции были выполнены и запечатаны, поместите яйца в инкубатор для вылупления. Минимизируйте время, которое яйцо проводит вне инкубатора, чтобы предотвратить смерть от низкой температуры окружающей среды.

2. Методы оценки конечных точек

ПРИМЕЧАНИЕ: После воздействия загрязняющих веществ, представляющих интерес для развивающегося эмбриона, можно оценить несколько параметров токсичности, включая кардиотоксичность. В этом разделе подробно описаны два часто используемых специфических метода.

  1. Электрокардиография (Рисунок 4)
    ПРИМЕЧАНИЕ: Нельзя делать неинвазивную электрокардиографию у птенцов из-за наличия перьев. Таким образом, подкожная имплантация электродов необходима, требующая анестезии. Доза, используемая в лаборатории, составляет 33 мг / кг пентобарбитала через внутрибрюшинную инъекцию (некоторым курам может потребоваться увеличение дозы до 50%). Этот метод приведет к стабильной электрокардиографии у более чем 90% животных, что позволит анализировать частоту сердечных сокращений.
    1. Приготовьте следующие необходимые реагенты/инструменты: 1% (10 мг/мл) раствор пентобарбитала в физиологическом растворе, шприце, электрическом балансе, нагревателе (при необходимости), электрокардиографическом приборе, прикрепленном (например, BL-420E+) с двухканальными металлическими игольчатыми электродами.
    2. Взвесьте цыплят с весами и рассчитайте необходимый объем раствора пентобарбитала и вводят цыплятам. Для курицы, которая весит 30 г, необходимо 0,1 мл раствора пентобарбитала. Убедитесь, что инъекция сделана с боковой стороны живота, так как желток расположен посередине и инъекция там может быть неэффективной.
    3. Подождите, пока введенные цыплята обезболиваются (держите курицу в руке, если шея не имеет напряжения и голову можно свободно размахивать, достаточно обезболивания). Поместите кур на операционный стол (обогреватели необходимы, если температура в помещении ниже 20 °C).
    4. Вводят два игольчатых электрода с двух сторон живота, подкожно. Убедитесь, что иглы не попадают в брюшную полость, немного приподняв кожу и вставив оттуда иглу. После введения осторожно толкайте иглу вперед, пока она не достигнет боковой стороны грудной полости. Следите за тем, чтобы игла не уходила глубоко в тело и не торчала из кожи.
    5. Сделайте измерения с помощью электрокардиографического прибора. Могут использоваться и другие подобные инструменты, способные к электрокардиографии.
    6. Если цыплят должны быть принесены в жертву, выполните эвтаназию после электрокардиографии, так как они уже находятся под наркозом. Если куры хотят выжить, поместите их обратно в клетки и согрейтесь до пробуждения. Возвращение их в инкубатор — еще один вариант.
  2. Гистоморфометрия (Рисунок 5)
    ПРИМЕЧАНИЕ: Разработан специальный метод оценки толщины стенки правого желудочка в поперечных отделах сердца. Морфологическая оценка размеров правого желудочка с помощью эхокардиографии не является на 100% точной из-за неправильной формы правого желудочка, и этот метод может служить хорошим дополнением к морфологическим оценкам для правого желудочка.
    1. Подготовьте следующие необходимые реагенты/инструменты: 4% фосфатный буферизованный формальдегид, острое лезвие, фосфатно-буферный физиологический раствор, бумажное полотенце, электрический баланс, небольшие ножницы, общие гистологические технологические агенты (градуированный этанол, ксилол, парафин).
    2. После того, как животные приносятся в жертву, используйте воду, чтобы намочить перья. Это необходимо для того, чтобы свести к минимуму потенциальное загрязнение из-за летящих перьев при открытии груди.
    3. Осторожно откройте грудную полость, не повредив сердце. Используйте небольшие ножницы, чтобы разрезать сосудистую клетку и аккуратно удалить сердце из грудной полости. Оставьте небольшой кусочек (примерно 1-2 мм) сосудистой области, прикрепленный к сердцу, так как это может быть удобно для последующего обращения с сердцем без повреждения сердца.
    4. После удаления промыть сердце холодным фосфатным буферным физиологическим раствором, чтобы удалить кровь и расслабить мышцы. Затем окуните высушите сердце на бумажное полотенце перед взвешиванием для точного считывания веса. Поместите сердце в фиксатор 10x объема (4% фосфатного буферизованный формальдегид) на 24 часа при комнатной температуре. Фиксированные ткани могут быть впоследствии обработаны в парафиновые блоки или храниться при 4 °C в течение многих лет (не рекомендуется, если планируется иммуногистохимия).
    5. Перед встраиванием разрезают ткани примерно на 60% длины сердца, отсчитывающего от вершины(рисунок 5А),для облегчения последующей обработки. Микротомное лезвие рекомендуется для быстрого и вертикального чистого среза. Для цыплят старше одного дня сделайте еще один разрез длиной примерно 25-30% от вершины для более легкого проникновения парафина и чтобы ткань поместились в тканевые кассеты.
    6. Обрабатывают ткани следующими условиями (корректируют по мере необходимости): 70% этанол в течение 1 ч, 80% этанол в течение 1 ч, 95% этанол в течение 1 ч х2, 100% этанол в течение 30 мин х2, ксилол в течение 5 мин х2, парафин (температура плавления 52-54 °С) в течение 1,5 ч, парафин (температура плавления 62-64 °С) в течение 1 ч, а затем встраивают ткани в смесь парафина 3:1 (температура плавления 62-64 °С) и парафина (температура плавления 52-54 °С).
    7. Срез ткани толщиной 6 мкм. Тщательно поддерживайте идентичные относительные положения поперечных сечений, подтверждая наличие и размер анатомического ориентира (септомаргинальной трабекулы) в правом желудочке. Подтвердите ориентир с умеренной длиной на каждом участке(рисунок 5B,стрелка).
    8. Сделайте две электронные линейки с помощью Logo programmer: Линейка 1 представляет собой прямую линию с 7 радиусными линиями измерения, прикрепленными к средней точке, с 22,5 ° между двумя соседними линиями измерения. Линейка 2 представляет собой всего две перпендикулярные линии в форме Т(рисунок 5B).
    9. Измерение с помощью двух программ: Adobe Photoshop и ImageJ.
      1. В Photoshop измените размер линейки 1 (БЕЗ изменения формы), чтобы поместить два конца линейки на два конца свободной правой желудочковой стенки, чтобы семь линий измерения на линейке 1 встречались с внутренней правой стенкой желудочка. Затем используйте линейку 2, чтобы сделать перпендикулярные измерения от внутренней до наружной стенки желудочка(рисунок 5B).
      2. Используйте ImageJ, чтобы сделать семь измерений для каждого сердца.
    10. В зависимости от конкретных потребностей, проанализируйте семь измерений или среднее значение для одной репрезентативной толщины стенки правого желудочка. Нормализуйте вес всего сердца при изменении удельной толщины стенки желудочков.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Результаты экспозиции
Инъекция воздушных клеток
Инъекция воздушных клеток может эффективно подвергать развивающиеся куриные эмбрионы воздействию различных агентов, которые впоследствии могут быть обнаружены в собранных образцах (сыворотка, ткань и т. д.) эмбрионов / птенцов цыплят. Вот пример, в котором перфтороктановая кислота (PFOA) вводилась в воздушную клетку, а концентрации PFOA в сыворотке крови затем определяли с помощью ультраэффективной жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии. Сывороточные концентрации...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Куриный эмбрион был классической моделью в исследованиях развития в течение 200 лет1. Наши методы, представленные в этой рукописи, были использованы при оценке нескольких загрязнителей окружающей среды, включая перфтороктановую кислоту, твердые частицы и дизельные выхлопные газы с успехом5,7,8,9,10,11,...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (грант No 91643203, 91543208, 81502835).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
4% фосфатный буферный формальдегидефиксаторBiosharp, Хэфэй, КитайREF: BL539A
75% этанолGuoyao, Шанхай, КитайCAS: 64-17-5
Биосигнальный монитор BL-420E+Taimeng, Чэнду, КитайBL-420E+
Лампа миражированияZhenwei, Дэчжоу, КитайWZ-001
Одноразовый шприцЧжиюй, Цзянсу, Китай
Инкубатор для яицКею, Дэчжоу, КитайKFX
Электрические весыOHAUS, Шанхай, КитайAR 224CN
Электротермальный инкубаторШэньсянь, Шанхай, КитайDHP-9022
Абсолютный этанолGuoyao,Шанхай, КитайCAS:64-17-5
Оплодотворенное куриное яйцоЦзяньуо, Цзинин, Китай Набор
окрашивания гематоксилина и эозинаBeyotime, Пекин, КитайC0105
Гистологический парафинАладдин, Шанхай, КитайP100928-500 гТемпература плавления 52 ~ 54 градуса; C
Гистологический парафинАладдин, Шанхай, КитайP100936-500 гТемпература плавления 62 ~ 64 градуса; С
катетер для внутривенных вливанийKDL, Чжэцзян, КитайКатетеры должны быть мягкими, пластиковыми.
LentivirusGenechem, Шанхай, КитайЛентивирусы были индивидуально разработаны/синтезированы компанией Genechem.
Набор для окрашивания трихрома Masson'sSolarbio, Пекин, КитайG1340
Металлический зондJinuotai, Пекин, Китай
Микроинъектор (5 мкл)Anting, Шанхай, Китай
МикроскопCAIKON, Шанхай, КитайXSP-500
MicrotomeLeica,Германия HistoCore BIOCUT
Microtome лезвиеLeica, ГерманияLeica 819
Пентобарбитуал натрияYitai Technology Co. Ltd.,  Ухань, КитайCAS: 57-33-0
Pipetter(10ul)Sartorius, Германия
Повидон йодидLongyuquan, Тайан, Китай
НожницыAnqisheng,Сучжоу, Китай
Стерильный физиологический растворКелунь,Чэнду, Китай Подсолнечное
маслоMighty Jiage, Цзянсу, КитайЛюбое коммерческое подсолнечное масло для употребления в пищу должно работать
TapeM& G, Шанхай, Китай
Мешок Tedlar PVF (5 л)Делин, Далянь, Китай
Вихревой миксерSCILOGEX, Роки Хилл, Коннектикут, СШАMX-F
XyleneGuoyao, Шанхай, КитайCAS:1330-20-7
для

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kain, K. H., et al. The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research. Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).
  2. Menna, T. M., Mortola, J. P. Effects of posture on the respiratory mechanics of the chick embryo. Journal of Experimental Zoology. 293 (5), 450-455 (2002).
  3. Hamburger, V., Hamilton, H. L. A series of normal stages in the development of the chick embryo. Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).
  4. Yamamoto, F. Y., Neto, F. F., Freitas, P. F., Oliveira Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. Cadmium effects on early development of chick embryos. Environmental Toxicology and Pharmacology. 34 (2), 548-555 (2012).
  5. Lv, N., et al. The roles of bone morphogenetic protein 2 in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection. Toxicology and Applied Pharmacology. 352, 68-76 (2018).
  6. Kmecick, M., Vieira da Costa, M. C., Oliveria Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. Morphological evidence of neurotoxic effects in chicken embryos after exposure to perfluorooctanoic acid (PFOA) and inorganic cadmium. Toxicology. 4227, 152286(2019).
  7. Jiang, Q., Lust, R. M., Strynar, M. J., Dagnino, S., DeWitt, J. C. Perflurooctanoic acid induces developmental cardiotoxicity in chicken embryos and hatchlings. Toxicology. 293 (1-3), 97-106 (2012).
  8. Jiang, Q., et al. In ovo very early-in-life exposure to diesel exhaust induced cardiopulmonary toxicity in a hatchling chick model. Environmental Pollution. 264, 114718(2020).
  9. Jiang, Q., Lust, R. M., DeWitt, J. C. Perfluorooctanoic acid induced-developmental cardiotoxicity: are peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPARalpha) and bone morphorgenic protein 2 (BMP2) pathways involved. Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 76 (11), 635-650 (2013).
  10. Jiang, Q., et al. Changes in the levels of l-carnitine, acetyl-l-carnitine and propionyl-l-carnitine are involved in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity in chicken embryo. Environmental Toxicology and Pharmacology. 48, 116-124 (2016).
  11. Zhao, M., et al. The role of PPAR alpha in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection-Results of in ovo gene silencing. Environmental Toxicology and Pharmacology. 56, 136-144 (2017).
  12. Jiang, Q., et al. Particulate Matter 2.5 Induced Developmental Cardiotoxicity in Chicken Embryo and Hatchling. Front Pharmacol. 11, 841(2020).
  13. Molina, E. D., et al. Effects of air cell injection of perfluorooctane sulfonate before incubation on development of the white leghorn chicken (Gallus domesticus) embryo. Environmental Toxicology and Chemistry. 25 (1), 227-232 (2006).
  14. Crump, D., Chiu, S., Williams, K. L. Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl) sulfone decreases embryonic viability and alters hepatic mRNA expression at two distinct developmental stages in chicken embryos exposed via egg injection. Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (2), 530-537 (2018).
  15. Franci, C. D., et al. Potency of polycyclic aromatic hydrocarbons in chicken and Japanese quail embryos. Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (6), 1556-1564 (2018).
  16. Rand, M. D., et al. Developmental exposure to methylmercury and resultant muscle mercury accumulation and adult motor deficits in mice. Neurotoxicology. 81, 1-10 (2020).
  17. Tanaka, T., Suzuki, T., Inomata, A., Moriyasu, T. Combined effects of maternal exposure to fungicides on behavioral development in F1 -generation mice: 2. Fixed-dose study of thiabendazole. Birth Defects Research. , (2020).
  18. Kofman, O., Lan, A., Raykin, E., Zega, K., Brodski, C. Developmental and social deficits and enhanced sensitivity to prenatal chlorpyrifos in PON1-/- mouse pups and adults. PLoS One. 15 (9), 0239738(2020).
  19. Kischel, A., Audouard, C., Fawal, M. A., Davy, A. Ephrin-B2 paces neuronal production in the developing neocortex. BMC Developmental Biology. 20 (1), 12(2020).
  20. Okolo, F., Zhang, G., Rhodes, J., Gittes, G. K., Potoka, D. A. Intra-Amniotic Sildenafil Treatment Promotes Lung Growth and Attenuates Vascular Remodeling in an Experimental Model of Congenital Diaphragmatic Hernia. Fetal Diagnosis and Therapy. , 1-13 (2020).
  21. Vyslouzil, J., et al. Subchronic continuous inhalation exposure to zinc oxide nanoparticles induces pulmonary cell response in mice. Journal of Trace Elements in Medicine and Biology. 61, 126511(2020).
  22. Wahle, T., et al. Evaluation of neurological effects of cerium dioxide nanoparticles doped with different amounts of zirconium following inhalation exposure in mouse models of Alzheimer's and vascular disease. Neurochemistry International. 138, 104755(2020).
  23. Tanabe, K. Three-Dimensional Echocardiography- Role in Clinical Practice and Future Directions. Circ J. 84 (7), 1047-1054 (2020).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Chicken Embryo ModelDevelopmental CardiotoxicityEnvironmental PollutantsAir Cell InjectionMicroinjection MethodAir Cell InfusionCardiac Function AssessmentElectrocardiography AnalysisHistological AssessmentMolecular Assessment

Похожие статьи