Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Модифицированная хирургическая модель ишемии задних конечностейу мышей с использованием миниатюрного разреза

3.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/62402

⸱

13 мая 2021 г.

 ,  ,  ,  ,  , 

В этой статье

Краткое содержание

В данной статье демонстрируется эффективный хирургический подход к установлению острой ишемии у мышей с небольшим разрезом. Этот подход может применяться большинством исследовательских групп без каких-либо лабораторных обновлений.

Аннотация

Целью данного исследования является внедрение и оценка модифицированного хирургического подхода к индуцированию острой ишемии у мышей, который может быть реализован в большинстве лабораторий на животных. В отличие от традиционного подхода к двойному перевязке бедренной артерии (DLFA), был сделан меньший разрез на правой паховой области, чтобы обнажить проксимальную бедренную артерию (FA) для выполнения DLFA. Затем, используя шов 7-0, разрез был перетащен в область колена, чтобы обнажить дистальную ФА. Магнитно-резонансная томография (МРТ) на двусторонних задних конечностях использовалась для обнаружения окклюзии ФА после операции. Через 0, 1, 3, 5 и 7 дней после операции функциональное восстановление задних конечностей было визуально оценено и оценено по шкале Тарлова. Гистологическая оценка проводилась после эвтаназии животных через 7 дней после DLFA. Процедуры были успешно выполнены на правой ноге у десяти мышей ApoE-/-, и ни одна мышь не умерла во время последующего наблюдения. Размеры разреза у всех 10 мышей были менее 5 мм (4,2 ± 0,63 мм). Результаты МРТ показали, что кровоток ФА в ишемической стороне был явно заблокирован. Результаты по шкале Тарлова показали, что функция задних конечностей значительно снизилась после процедуры и медленно восстанавливалась в течение следующих 7 дней. Гистологическая оценка показала значительную воспалительную реакцию на ишемической стороне и снижение плотности микрососудистости в ишемической задней конечности. В заключение, это исследование вводит модифицированную технику с использованием миниатюрного разреза для выполнения ишемии задних конечностей (HLI) с использованием DLFA.

Введение

Существует неудовлетворенная потребность в доклинических животных моделях для исследований сосудистых заболеваний, таких как заболевания периферических артерий (PAD). Несмотря на передовые разработки в области диагностики и лечения, в 2018 году было зарегистрировано более 200 миллионов пациентов сPAD1,и их число постоянно увеличивается. Хотя было описано несколько новых терапевтическихподходов2,3,4,5,6,7, успешный перевод этих терапевтических модаль....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Все экспериментальные процедуры были выполнены в соответствии с руководящими принципами ЕС EC 2010/63/EU и были одобрены местным законодательством Германии (35-9185.81/G[1]239/18). Десять самцов мышей ApoE-/- с фоном C57BL/6J, весом 29,6-38,0 г, содержались в 12-часовом светло-темном цикле и питались западной диетой (1,25% холестерина и 21% жира) и водой ad libitum в течение 12 недель с 8-недельного возраста. HLI проводили на 20-недельных мышах, как описано ниже.

1. Индукция HLI у мышей ApoE-/-

  1. Подготовьте необходимое оборудование и инструменты для операции (см. Таблицу материалов....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Характеристики мышей ApoE-/-
Операции DLFA были успешно выполнены на 10 мышах для создания модели HLI, и ни одна из мышей не умерла после процедуры. Чтобы проследить за изменениями массы тела, мышей взвешивали перед процедурой DLFA (Pre-DLFA) и через 7 дней после операции DLFA (Post-DLFA). Вес до DLFA варьировался от 29,6 до 38,0 г (в среднем 34,74 ± 2,47 г), а вес после DLFA варьировался от 26,5 до 34,1 г (в среднем 30,77 ± 2,15 г), которые были значител.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом исследовании сообщается о модифицированном, упрощенном и хирургически эффективном подходе к созданию модели HLI у мышей ApoE-/- с использованием двойного лигирования в проксимальных и дистальных областях ФА через разрез 3-4 мм без каких-либо необходимых лабораторных обновлений. Основной характеристикой этого метода является меньший размер разреза по сравнению сранеесообщенными исследованиями, описывающими мышиные модели HLI8,9,

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что содержание статьи было составлено в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Авторы благодарят Викторию Скуде, Александра Шлунда и Феликса Хёрнера за отличную техническую поддержку.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
10x Фосфатный буфер физиологического раствораRoth9143.1Используется для окрашивания гематоксилином и эозином и иммуногистохимического окрашивания
30% H2O2Roth9681.2Используется для иммуногистохимического окрашивания
6-0 рассасывающихся нитейPROLENE8776HИспользуется для наложения швов
на кожу 6-0 абсорбируемого шваPROLENEEP8706Используется в хирургии
7-0 рассасывающиеся шовные материалыPROLENEH8021EИспользуется для лигирования артерии
7-0 Абсорбируемый шовPROLENEEP8755Используется в хирургии
Уксусная кислотаRoth6755.1Используется для окрашивания гематоксилина и эозина
Albumin Fraktion VRoth8076.2Используется для иммуногистохимического окрашивания
автоклаваSystec GmbHSystec VX-150Используется для стерилизации хирургических инструментов
Axio vert A1 микроскопCarl ZeissZEISS Axio Vert.A1Используется для просмотра и получения снимков с гематоксилина и эозина окрашивания и иммуногистохимического окрашивания
Bruker BioSpec 94/20AVIII Bruker Biospin MRI GmbHN/AСканирование закупорки бедренной артерии
Buprenovet Sine 0,3 мг/млBayer AG2542 (WDT)Используется в послеоперационном обезболивании. Доза - 0,1 мг/кг массы тела каждые 8 часов в течение 48 ч после операции
антитело CD31Abcamab28364Используется для иммуногистохимии окрашивания
Эозина Y раствор 0,5 % в водеRothX883.1Используется для окрашивания гематоксилина и эозина
Эпитоп Извлечение раствора pH 6Leica Biosystems6046945Используется для иммуногистохимического окрашивания
Этанол ≥ 99,5 %Roth5054.1Используется для окрашивания гематоксилина и эозина и иммуногистохимического окрашивания
ФентанилCayman Chemical437-38-7Используется для анестезии
Тонкоточечные щипцыMedixplus93-4505SИспользуется для отделения артерии от нерва и вены
Стерилизатор стеклянных шариковSimon KellerType 250Используется для стерилизации хирургических инструментов
Graefe iris щипцы изогнутыеVUBUVUBU-02-72207Используются для тупого разделения кожи и подкожной клетчатки
Крем для удаления волос, Veet (с алоэ вера)Reckitt Benckiser108972Удаление волос с задних конечностей мышей
Нагревательная пластинаSTÖ RK-TRONIC7042092Поддерживайте сатвертальную температуру мышей
ГематоксилинRothT865.2Используется для окрашивания гематоксилина и эозина и иммуногистохимического окрашивания
хирургический микроскоп LeicaM651Увеличьте поле зрения для облегчения операции
Жидкая DAB+субстратная хромогенная системаDakoK3468Используется для иммуногистохимического окрашивания
Самцы мышей ApoE-/-River LaboratoriesN/AИспользуется для установления модели заболевания периферических артерий мышей
MedetomidineCayman Chemical128366-50-7Используется для анестезии
Micro Needle HolderBlack & Черный хирургическийB3B-18-8Удержание иглы
Щипцы для завязывания микрошвовLife Saver Surgical IndustriesPS-MSF-145Используется для помощи в завязывании узлов во время операции
MicrotomeBiobaseBk-MT268mИспользуется для разрезания тканей
МидазоламРатиофарм44856.01.00Используется для анестезии
МР-совместимая система мониторинга и гейтирования мелких животных Модель 1025SA InstrumentsН/Амониторинг жизненных показателей животного во время МРТ
Octeniderm farblosSchü lke & Mayr GmbH180212используется для дезинфекции кожи
Мазь для глаз и носаBayer AG1578675Сохраняет глаза влажными под анестезией
ПараформальдегидRoth0335.1Используется для фиксации тканей
ПентобарбиталНембутал76-74-4Используется для анестезии
Физиологический растворDeltaSelect1299.99.99Используется для ножницы для анестезии
с пружинной ручкой с тонкими, острыми кончикамиBlack & Черный хирургическийB66167Используется для разрезания артерии
Ножницы SuperCut Black& Черный хирургическийB55992Используется для разреза кожи
Triton X-100Roth9002-93-1Используется для иммуногистохимии окрашивания
западной диеты, 1,25% холестеринаssniff Spezialdiä ten GmbHE15723-34Диета для мышей
XyleneRoth4436.3Используется для окрашивания гематоксилина и эозина и иммуногистохимического окрашивания
Charles

Ссылки

  1. Shu, J., Santulli, G. Update on peripheral artery disease: Epidemiology and evidence-based facts. Atherosclerosis. 275, 379-381 (2018).
  2. Tateishi-Yuyama, E., et al. Therapeutic ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Лигирование бедренной артериимыши с нокаутом ApoEхирургическая операция с мини-разрезомметод двойного лигированиямагнитно-резонансная томографияоценка по шкале Тарловамикрососудистая плотностьишемически-реперфузионное повреждениегистологическая оценка