Method Article

Использование базового покрытия и минископа Preanchored с объективом для исследования переходных процессов кальция на мышах

DOI:

10.3791/62611

⸱

June 5th, 2021

 ,  ,  , 
1Department of Veterinary Medicine, School of Veterinary Medicine, National Taiwan University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Усадка зубного цемента во время отверждения смещает опорную плиту. Этот протокол минимизирует проблему, создавая первоначальный фундамент из зубного цемента, который оставляет место для цементирования опорной плиты. Несколько недель спустя опорная плита может быть зацементирована в положении на этом каркасе с использованием небольшого количества нового цемента, тем самым уменьшая усадку.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Нейробиологи используют миниатюрные микроскопы (минископы) для наблюдения активности нейронов у свободно ведущих себя животных. Команда Miniscope Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе (UCLA) предоставляет открытые ресурсы для исследователей для создания минископов самостоятельно. Минископ V3 UCLA является одним из самых популярных минископов с открытым исходным кодом, используемых в настоящее время. Он позволяет визуализировать флуоресцентные переходные процессы, испускаемые генетически модифицированными нейронами, через объективную линзу, имплантированную в поверхностную кору (система с одной линзой), или в глубокие области мозга через комбинацию релейной линзы, имплантированной в глубокий мозг, и объектива, который предварительно отбирается в минископе для наблюдения за ретранслируемым изображением (двухлинзовая система). Даже в оптимальных условиях (когда нейроны выражают показатели флуоресценции и правильно имплантирована релейная линза) изменение объема зубного цемента между опорной пластиной и его прикреплением к черепу при отверждении цемента может вызвать смещение с измененным расстоянием между объективом и релейными линзами, что приводит к ухудшению качества изображения. Опорная плита - это пластина, которая помогает установить минископ на череп и фиксирует рабочее расстояние между объективом и релейными линзами. Таким образом, изменения в объеме зубного цемента вокруг опорной пластины изменяют расстояние между линзами. Настоящий протокол направлен на минимизацию проблемы смещения, вызванной изменениями объема зубного цемента. Протокол уменьшает перекос, создавая первоначальный фундамент из зубного цемента во время имплантации релейной линзы. Время выздоровления после имплантации достаточно для того, чтобы фундамент зубного цемента полностью отверзил опорную плиту, поэтому опорную плиту можно цементировать на этом каркасе, используя как можно меньше нового цемента. В настоящей статье мы описываем стратегии нанесения базовых покрытий у мышей, чтобы обеспечить визуализацию нейронной активности с помощью объектива, закрепленного в минископе.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Флуоресцентные репортеры активности идеально подходят для визуализации активности нейронов, поскольку они чувствительны и имеют большие динамические диапазоны 1,2,3. Поэтому все большее число экспериментов используют флуоресцентную микроскопию для непосредственного наблюдения активности нейронов 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, выполненные в этом исследовании, были одобрены Национальным комитетом по уходу и использованию животных Тайваньского университета (номер одобрения: NTU-109-EL-00029 и NTU-108-EL-00158).

1. Оценка изменения объема зубного цемента

ПРИМЕЧАНИЕ: Изменения в объеме зубного цемента происходят в процессе отверждения. Проверьте изменения объема зубного цемента перед имплантацией и нанесением фундамента. Исследователи могут протестировать любую марку зубного цемента и использовать бренд с наименьшим изменением объема для цементирования опорной плиты. Пример показан на

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Оценка изменения объема зубного цемента
Поскольку объем зубного цемента изменяется в процессе отверждения, это может значительно повлиять на качество изображения, учитывая, что рабочее расстояние линзы GRIN составляет примерно от 50 до 350 мкм 4,8. Поэтому в этом случае были протестированы два коммерчески доступных зубных цемента, Tempron и Tokuso, перед процедурой имплантации и нанесения фундамента (рисунок 5). С.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В настоящем докладе описывается подробный экспериментальный протокол для исследователей, использующих двухлинзовую систему минископа UCLA. Инструменты, разработанные в нашем протоколе, относительно доступны для любой лаборатории, которая хочет попробовать визуализацию кальция in vivo . Некоторые протоколы, такие как вирусная инъекция, имплантация хрусталика, фиктивное покрытие основания и базовое покрытие, также могут быть использованы для других версий системы минископа для повышения успешности визуализации кал.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это не отраслевое исследование. Авторы сообщают об отсутствии финансовых конфликтов интересов.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана Министерством науки и технологий Тайваня (108-2320-B-002-074, 109-2320-B-002-023-MY2).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Сверло 0,7 мм #19008-07Инструменты для тонкой науки; СШАдля хирургии
0.1– 10 μ l наконечники для пипеток104-Q; QSPFisher Scientific; Сингапурдля испытаний стоматологического цемента
20 Г IV катакатора#SR-OX2032CATerumo Corporation; Токио, Япониядля хирургии
27 G иглаAGANI, AN*2713RTerumo Corporation; Токио, Япониядля хирургии
AAV9-syn-jGCaMP7s-WPRE#104487-AAV9; 1,5*10^13Вирусный препарат Addgene; Массачусетс, СШАдля введения вирусного
Атропина сульфатАстарт; Синьчжу, Тайваньдля хирургии / фиктивного покрытия
основания / основания Базовая пластинаV3http://miniscope.orgдля фиктивного покрытия
/ основания BLU TACK#30840350Bostik; Челси, Массачусетс, СШАМногоразовая клейкая глина; для хирургии/фиктивной базы/базирования
Bone Rongeur Friedman13 смDiener; Туттлинген, Германияза базовое покрытие
БупренорфинINDIVIOR; Великобританиядля хирургии
КарпрофенРимадилЗоэтис; Экстон, Пенсильванияанальгезия
CeftazidimeTaiwan Biotech; Тайваньпредотвращает заражение
Сбор данных Печатная плата для минископа Калифорнийского университета в Лос-Анджелесеприобретена на https://www.labmaker.org/collections/neuroscience/products/data-aquistion-system-daqгода для нанесения базового
Набор стоматологического цементаTempronGC Corp; Токио, Япониядля тестирования стоматологического цемента
Набор стоматологического цементаTokuso CurefastTokuyama Dental Corp.; Токио, Япониядля тестирования стоматологического цемента/хирургии/фиктивного базирования/базирования
Dual Lab Standard с адаптерами для мышей и крыс#51673Stoelting Co; Иллинойс, СШАдля хирургии / фиктивного базирования/базирования
мазиDuratear Alcon; Женева, Швейцариядля хирургии/фиктивного базирования/базирования
ибупрофенаYungShin; Тайваньскаяанальгезия
ИзофлуранПанион и BF Biotech INC.; Таоюань, Тайваньдля хирургии/фиктивного базирования/базирования
InscopixnVista SystemInscopix; Пало-Альто, Калифорниядля сравнения с V3 UCLA Miniscope
KetaminePfizer; Нью-Йорк, Нью-Йоркдля эвтаназии
Нормальный физиологический раствордля хирургии
Микро бульдожьи зажимы#12.102.04Dimedo; Туттлинген, Германиядля имплантации линз
Microliter Microsyringes, 2.0 &; L, 25 колея#88400Гамильтон; Бонадуз, Швейцариядля вирусного литья под давлением
силиконового каучукаZA22 ThixoZhermack; Badia Polesine, Италиядля фиктивной основы
объектива с градиентным индексом объектива (GRIN) lens#64519Edmund Optics; Нью-Джерси, СШАза фиктивное покрытие/основание
Parafilm#PM996Bemis; Нина, СШАдля фиктивной основы
Портативная аспирация#DF-750Doctor's Friend Medical Instrument Co., Inc., Тайчжун, Тайваньдля хирургии
Релейная линзаGRIN #1050-002177Inscopix; Пало-Альто, Калифорния, СШАдля фиктивного базирования/базирования
Анкерные винты из нержавеющей стали диаметром1,00 мм, общей длиной 3,00 ммдля хирургии
Стереомикроскоп#SL720Sage Vison; Город Нью-Тайбэй, Тайваньдля хирургии / фиктивного покрытия основания / основания
Stereotaxic apparatus#51673Stoelting; Иллинойс, СШАдля хирургии / фиктивного покрытия основания / базового
покрытия УФ-отверждение Клей# 3321Loctite; Dü Ссельдорф, Германиядля тестирования стоматологического цемента
V3 UCLA Miniscopeприобретен на https://www.labmaker.org/products/miniscope-complete-set-of-componentsхирургии/фиктивного базирования/базирования
XylazineX1126Sigma-Aldrich; Сент-Луис, Миссуридля эвтаназии
Ксилокаиновый насос спрей 10%AstraZeneca; Sö dertä lje, Швециядля хирургии
препарата основания покрытия для

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Tian, L., Hires, S. A., Looger, L. L. Imaging neuronal activity with genetically encoded calcium indicators. Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (6), 647-656 (2012).
  2. Grienberger, C., Konnerth, A. Imaging calcium in neurons. Neuron. 73 (5), 862-885 (2012).
  3. Dana, H., et a....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Miniscope ImagingCalcium TransientsBaseplating MiceObjective LensRelay Lens ImplantationDental CementFluorescence SignalsStereotaxic SurgeryNeural Activity ImagingViral Vector Injection

Related Articles