Слюнные железы были предложены в качестве тканевого целевого участка для генной терапии, особенно в области вакцинации путем переноса генов. Мы демонстрируем доставку генов в модели нечеловеческих приматов, использующей ретроградную инфузию прилежащей артерии.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Ретроградная инфузия рядовидной железы через проток Стенсена у нечеловеческого примата для векторной доставки генов
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Слюнные железы являются привлекательной тканевой мишенью для генной терапии с многообещающими результатами, уже приводящими к испытаниям на людях. Они по своей природе способны секретить белки в кровоток и легко доступны, что делает их потенциально превосходными тканевыми участками для производства замещающих гормонов или вакцинации путем переноса генов. Предлагаемые методы доставки генов включают чрескожную инъекцию и ретроградную инфузию через слюнные протоки. Мы демонстрируем, как выполнять ретроградную инфузию слюнных желез (RSGI) у нечеловеческих приматов. Мы описываем важные анатомические ориентиры, включая идентификацию сосочка рядового, атравматический метод каннюляции и герметизации протока Стенсена с использованием основных стоматологических инструментов, полиэтиленовых трубок и цианоакрилата, а также соответствующую скорость инфузии. Хотя это наименее травматичный метод доставки, метод по-прежнему ограничен объемом, который может быть доставлен (<0,5 мл) и возможностью травмирования протока и железы. Мы демонстрируем с помощью рентгеноскопии, что инфузия может быть полностью доставлена в железу, и дополнительно демонстрируем иммуногистохимией трансдукцию типичного вектора и экспрессию доставленного гена.
Введение
В то время как слюнные железы хорошо известны своей экзокринной выработкой слюны, исследователи давно признали их способность секретировать белки непосредственно в кровоток1,что делает их потенциальной мишенью для генной терапии для системного введения, такого как заместительные гормоны или выработка антител. Фактически, слюнные железы предлагают несколько преимуществ по сравнению с другими тканевыми мишенями, такими как врожденная способность производить белки для секреции (недостаток свойств мышц), тяжелая инкапсуляция, которая может ограничить диффузию векторов, и хорошо дифференцированная ткань, обеспечивающая стабильность для неинтегрируем....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все процедуры были выполнены в Медицинской школе Уэйк Форест Кларксон Кампус для исследований на животных. Были проведены консультации с Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) по этическим соображениям, и подробная информация о процедурах была представлена на рассмотрение. Wake Forest IACUC одобрил наш протокол исследования, и все процедуры были выполнены в соответствии с утвержденным протоколом IACUC #A17-147.
1. Подготовка инфузионного устройства
- Разрежьте полиэтиленовую трубку размера 10 (PET10) на 25 см длиной с помощью ножниц.
- Марки PET10 на 1 см и 2 см с одного конца с помощью ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Успешная процедура, трансдукция и транскрипция
На рисунке 1 показан примыкающий к2-му моляру на задней верхней щеке. На изображении также показано правильное размещение скобы для рта, один резиновый конец на твердом небе, а другой резиновый конец на ипсилатеральном клыке. На рисунке 2 показано изображение, взятое после успешного каннуляции сосочкового сосачка на отметке 2 см на PET10. На рисунке 3 пока.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Здесь мы описываем протокол ретроградной инфузии в приушную железу через проток Стенсена. Описанная методология предлагает руководство, которое потенциально может быть использовано исследователями, изучающими полезность слюнной ткани в качестве места для генной терапии и других применений.
Существует несколько критических шагов для обеспечения успеха процедуры. В первую очередь, все процедурные шаги должны быть выполнены аккуратно. Принудительное крепление рта может привести к подвывиху нижней.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Авторы хотят поблагодарить г-на Кэгни Джентри за его аудиовизуальную поддержку в съемках процедуры. Мы также хотим поблагодарить медицинский центр Hefner VA за академическую поддержку в реализации этого проекта.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 500 &микро; L Шприцы U100 с иглами 30-го калибра | Becton Dickinson | 328466 | фиксированной иглой для меньшего количества отходов |
| Клей (например, Ethicon Dermabond) | Различные | цианоакрилатные клеи для герметизации и удержания трубки в протоке во время инфузии. | |
| Атропин инъекционный раствор | Patterson Veterinary | 07 869-6061 | Атропин инъек. 0,54 мг/мл |
| BD Ультратонкие инсулиновые шприцы 30 г | Walmart | N/A | Avilable в размерах 0,5 мл и 1,0 мл. |
| Цианоакрилат (медицинский клей) | Ethicon | DNX12 | Dermabond местный клей для кожи |
| Стоматологические петли со светом | Амазонки (DDP) | B012M3IV80 | Используется для улучшения визуализации сосочка протока Стенсена |
| Детский слезный расширитель | Surgipro | SPOI-137 | |
| Раствор кетамина для инъекций | Patterson Veterinary | 07-803-6637 | Кетазет для инъекций 100 мг/мл |
| Слезный расширитель | Surgipro | SPOI-132 | Используется для диалирования протока стензена. |
| Мидазолам раствор для инъекций | Patterson Veterinary | 07 890-6698 | Мидазолам инъек. 5 мг/мл |
| Пара ножниц | Amazon (DDP) | Н/Д | Используется для разрезания трубки PET10 |
| Полиэтиленовая трубка (PE-10) | Scientific Comodities, Inc | BB31695-PE/1 | Трубка, соединяющая шприц 30G и вставляемая в воздуховод. |
| Q-tips | Walmart | N/A | Используется для нанесения цианоакрилата на щеку |
| Полиэтиленовая трубка размера 10 (PET 10) | Scientific Commodities | BB31695-PE/1 | полиэтиленовая трубка низкой плотности |
| Открыватель рта для мелких животных | Amazon (DDP) | B01F3LVJXC | Используется для удержания рта животного открытым. |
| Пинцет | Amazon (DDP) | N/A | Используется для вставки трубки PET10 в проток Стенсона |
| Хлорид цинка | Sigma-Aldrich | 7646-86-7 | Включен в плазмидные инфузии ДНК |
Ссылки
- Isenman, L., Liebow, C., Rothman, S. The secretion of mammalian digestive enzymes by exocrine glands. The American Journal of Physiology. 276, 223-232 (1999).
- Perez, P., et al. Salivary epithelial cell....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
