Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Определение токсичности УФ-излучения и химических веществ на первичных и иммортализированных эпителиальных клетках роговицы человека

2.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/62675

⸱

22 июля 2021 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Centre for Ocular Research & Education (CORE), School of Optometry & Vision Science, University of Waterloo, 2Centre for Eye and Vision Research (CEVR)

В этой статье

Краткое содержание

В этой статье описываются процедуры, используемые для оценки токсичности УФ-излучения и химических токсинов на первичной и иммортализированной клеточной линии.

Аннотация

В данной статье описаны методы измерения токсичности ультрафиолетового (УФ) излучения и глазных токсинов на первичных (pHCEC) и иммортализированных (iHCEC) культурах эпителиальных клеток роговицы человека. Клетки подвергались воздействию ультрафиолетового излучения и токсических доз хлорида бензалкония (BAK), перекиси водорода (H2O2) и додецилсульфата натрия (SDS). Метаболическую активность измеряли с помощью метаболического анализа. Высвобождение воспалительных цитокинов измеряли с помощью мультиплексного интерлейкина (IL)-1β, IL-6, IL-8 и анализа фактора некроза опухоли-альфа (TNF-α), а жизнеспособность клеток оценивали с использованием флуоресцентных красителей.

Повреждающее действие ультрафиолета на метаболическую активность клеток и высвобождение цитокинов происходило через 5 минут воздействия ультрафиолета для iHCEC и 20 минут для pHCEC. Аналогичное процентное снижение метаболической активности iHCEC и pHCEC произошло после воздействия BAK, H2O2или SDS, и наиболее значительные изменения в высвобождении цитокинов произошли для IL-6 и IL-8. Микроскопия флуоресцентно окрашенных клеток, подвергшихся воздействию iHCEC и pHCEC BAK, показала гибель клеток при воздействии BAK 0,005%, хотя степень окрашивания этидия была выше в iHCEC, чем pHCEC. Используя несколько методов оценки токсических эффектов с помощью микроскопии, оценки метаболической активности и продукции цитокинов, токсичность ультрафиолетового излучения и химических токсинов может быть определена как для первичных, так и для иммортализированных клеточных линий.

Введение

Токсикологические исследования in vitro проводятся для прогнозирования токсического воздействия химических веществ и других агентов, которые могут вызвать повреждение клеток. При оценке токсичности для роговицы эпителиальные клетки роговицы человека (ГЦС) использовались в моделях для оценки этих эффектов 1,2,3,4. Эти модели обычно оценивают физиологические эффекты, такие как изменения метаболической активности клетки, пролиферация клеток и другие функции клеток, такие как производство и высвобождение воспалительных цитокинов. Для этих токсикологических исследований были отобраны клетки из различных источников для оценки повреждающего воздействия химических веществ и ультрафиолетового излучения на HCECs 2,3. Линии pHCEC доступны у компаний, которые предоставляют эти клетки из донорских тканей взрослых. Первичные клетки можно обработать диспазой и аккуратно соскоблить роговицу для посева5. Затем клетки проверяют на наличие вирусов и загрязнения, а затем отправляют криоконсервированными в 10% диметилсульфоксид.

Преимущество первичных клеточных линий заключается в том, что клетки генетически идентичны клеткам донора. Это идеально, так как модель in vitro должна максимально имитировать ткань in vivo . Недостатком первичных клеточных линий является то, что они имеют ограниченное количество клеточных делений или пассажей6. Ограниченное количество доступных клеток ограничивает количество экспериментов, которые могут быть проведены с одной первичной культурой, увеличивая стоимость экспериментов.

Иммортализированные клеточные линии также использовались в моделях токсичности клеточных культур. Однако, в отличие от первичной клеточной линии, полученной из ткани in vivo, иммортализированная клеточная линия была генетически изменена. Иммортализированные клетки создаются путем включения генов вируса в ДНК первичных клеток 6,7,8. Клетки с успешным включением вирусных генов отбираются для иммортализированной клеточной линии. Преимущество иммортализации заключается в том, что она допускает неограниченную быструю пролиферацию, предоставляя неограниченное количество клеток для проведения нескольких экспериментов с использованием одной и той же клеточной линии. Это обеспечивает согласованность между экспериментами и снижает стоимость.

В дополнение к изменениям в генах, которые ограничивали пролиферацию клеток, также могут происходить изменения в экспрессии генов критической функциональности9. Таким образом, недостатком использования иммортализированных клеток является то, что они могут больше не представлять исходные клетки in vivo с точки зрения их реакции на различные внешние раздражители10. Сравнения включали наблюдение токсического воздействия химических веществ на первичные и иммортализированные кератоциты роговицычеловека 11, а также на иммортализированные ГХЕК и первичные эпителиальные клеткироговицы кроликов 12. Сравнение воздействия токсинов на первичные кератоциты человека и иммортализированные кератоциты не показало существенных различий11. Используя методы, подробно описанные в этой статье, будет определена эффективность этих анализов для оценки токсичности УФ-излучения и глазных токсинов на pHCEC и iHCEC.

Были выбраны три глазных токсина, обычно используемых в анализах in vitro: BAK, H2 O2 и SDS. BAK представляет собой катионный консервант, обычно используемый в офтальмологических растворах 13,14,H 2 O2 обычно используется для дезинфекции контактных линз 15, а SDS представляет собой анионное поверхностно-активное вещество, содержащееся в моющих средствах и шампунях 14. Подобно глазным токсинам, УФ-излучение также может нанести значительный ущерб HCEC3. Кроме того, чрезмерное воздействие ультрафиолета может вызвать глазное заболевание, известное как фотокератит, характеризующееся симптомами слезотечения, светочувствительности и ощущения зернистости16.

Существует неограниченное количество первичных клеточных культур, которые могут быть использованы, и различные иммортализированные клеточные линии, которые были разработаны. Поэтому было проведено исследование для сравнения первичных HCEC с иммортализированной линией HCEC, чтобы определить сходства и различия между моделями, которые включают эти типы клеток.

В этом исследовании использовалась микроскопия для оценки возможных различий между pHCEC и iHCEC в физиологическом ответе клеток на ультрафиолетовое излучение и токсины. Также оценивалось влияние ультрафиолетового излучения и химических веществ на метаболическую активность клеток и высвобождение воспалительных цитокинов для двух клеточных линий. Важность определения различий между двумя клеточными линиями заключается в понимании оптимального использования этих клеточных линий для оценки: 1) влияния ультрафиолетового излучения на клетки, 2) воздействия токсинов на клетки и 3) результирующих изменений в метаболизме, жизнеспособности клеток и высвобождении клеточных цитокинов для будущих исследований.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Культура pHCEC и iHCEC

  1. Выращивайте pHCEC и iHCEC в эпителиальной среде глаза человека (HOEM) со следующими добавками: 6 мМ L-глютамина, 0,002% добавка клеточной среды O (таблица материалов), 1,0 мкМ адреналина, 0,4% добавка клеточной среды P (таблица материалов), 5 мкг/мл резус-инсулина, 5 мкг/мл апотрансферрина и 100 нг/мл гемисукцината гидрокортизона в колбах с коллагеновым покрытием (18 мл в колбедля культуры 75 см2).
  2. Меняйте среду в колбах каждые 2-3 дня, удаляя среду после того, как клетки вырастут до ~80% слияния. Добавьте диссоциирующий раствор без фенолового красителя и инкубируйте колбу при 37 °C до полного отделения клеток. Нейтрализуют диссоциационный раствор с помощью DMEM/F12 с сывороткой, а затем центрифугируют клетки при 500 × г. Удалите надосадочную среду и ресуспендируйте клетки в среде HOEM.

2. Определение размера клеток с помощью конфокальной микроскопии

  1. Посейте как pHCEC, так и iHCEC в чашки Петри, покрытые коллагеном, с покровными стеклами со стеклянным дном в концентрации 1 × 105 с 1 мл HOEM. Выращивайте pHCEC и iHCEC, один набор культур в течение 24 часов и другой набор культур в течение 48 часов, в инкубаторе с температурой 37 °C с 5% CO2.
  2. После инкубационного периода окрашивают клетки 500 мкл буферного раствора для окрашивания аннексина, содержащего кальцеин (4 мкМ), гомодимер-этидий-1 (8 мкМ) и аннексин V (5 мкл в буфере 500 мкл - конъюгат Alexa Fluor 647) в течение 20 мин при 37 °C. После окрашивания клеток настройте микроскоп для захвата длин волн возбуждения/излучения 488/515 нм для кальцеина-AM, 543/600 нм для гомодимера этидия-1 и 633/665 нм для аннексина V с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа.
  3. Получите изображения и сделайте Z-стеки, чтобы оценить размер ячейки в трех измерениях.
    1. Чтобы получить двухмерные (2D) и трехмерные (3D) изображения, найдите область для изображения с помощью апохромата 40x/1.2 водного объектива. С помощью лазеров Argon (488) (первое сканирование), HeNe1 (543) (второе сканирование) и HeNe2 (633) (третье сканирование) сканирование в трех отдельных каналах с использованием светоделителей: HFT 488/543/633, NFT 635 VIS и NFT 545 LP560, LP505.
    2. Используйте многодорожечное последовательное сканирование, чтобы уменьшить перекрестные помехи.
      ПРИМЕЧАНИЕ: LP505 используется для канала 2 с лазером 488 для улавливания излучения красителя кальцеина. LP560 используется в канале 3 с лазером 543 для улавливания излучения гомодимера этидия 1. NFT 635 используется с лазером 633 для улавливания излучения аннексина V. Целью HFT является разделение возбуждающего и излучающего света. NFT расщепляет свет, отражая свет < указанной длине волны в отдельный канал, позволяя свету > указанной длины волны во второй канал. Фильтры LP блокируют более короткие длины волн, чем указанная длина волны, и пропускают более длинные волны.
    3. Чтобы получить изображение в 3D, установите конфокальный стек в Z-стек и отсканируйте не менее 20 кадров.

3. Воздействие на клетки УФ-излучения

  1. Засейте клетки в 5 × 104 / мл HOEM в каждую лунку 24-луночной культуральной пластины, покрытой коллагеном-1, и инкубируйте при 37 ° C с 5% CO2 в течение 3 часов. После инкубационного периода уменьшите объем среды в лунках до 300 мкл. Затем подвергните клетки воздействию ультрафиолетового излучения (как UVA при 6,48 Вт / м 2 , так и UVB при 1,82 Вт / м2, поскольку трубки UVA и UVB включены в инкубаторе одновременно) в инкубаторе с температурой 37 ° C в течение 5 и 20 минут в отдельных экспериментах.
  2. После УФ-излучения добавьте 200 мкл свежего HOEM в каждую лунку и инкубируйте в течение 20 часов при 37 ° C с 5% CO2.
  3. После инкубации соберите надосадочную жидкость клетки в каждую лунку и переложите ее в стерильные полипропиленовые пробирки объемом 2 мл. Заморозить при -80 °C. Чтобы определить уровни цитокинов, высвобождаемых pHCEC и iHCEC после воздействия ультрафиолета, используйте мультиплексный анализ цитокинов и следуйте инструкциям набора для количественного определения следующих четырех цитокинов: IL-6, IL-8, IL-1β и TNF-α.
  4. Добавьте реагент метаболического анализа в клетки в лунках.
  5. Приготовьте 10% реагент метаболического анализа в DMEM/F12. Замените питательную среду в каждой лунке 1 мл 10% раствора метаболического анализа и инкубируйте при 37 ° C с 5% CO2 в течение 4 часов.
  6. Измерьте флуоресценцию каждого раствора с помощью считывателя флуоресцентных пластин на длинах волн возбуждения/излучения 530/590 нм.

4. Воздействие на клетки химических токсинов

  1. Семенные клетки при 5 × 104 / мл HOEM в каждой лунке 24-луночной культуральной пластины, покрытой коллагеном-1, и инкубируют при 37 ° C с 5% CO2 в течение 3 часов. После инкубационного периода удалите среду и подвергните клетки воздействию 1 мл химических токсинов (BAK 0,001%, H2O2 0,01% и SDS 0,0025% в фосфатно-буферном физиологическом растворе (PBS)) в течение 5 и 15 минут.
  2. После воздействия химических токсинов удалите токсины из лунок, промойте 1 мл PBS и добавьте по 1 мл HOEM в каждую лунку. После 20 ч инкубации проводят метаболический анализ, заменяя среду 1 мл 10% метаболического раствора и инкубируя при 37 ° C с 5% CO2 в течение 4 часов. Измерьте флуоресценцию с помощью флуоресцентного многолуночного планшетного считывателя на длинах волн возбуждения/излучения 530/590 нм.
  3. После 20-часовой инкубации переносят надосадочные жидкости клеток из лунок в отдельные стерильные полипропиленовые пробирки объемом 2 мл и замораживают при -80 °C. Количественное определение цитокинов, высвобождаемых pHCEC и iHCEC после воздействия химических веществ. Используйте ту же мультиплексную платформу, которая используется для оценки цитокинов из клеток, обработанных ультрафиолетом. Используйте мультиплексный анализ цитокинов в соответствии с инструкциями набора для количественного определения следующих четырех цитокинов: IL-6, IL-8, IL-1β и TNF-α.

5. Исследование клеток, подвергшихся воздействию различных концентраций БАК

  1. Семенные клетки при 1 × 10 5 / мл HOEM в каждой лунке 24-луночной культуральной пластины, покрытой коллагеном-1, и инкубируют при 37 ° C с5% CO2 в течение 24 часов. После инкубационного периода удалите среду и подвергните клетки воздействию 1 мл химических токсинов (BAK 0,001%, BAK 0,005% и BAK 0,01% в PBS) в течение 5 мин.
  2. После воздействия удалите химические токсины, промойте лунки 1 мл PBS и добавьте по 1 мл HOEM в каждую лунку. После 20 ч инкубации окрашивают клетки 500 мкл буферного раствора для окрашивания аннексина, содержащего кальцеин (4 мкМ), гомодимер-этидия-1 (8 мкМ) и аннексин V (5 мкл в буфере 500 мкл - конъюгат Alexa Fluor 647) в течение 20 мин при 37 °C. Настройте микроскоп для измерения интенсивности окрашивания аннексина V, кальцеина AM и этидия-1 на длинах волн возбуждения/излучения 630/675 нм, 495/515 нм и 528/617 нм соответственно. Изображение клеток с помощью флуоресцентного микроскопа

6. Анализ данных

  1. Проведите тест на нормальность и тест на равные дисперсии, прежде чем выполнять дисперсионный анализ (ANOVA), тест Уэлча ANOVA или тест Крускала-Уоллиса. Используйте соответствующий постфактум тест для сравнения каждой тестируемой группы. Установите p < 0,05.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Размер ячейки
Первичные и иммортализированные HCEC визуализировали с помощью трех флуоресцентных красителей, которые отражают три различные стадии жизнеспособности клеток. Живые клетки зеленые (кальцеин-AM), мертвые клетки красные (гомодимер этидия-1), а апоптотические клетки желтые (аннексин V-скорректированный компьютером цвет для лучшей визуализации флуоресцентного сигнала). Живые клетки содержат эстеразы в цитоплазме клетки и превращают кальцеин-AM в кальцеин. Мертвые клетки имеют клеточные мембра...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Были оценены потенциальные различия в использовании двух типов HCEC. Клетки помещали в одну и ту же среду (HOEM) при одинаковых концентрациях клеток, а затем подвергали краткосрочному и длительному воздействию ультрафиолетового излучения и трех глазных токсинов. Дозы ультрафиолетового излучения и химических веществ были выбраны на основе их физиологических эффектов, которые были достаточно разрушительными для клеток, чтобы вызвать промежуточные реакции, которые можно было бы сравнить. Время воздействия 5 и 20 мин для УФ-...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Автор, Линдон В. Джонс, за последние 3 года через CORE получил исследовательскую поддержку или гонорары за чтение лекций от следующих компаний: Alcon, Allergan, Allied Innovations, Aurinia Pharma, BHVI, CooperVision, GL Chemtec, i-Med Pharma, J&J Vision, Lubris, Menicon, Nature's Way, Novartis, Ophtecs, Ote Pharma, PS Therapy, Santen, Shire, SightGlass SightSage и Visioneering. Линдон Джонс также является консультантом и/или членом консультативного совета Alcon, CooperVision, J&J Vision, Novartis и Ophtecs. Остальным авторам раскрывать нечего.

Благодарности

Авторы не получили финансирования для этой работы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
75 см<суп>2 Вентилируемая колбаCorning354485Это бренд BioCoat, покрытый коллагеном
96 луночный планшетcostar3370
alamarBlueFisher Scientificdal 1025
Аннексин Окрашивающий буферный растворInvitrogen, Берлингтон, Онтарио, Канада
Аннексин VИнвитроген, Берлингтон, Онтарио, Канада
Axiovert 100 микроскоп с конфокальным лазерным сканирующим микроскопом Zeiss система 510 CarlZeiss Inc., Германия
Corning 48 Well platesCorning354505Это бренд BioCoat, покрытый коллагеном
Cytation 5BioTekCYT5MPVМожет считывать флуоресценцию от 280 - 700 нм (для анализа 540/590)
Фетальная бычья сывороткаHyconeSH30396.03
стеклянные нижние покровные стеклаMatTek Corporation, Ашленд, Массачусетс, США
Эпителиальные клетки роговицы человекаУниверситета ОттавыN/ASV40-увековеченные эпителиальные клетки роговицы человека от доктора М. Гриффита (Оттавский институт глазных исследований, Оттава, Канада) и были охарактеризованы Гриффитом М., Осборном Р., Мангером Р., Сюн Х., Дуайоном С.Дж., Лэйкоком Н.Л., Хакимом М., Сонгом И, Ватски М.А. Функциональные эквиваленты роговицы человека, сконструированные из клеточных линий. Наука. 1999;286:2169-72.
Эпителиальная среда глаза человека (HOEM) со следующими добавками:Millipore, Billerica, MA, США SCMC001Основная среда Epigro с добавлением 6 мМ L-глутамина, 0,002% EpiFactor O (добавка клеточной среды O в статье), 1,0 μ M Эпинефрин, 0,4% эпифактор P (клеточная медиадобавка P в статье), 5 μ г/мл rh Инсулин, 5 μ г/мл Apo-трансферрина и 100 нг/мл гемисукцината гидрокортизона в колбах с покрытием из коллагена-1 (BioCoat, Corning, Tewksbury, MA, США).
Live Dead кальциен и гомодимер этидияInvitrogen, Берлингтон, Онтарио, Канада
MesoScale Discovery (MSD) QuickPlex SQ 120 инструментРоквилл, Мэриленд, США
MSD Человеческая провоспалительная панель II (4-Plex) V-Plex анализ V-PlexРоквилл, Мэриленд, США
Пенициллин стрептомицинGibco15140-122100-кратная концентрация, поэтому добавьте 1 мл на каждые 99 мл среды
Первичные эпителиальные клетки роговицыMillipore, Billerica, MA, США SCCE016
флуоресцентный многолуночный считыватель SpectraMaxMolecular Devices, Саннивейл, Калифорния, США
TrypLE Express (раствор для диссоциации клеток)Fisher Scientific12605036

Ссылки

  1. McCanna, D. J., Harrington, K. L., Driot, J. Y., Ward, K. W., Tchao, R. Use of a human corneal epithelial cell line for screening the safety of contact lens care solutions in vitro. Eye & Contact Lens. 34 (1), 6-12 (2008).
  2. Xu, M., Sivak, J. G., McCanna, D. J. Comparison of the effects of ophthalmic solutions on human corneal epithelial cells using fluorescent dyes. Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics. 29 (9), 794-802 (2013).
  3. Youn, H. Y., McCanna, D. J., Sivak, J. G., Jones, L. W. In vitro ultraviolet-induced damage in human corneal, lens, and retinal pigment epithelial cells. Molecular Vision. 17, 237-246 (2011).
  4. Hakkarainen, J. J., et al. Acute cytotoxic effects of marketed ophthalmic formulations on human corneal epithelial cells. International Journal of Pharmaceutics. 511 (1), 73-78 (2016).
  5. Spurr, S. J., Gipson, I. K. Isolation of corneal epithelium with Dispase II or EDTA. Effects on the basement membrane zone. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 26 (6), 818-827 (1985).
  6. Kahn, C. R., Young, E., Lee, I. H., Rhim, J. S. Human corneal epithelial primary cultures and cell lines with extended life span: in vitro model for ocular studies. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 34 (12), 3429-3441 (1993).
  7. Araki-Sasaki, K., et al. An SV40-immortalized human corneal epithelial cell line and its characterization. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 36 (3), 614-621 (1995).
  8. Griffith, M., et al. Functional human corneal equivalents constructed from cell lines. Science. 286 (5447), 2169-2172 (1999).
  9. Toouli, C. D., et al. Comparison of human mammary epithelial cells immortalized by simian virus 40 T-Antigen or by the telomerase catalytic subunit. Oncogene. 21 (1), 128-139 (2002).
  10. Kaur, G., Dufour, J. M. Cell lines: Valuable tools or useless artifacts. Spermatogenesis. 2 (1), 1-5 (2012).
  11. Zorn-Kruppa, M., Tykhonova, S., Belge, G., Diehl, H. A., Engelke, M. Comparison of human corneal cell cultures in cytotoxicity testing. Altex. 21 (3), 129-134 (2004).
  12. Huhtala, A., et al. Comparison of an immortalized human corneal epithelial cell line and rabbit corneal epithelial cell culture in cytotoxicity testing. Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics. 18 (2), 163-175 (2002).
  13. Pisella, P. J., Fillacier, K., Elena, P. P., Debbasch, C., Baudouin, C. Comparison of the effects of preserved and unpreserved formulations of timolol on the ocular surface of albino rabbits. Ophthalmic Research. 32 (1), 3-8 (2000).
  14. Youn, H. Y., Moran, K. L., Oriowo, O. M., Bols, N. C., Sivak, J. G. Surfactant and UV-B-induced damage of the cultured bovine lens. Toxicology in vitro. 18 (6), 841-852 (2004).
  15. Hughes, R., Kilvington, S. Comparison of hydrogen peroxide contact lens disinfection systems and solutions against Acanthamoeba polyphaga. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 45 (7), 2038-2043 (2001).
  16. Delic, N. C., Lyons, J. G., Di Girolamo, N., Halliday, G. M. Damaging effects of ultraviolet radiation on the cornea. Photochemistry and Photobiology. 93 (4), 920-929 (2017).
  17. Ahuja, D., Saenz-Robles, M. T., Pipas, J. M. SV40 large T antigen targets multiple cellular pathways to elicit cellular transformation. Oncogene. 24 (52), 7729-7745 (2005).
  18. Tong, Y., et al. Pin1 inhibits PP2A-mediated Rb dephosphorylation in regulation of cell cycle and S-phase DNA damage. Cell Death & Disease. 6, 1640(2015).
  19. Muller, P. A., Vousden, K. H. p53 mutations in cancer. Nature Cell Biology. 15 (1), 2-8 (2013).
  20. Seshacharyulu, P., Pandey, P., Datta, K., Batra, S. K. Phosphatase: PP2A structural importance, regulation and its aberrant expression in cancer. Cancer Letters. 335 (1), 9-18 (2013).
  21. Yang, D., Okamura, H., Morimoto, H., Teramachi, J., Haneji, T. Protein phosphatase 2A Calpha regulates proliferation, migration, and metastasis of osteosarcoma cells. Laboratory nvestigation; A Journal of Technical Methods and Pathology. 96 (10), 1050-1062 (2016).
  22. Xie, F., et al. Disruption and inactivation of the PP2A complex promotes the proliferation and angiogenesis of hemangioma endothelial cells through activating AKT and ERK. Oncotarget. 6 (28), 25660-25676 (2015).
  23. Mallet, J. D., Rochette, P. J. Wavelength-dependent ultraviolet induction of cyclobutane pyrimidine dimers in the human cornea. Photochemical & Photobiological Sciences. 12 (8), 1310-1318 (2013).
  24. Cejkova, J., Cejka, C. The role of oxidative stress in corneal diseases and injuries. Histology and Histopathology. 30 (8), 893-900 (2015).
  25. Wang, S. Q., Balagula, Y., Osterwalder, U. Photoprotection: a review of the current and future technologies. Dermatologic Therapy. 23 (1), 31-47 (2010).
  26. Svobodova, A. R., et al. DNA damage after acute exposure of mice skin to physiological doses of UVB and UVA light. Archives of Dermatological Research. 304 (5), 407-412 (2012).
  27. Kennedy, M., et al. Ultraviolet irradiation induces the production of multiple cytokines by human corneal cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 38 (12), 2483-2491 (1997).
  28. Kode, A., Yang, S. R., Rahman, I. Differential effects of cigarette smoke on oxidative stress and proinflammatory cytokine release in primary human airway epithelial cells and in a variety of transformed alveolar epithelial cells. Respiratory Research. 7, 132(2006).
  29. Epstein, S. P., Chen, D., Asbell, P. A. Evaluation of biomarkers of inflammation in response to benzalkonium chloride on corneal and conjunctival epithelial cells. Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics. 25 (5), 415-424 (2009).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

in vitro
Определение токсичности УФ-излучения и химических веществ на первичных и иммортализированных эпителиальных клетках роговицы человека
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.