Методическая статья

Анализ куриных рекомбинантных конечностей для понимания морфогенеза, паттернов и ранних этапов дифференцировки клеток

DOI:

10.3791/63183

⸱

12 января 2022 г.

 ,  , 
1Departamento de Medicina Genómica y Toxicología Ambiental, Instituto de Investigaciones Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México, 2Departamento de Anatomía y Biología Celular and IDIVAL, Facultad de Medicina, Universidad de Cantabria

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Рекомбинантные конечности являются мощной экспериментальной моделью, позволяющей изучать процесс дифференцировки клеток и генерации паттернов под влиянием эмбриональных сигналов. Этот протокол представляет собой подробный метод генерации рекомбинантных конечностей с куриными конечностями-мезодермальными клетками, адаптируемыми к другим типам клеток, полученных от разных организмов.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Клеточная дифференцировка - это тонко настроенный процесс клеточной приверженности, приводящий к образованию различных специализированных типов клеток во время создания развивающихся тканей и органов. Этот процесс активно поддерживается в зрелом возрасте. Дифференцировка клеток – это непрерывный процесс во время развития и гомеостаза органов. Понимание ранних этапов дифференцировки клеток имеет важное значение для знания других сложных процессов, таких как морфогенез. Таким образом, рекомбинантные куриные конечности являются экспериментальной моделью, позволяющей изучать дифференцировку клеток и генерацию паттернов по сигналам эмбрионального паттерна. Эта экспериментальная модель имитирует среду in vivo ; он собирает реагрегированные клетки в эктодермальную оболочку, полученную из раннего бутона конечности. Позже эктодермы переносятся и имплантируются в рецептор эмбриона цыпленка, чтобы обеспечить его развитие. Этот анализ в основном использовался для оценки клеток мезодермальных почек конечностей; однако он может быть применен к другим стволовым клеткам или клеткам-предшественникам других организмов.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Конечность позвоночных является грозной моделью для изучения дифференцировки клеток, пролиферации клеток, гибели клеток, формирования паттернов и морфогенеза 1,2. Во время развития конечности возникают в виде выпуклостей из клеток, полученных из боковой пластинки мезодермы1. Почки конечностей состоят из центрального ядра мезодермальных клеток, покрытых эктодермой. Из этой ранней структуры возникает цельная и хорошо сформированная конечность. После возникновения бутона конечности распознаются три оси: (1) проксимо-дистальная ось ([PD] плечо к пальцам), (2) дорсо-вентральная ось ([DV] от ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это исследование было рассмотрено и одобрено Институциональным наблюдательным советом по уходу за лабораторными животными и их использованию Института биомедических исследований Национального автономного университета Мексики (УНАМ, Мехико, Мексика). Схематическая блок-схема общих шагов этого протокола показана на рисунке 1A.

1. Инкубация эмбрионов и определение жизнеспособности

  1. Инкубировать оплодотворенные куриные яйца при 38 °C и относительной влажности 60% в течение примерно трех с половиной дней, пока они не достигнут стадии 22 HH (согласно Hamilton and Hamburger, 1951)

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Распознавание хорошо выполненной рекомбинантной конечности
После пересадки обработанные эмбрионы были возвращены в инкубатор, чтобы позволить RL развиваться. Время инкубации коррелировало с требованиями эксперимента. Тем не менее, RL можно легко отличить после 12 ч имплантации. Чтобы определить, была ли имплантация адекватной, RL наблюдали в виде выступа, который был надежно прикреплен к мезодермальной стенке донорского эмбриона (рисунок 2A). Напротив, независимо от того,.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В целом, протокол RL можно разделить на пять этапов: (1) инкубация эмбриона, (2) получение мезодермальных клеток конечностей для заполнения эктодерм, (3) получение эктодерм, (4) сборка мезодермальных клеток внутри эктодермальных покровов и (5) трансплантация заполненных эктодерм в эмбрионы хозяина. Основным ограничением метода RL является длинный, подробный протокол, который имеет много критических моментов, требующих терпения для надлежащей работы. Для успешного завершения протокола необходимо определить критические мом.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим Эстефанию Гарай-Пачеко за изображения на рисунке 2 и Марию Валерию Чимал-Монтес де Ока за художественные работы. Эта работа была поддержана Генеральным обществом ассоциаций личной академии (DGAPA)-Национальным автономным университетом Мексики [номера грантов IN211117 и IN213314] и Национальным советом по вопросам науки и техники (CONACyT) [грант No 1887 CONACyT-Fronteras de la Ciencia], присужденный JC-M. JC M-L был получателем постдокторской стипендии от Национального совета науки и техники (CONACyT-Fronteras de la Ciencia-1887).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Alcian Blue 8GXSigmaA5268
Угловой щелевой ножAlcon2.75mm DB
Тупые щипцыFine Science Tools11052-10
Коллагеназа типа IVGibco1704-019
DMEM-HGSigmaD5796
Инкубатор для яицIncumatic de MexicoIncumatic 1000
Фетальная бычья сывороткаGibco16000069
Тонкие хирургические щипцыFine Science Tools9115-10
Hanks Сбалансированный солевой растворSigmaH6648
МикроцентрифугаEppendorf5417R
MicropipetNANA
Палладиевая проволокаGoodFellow7440 05-3
Чашка ПетриГнездо705001
PippettecrmglobePF1016
СтереомикроскопZeissStemi DV4
TapeNA
Trypsin porcineMerck9002 07-7
Вольфрамовая иглаGoodFellowE74-15096/01

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Malashichev, Y., Christ, B., Pröls, F. Avian pelvis originates from lateral plate mesoderm and its development requires signals from both ectoderm and paraxial mesoderm. Cell and Tissue Research. 331 (3), 595-604 (2008).
  2. Mahmood, R., et al.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи