Method Article

Генерация модели ишемии крючка-реперфузии с использованием трехдневного развивающегося эмбриона цыпленка

DOI:

10.3791/63288

⸱

February 19th, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory for Stem Cell and Restorative Neurology, Department of Biotechnology, Era’s Lucknow Medical College Hospital, Era University, 2Era University, 3Department of Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Era University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этой статье описывается моделирование ишемии-реперфузии (I / R) в 3-дневном эмбрионе цыпленка с использованием крючка, настроенного на спинальную иглу, чтобы лучше понять развитие и лечение I / R. Эта модель проста, быстра и недорога.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Расстройства ишемии и реперфузии (I / R), такие как инфаркт миокарда, инсульт и заболевания периферических сосудов, являются одними из ведущих причин болезни и смерти. Многие модели in vitro и in vivo в настоящее время доступны для изучения механизма I/R в заболевании или поврежденных тканях. Однако до настоящего времени не сообщалось о модели ovo I/R, что позволило бы лучше понять механизмы I/R и ускорить скрининг лекарств. В этой статье описывается моделирование I /R с использованием крючка спинальной иглы в 3-дневном эмбрионе цыпленка, чтобы понять механизмы развития и лечения I/R. Наша модель может быть использована для исследования аномалий на уровнях ДНК, РНК и белка. Этот метод прост, быстр и недорог. Текущая модель может использоваться независимо или в сочетании с существующими моделями I/R in vitro и in vivo .

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ишемия-реперфузионное повреждение тканей было связано с рядом патологий, включая сердечные приступы, ишемический инсульт, травмы и заболевания периферических сосудов1,2,3,4,5. В первую очередь это связано с отсутствием всестороннего понимания прогрессирования заболевания и отсутствием эффективной исследовательской модели. Ишемическое повреждение возникает, когда кровоснабжение определенного участка ткани прекращается. В результате ишемическая ткань в конечном итоге некротизируется, хотя скорость варьируется в зависимости от ткани. Следовательно, восстановление кровоснабжения может помочь смягчить ущерб. Однако в некоторых случаях было замечено, что реперфузия вызывает больше повреждений тканей, чем одна только ишемия6,7,8. Поэтому понимание молекулярных и клеточных механизмов ишемии-реперфузии требуется для разработки эффективного терапевтического вмешательства. В настоящее время не известно эффективного лечения I/R травм. Это несоответствие побудило к созданию новых экспериментальных моделей, начиная от моделей in vitro до in vivo, для решения существующей проблемы9,10,11,12,13.

Эмбрионы цыплят (Gallus gallus domesticus) широко используются в исследованиях из-за их простоты доступа, этической приемлемости, относительно большого размера (по сравнению с другими эмбрионами), низкой стоимости и быстрого роста14. Мы использовали эмбрион цыпленка в 72 ч развития для создания in ovo I/R путем окклюдирования и высвобождения правой вителлиновой артерии с помощью спинномозговой иглы. Мы назвали его моделью ишемии-реперфузии Hook-I/R (рисунок 1). Модель, используемая в этом исследовании, способна точно моделировать все последующие процессы, включая окислительные и воспалительные пути, которые часто связаны с повреждением I/R15,16,17.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Институциональный этический комитет по защите животных в Медицинском колледже и больнице Лакхнау Эры выпустил письменный отказ, в котором говорилось, что для проведения этих экспериментов не требуется официального разрешения в соответствии с Комитетом по контролю и надзору за экспериментами на животных (CPCSEA). Тем не менее, были соблюдены стандартные операционные процедуры, чтобы свести к минимуму любую возможность эмбрионального дистресса.

1. Подготовка буфера (таблица 1)

  1. Приготовьте раствор Рингера
    1. Для приготовления раствора Рингера растворяют 0,72 г NaCl (123 мМ), 0,017 г CaCl2 (1,53 мМ), 0,037 г KCl (4,96 мМ) в 70 мл стерильного дистиллированного H2O, с конечным объемом 100 мл. Отрегулируйте pH до 7,4. Дайте ему полностью раствориться и автоклав. Затем фильтруют через фильтр 0,22 мкм, аликвотируют на одноразовые количества (около 10 мл) и хранят при комнатной температуре.
  2. Готовят обычный физиологический раствор (0,9% хлорида натрия, NaCl).
    1. В 70 мл стерильного дистиллированного H2O растворить 0,9 г NaCl (154 мМ). Восполнить объем до 100 мл. Автоклав в течение 15 мин при 121 °C. При необходимости отрегулируйте рН до 7,4 с 0,1 Н HCl или 0,1 Н NaOH. Сделайте аликвоты по 10 мл в стерильной центрифужной трубке объемом 15 мл и храните при комнатной температуре.
  3. Готовят 70% этанол (v/v).
    1. Смешайте 70 мл чистого этанола (мол. масс. 46,07 г/л) до 30 мл стерильного H2O. Приготовьте по мере необходимости или храните при комнатной температуре. Нет необходимости в стерилизации.
  4. Приготовьте 1x фосфатного буферного физиологического раствора (1x PBS).
    1. Приготовьте 100 мл 1x PBS, добавив 0,144 г Na2HPO4·7H2O (5,37 мМ), 0,8 г NaCl (136,8 мМ), 0,2 г KCl (26,8 мМ), 0,2 г KH2PO4 (14,6 мМ) до 70 мл дистиллированной воды. Растворить и восполнить объем до 100 мл и автоклав в течение 15 мин при 121 °С. Доведите рН до 7,4, добавив пару капель 0,1 N HCl или 0,1 N NaOH, если это необходимо. Сделайте аликвоты по 10 мл в стерильной центрифужной трубке объемом 15 мл и храните при комнатной температуре.

2. День 1

  1. Разложите все инструменты, необходимые для стерилизации яиц (70% этанол, чистящие салфетки, стойка для яиц и маркер OHP).
  2. Очистите яйца на 0 дней с 70% этанолом, используя салфетки из папиросной бумаги. Используйте только 0-дневное яйцо, так как старые яйца могут не дать начало эмбриону.
  3. Напишите текущую дату на яйцах маркером OHP.
  4. Поместите яйца в инкубатор для яиц с температурой 36-37 °C и уровнем влажности 60%-65%. Высиживать яйца в течение следующих 24 ч.

3. День 2

  1. Расположите необходимое оборудование для вывода 5-6 мл альбумина (острые краевые ножницы, шприц 5 мл, игла 18 г, шприц-выбрасыватель, скотч, скотч).
  2. Протрите хирургические ножницы 70% этанолом или стерилизуйте с помощью автоклава после протирания их 70% этанолом.
  3. Теперь возьмите яйцо из инкубатора яиц при температуре 37 °C для прослойки.
  4. Поместите яйцо на чистую стойку для яиц.
  5. Прикрепите небольшой кусочек клейкой ленты (размер: около 1 дюйма длины х ширины) к краю яйца.
  6. Сделайте небольшое отверстие в краю яичной скорлупы с помощью остроконечных краевых ножниц. Вставьте шприц объемом 5 мл под приблизительным углом 75°.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Шприц 5 мл поставляется с иглой 24 G x 1 (стерильная), но хорошо заменить иглу 24 G x 1 иглой 18 G x 1,5 (стерильной). Игла 18 G x 1.5 имеет ширину 1,25 x 38 мм. Поэтому он облегчит удаление альбумина.
  7. После введения иглы в желточный мешок медленно выводят 5-6 мл альбумина.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Это обеспечивает эмбриону кровать, на которой он может расти. Выведение альбумина предотвращает переливание альбумина при установлении окна. Наконец, риск повреждения эмбриона во время окна смягчается путем устранения 5-6 мл альбумина.
  8. После удаления альбумина повторно запечатайте отверстие клейкой лентой и оставьте яйца для инкубации при 37 °C в течение 48 ч.

4. День 4

  1. Приготовьте раствор Рингера, 0,9% нормального физиологического раствора и 1x PBS, как описано в разделе 1 протокола. Затем автоклавируйте три решения. После автоклавирования поместите соответствующий раствор при комнатной температуре.
  2. Выньте яйцо из инкубатора для яиц при температуре 37 °C и разрежьте скорлупу в круглую форму. Перед тем, как разрезать яичную скорлупу, накройте область, подлежащую разрезанию, скотчем.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Покрытие оконной зоны клейкой лентой предотвращает разрушение яичной скорлупы на нежелательные места. Однако, если вы вломитесь в нежелательное место, запечатайте область скотчем. Покрытие мест, подлежащих разрезанию, клейкой лентой предотвращает падение кусочков оболочки на желточный мешок.
  3. Создайте небольшое отверстие в яичной скорлупе резко заостренным краем ножницами в том месте, где требуется окно, и начните прорезать круглое отверстие. Этот процесс называется окном.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что круговой разрез достаточно большой, чтобы обеспечить легкий доступ к эмбриону с любого направления. При необходимости измените положение яйцеклетки, чтобы приспособиться к положению эмбриона.
  4. Затем, используя хирургический микроскоп со стереозумом, найдите правую вителлиновую артерию (RVA).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Куриные эмбрионы обычно подвергаются грудному перекруту (наряду с цервикальным изгибом и т. Д.) По мере их развития, так что левая сторона головы находится против желтка на стадии 72 ч. Более каудально, там, где вителлиновые артерии выходят из организма, эмбрион не сильно скручивается, и эта часть тела лежит вентральной стороной вниз по направлению к желтку. Так, при непосредственном взгляде справа от эмбриона находится справа от исследователя.
  5. Как только RVA будет найден, создайте два небольших отверстия на левой и правой сторонах RVA с помощью иглы 26 G (рисунок 2).
  6. Поместите зонд допплеровской визуализации кровотока над RVA. Убедитесь, что допплеровский зонд для визуализации кровотока размещен на расстоянии 5 ± 1 мм от места ишемии и к дистальному концу RVA. Возьмите показания флюса в течение 2 мин и 30 с (или дольше, если это необходимо). Это будет показание нормоксической фазы.
  7. Тем временем, используя плоскогубцы для носа и зубчатые щипцы, вручную формируйте край спинномозговой иглы в форму крючка (рисунок 3). Сделайте это, согнув край спинномозговой иглы примерно на 1 мм. Больший размер затруднит введение и удаление спинномозговой иглы во время процедуры I / R.
  8. Вставьте спинномозговую иглу непосредственно под правую вителлиновую артерию с помощью микроманипулятора.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Вставьте спинномозговую иглу с особой осторожностью, чтобы избежать повреждения RVA или любых соседних артерий. Оптимальным методом является регулировка специально разработанного крючка спинальной иглы точно над правой стороной отверстия RVA с последующим постепенным введением специально разработанного края спинальной иглы в желточный мешок с помощью микроманипулятора под руководством хирургического микроскопа стереозума через правое отверстие. Как только крючок спинальной иглы окажется в желточном мешочке, постепенно отрегулируйте крючок под RVA так, чтобы его край был точно помещен под левое отверстие. Сейчас самое время поднять спинномозговую иглу.
  9. Теперь с помощью микроманипулятора постепенно поднимайте артерию до тех пор, пока допплеровский поток кровотока не укажет на минимальное снижение артериального потока на 80%.
  10. Как только будет достигнуто падение на 80% или более в допплеровском потоке, оставьте спинномозговую иглу поднятой (потянув артерию вверх) в течение 5 минут. Это будет период ишемии в RVA.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Критически важно контролировать доплеровский поток во время продолжительности ишемии. Если обнаружено значительное количество колебаний, прекратите тесты.
  11. После 5-минутного периода ишемии постепенно освобождайте артерию для восстановления нормального уровня кровотока. Убедитесь, что показания допплеровского кровотока отображают значения, сопоставимые с теми, которые получены во время нормоксии. Это будет период реперфузии в RVA (рисунок 4).
  12. После процедуры I/R нанесите несколько капель (2-3) 1x PBS на эмбрион и наблюдайте за ним в течение 2-3 мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Использование 1x PBS помогает предотвратить высыхание эмбриона.
  13. Наконец, повторно запечатайте окно скотчем и поместите яйцо обратно в инкубатор для яиц на 5 ч и 55 мин.
  14. Через 5 ч и 55 мин возьмите яйцо из инкубатора для яиц, поместите его на стойку для яиц, снова откройте окно и следуйте протоколу последующей обработки.

5. Лечение

  1. Для лечения артерий лекарственными препаратами, активаторами или ингибиторами иссекают RVA через 1 ч В/Р процесса.
  2. Для последующих исследований сначала удалите эмбрион из яичной скорлупы, поместив его на стерильную чашку Петри толщиной 90 мм.
  3. Как только эмбрион будет выпущен в чашку Петри, иссекните RVA с помощью глазной радужной оболочки под руководством хирургического микроскопа со стереозумом.
  4. Убедитесь, что размер Иссечения RVA составляет до 15 ± 1 мм (дистально от ствола), 5 ± 1 мм каждый на левой и правой стороне артерии и 2 ± 1 мм к стволу.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Линейка может использоваться для измерения площади, подлежащей иссекению (необязательно).
  5. После иссекания RVA промыть его 1x PBS в стерильной чашке Петри, содержащей 1x PBS.
  6. Для желаемого лечения поместите артерию в центрифужную трубку объемом 1,5 мл (стерилизованную), заполненную 500 мкл раствора Рингера. Поместите RVA в трубку центрифуги и поместите его в инкубатор при температуре 37 °C на 5 ч и 55 мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В зависимости от методов лечения, либо используйте раствор Рингера без какого-либо лечения, либо лечение желаемым объемом и концентрацией препарата, активатора или ингибитора.
  7. Через 5 ч и 55 мин инкубации выньте RVA из лабораторного инкубатора с температурой 37 °C и приступайте к желаемой обработке.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Метод допплеровской визуализации кровотока был использован для оценки эффективности нашей модели. Короче говоря, мы сравнили данные контрольной группы с данными из группы RVA, чтобы определить успех нашего творения. На рисунке 4A изображен типичный поток, связанный с контрольным животным, в то время как на рисунке 4B показаны результаты, полученные от RVA. Число 1-8 представляет различные события, связанные с фазами ввода-вывода. Вкратце числовые 1-3 соответству...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Целью исследований ишемии-реперфузии является создание терапевтических стратегий, которые предотвращают гибель клеток и способствуют выздоровлению29,30. Чтобы преодолеть существующие ограничения в исследованиях I/R, мы разработали модель эмбриона цыпленка Hook I/R для получения надежной и воспроизводимой модели I/R. Насколько нам известно, наша модель является первой I/R моделью, когда-либо созданной в 3-дневном эмбрионе цыпленка для рутинных экспериментов I/R, п...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы хотим выразить нашу признательность Шанкару за его критический вклад во время видеографии и монтажа, г-ну Бакеру Хуссейну за закадровый голос, г-ну Асгару Ризви за редактирование видео, г-ну Мохаммаду Хайдеру за видеосъемку, г-ну Мохаммаду Данишу Сиддики за помощь в ходе экспериментов.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
(-80° В) морозильная камераHaier, Китай-
1,5 мл Центрифужная трубкаTARSONS, Индия500010X
100 мм чашка Петри (стерильная)Tarsons, Индия460050
18G Игла (18G× 1,5 (в 1,25&раз; 38 мм)Ramsons, Индия13990
мл ШприцDISPO VAN-26G
игла (26G× 1/2 (10,45x13 мм)DISPO VAN, Индия30722D
37° C инкубатор для яиц с регулируемым процентом влажностиGentek, ИндияGL-100
37° C лабораторный инкубаторSCIENCE TECH, ИндияCB 101-14
3-метиладенин (3-MA)Sigma Aldrich, СШАM9281
3 мл пастбищный пипеткаTARSONS, Индия940050
50 мл СтаканTARSONS,Индия-5
мл ШприцDISPO VAN, ИндияIP53
70% этанолMerck Millipore, Соединенные Штаты64-17-5
Клейкая лента/виолончельная лентаSunrise,Индия-Праймеры
Ambra1Applied Biosystems, Фостер-Сити, США Hs00387943_m1
Технология передачи сигналов клеток IgG против мыши, США7076S
Anti-rabbit IgGJackson Immuno Research Laboratories, США711-035-152
Atg7R& D Systems, СШАMAB6608
Atg7 праймерыApplied Biosystems, Фостер-Сити, СШАHs00893766_m1
Автоклавная сумкаTarsons, Индия550022
Автоклавная машинаместного производства, Лакхнау,
Proteintech, США66665-1-Ig
Beta ActinImmunoTag, СШАITT07018
Бычья сыворотка альбуминHimedia, Мумбаи, ИндияTC194
Хлорид кальцияHimedia, Мумбаи, ИндияGRM534
КаталазаImmunoTag, СШАITT5155
Чистящие салфеткиKimberly-Clark, Индия370080
Расщепленная каспаза3ImmunoTag, СШАITT07022
ди-натрия гидрофосфат гептагидратHimedia, Мумбаи, ИндияGRM39611
допплеровский расходомер кровиMoors instrument, ВеликобританияmoorVMS-LDF1
Egg rack--
Egg rack-
GAPDHImmunoTag, СШАM1000110
GAPDH праймерыApplied Biosystems, Фостер-сити, США
GlycineHimedia, Мумбаи, ИндияMB013
Почечный лотокHOSPITO-LC3A
/BТехнология клеточной сигнализации, СШАлаборатории 4108S
MethanolRankem, Мумбаи, ИндияM0252
МикроманипуляторNarishige, ЯпонияM-152
N-ацетил-L-цистеин (NAC)Sigma Aldrich, СШАA7250
NaringeninSigma Aldrich, США67604-48-2
NF-kβThermo Fisher Scientific, США51-0500
NLRP3ImmunoTag, СШАITT07438
Плоскогубцы для носаместного производства, Лакхнау,
щипцыStoelting, Германия52106-40
Хирургические инструменты для глазной оболочки глаза, Джайпур, ИндияHard Age Vannas Микроножницы под углом 8 см / 3 1/8 "
OHP маркерCamlin,
ImmunoTag, СШАITT08329
Ножницы с острым краемStoelting, Германия52132-11
Хлорид калияHimedia, Мумбаи, ИндияMB043
Фосфат калия одноосновной безводныйHimedia, Мумбаи, ИндияMB050
Ингибитор протеазыAbcam, СШАAb65621
SOD-1ImmunoTag, СШАITT4364
Хлорид натрияFisher Scientific, Мумбаи, Индия27605
Додецилсульфат натрияHimedia, Мумбаи, ИндияСпинальная игла GRM886
25GA; 3,50 ДЮЙМА (90,51 X 90 мм)Рамсон, ИндияGS-2029
Стерео Зум хирургический микроскопOlympus, ЯпонияSZ2-STU3
Отброс шприцевBIOHAZARD882210
Зубчатые щипцыStoelting, Германия52102-30
Tris BaseG Biosciences, СШАRC1217
Tris Соляная кислотаHimedia, Мумбаи, ИндияMB030
Tween 20G Biosciences, Соединенные ШтатыRC1227
Курица Белый Леггорн 0-дневные яйца-
-Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMKMP Biomedicals, LLC, СШАFK009
1 Индия-Beclin-1 -Hs02758991_g1 Индия-Окулярные India-ORP-150

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauzia, E., et al. Chick Embryo: A Preclinical Model for Understanding Ischemia-Reperfusion Mechanism. Frontiers in Pharmacology. 21 (9), 1034(2018).
  2. Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation. Nature Medicine. 17 (11), 1391-1401 (2011).
  3. Raza, S. S., et al. Neuroprotective effect of naringenin is mediated through suppression of NF-κB signaling pathway in experimental stroke. Neuroscience. 29 (230), 157-171 (2013).
  4. Raza, S. S., et al. Hesperidin ameliorates functional and histological outcome and reduces neuroinflammation in experimental stroke. Brain Research. 28 (1420), 93-105 (2011).
  5. Raza, S. S., et al. Silymarin protects neurons from oxidative stress associated damages in focal cerebral ischemia: a behavioral, biochemical and immunohistological study in Wistar rats. Journal of the Neurological Sciences. 15 (1-2), 45-54 (2011).
  6. Fan, L., Zhou, L. AG490 protects cerebral ischemia/reperfusion injury via inhibiting the JAK2/3 signaling pathway. Brain and Behavior. 11 (1), 01911(2021).
  7. Wu, M. Y., et al. Current Mechanistic Concepts in Ischemia and Reperfusion Injury. Cellular Physiology and Biochemistry. 46 (4), 1650-1667 (2018).
  8. Collard, C. D., Gelman, S. Pathophysiology, clinical manifestations, and prevention of ischemia-reperfusion injury. Anesthesiology. 94 (6), 1133-1138 (2001).
  9. Allen, D. D., et al. Cell lines as in vitro models for drug screening and toxicity studies. Drug Development and Industrial Pharmacy. 31 (8), 757-768 (2005).
  10. Schmeer, C., Gamez, A., Tausch, S., Witte, O. W., Isenmann, S. Statins modulate heat shock protein expression and enhance retinal ganglion cell survival after transient retinal ischemia/reperfusion in vivo. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 49 (11), 4971-4981 (2008).
  11. Huang, K. Y., et al. A systematic review and meta-analysis of acupuncture for improving learning and memory ability in animals. BMC Complementary and Alternative Medicine. 16 (1), 297(2016).
  12. Sommer, C. J. Ischemic stroke: Experimental models and reality. Acta Neuropathologica. 133 (2), 245-261 (2017).
  13. Yang, W., Chen, J., Meng, Y., Chen, Z., Yang, J. Novel targets for treating ischemia-reperfusion injury in the liver. International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), 1302(2018).
  14. Seabra, R., Bhogal, N. In vivo research using early life stage models. In Vivo. 24 (4), 457-462 (2010).
  15. Liu, H., et al. Adiponectin peptide alleviates oxidative stress and NLRP3 inflammasome activation after cerebral ischemia-reperfusion injury by regulating AMPK/GSK-3beta. Experiments in Neurology. 329, 113302(2020).
  16. Aboutaleb, N., Jamali, H., Abolhasani, M., Pazoki Toroudi, H. Lavender oil (Lavandula angustifolia) attenuates renal ischemia/reperfusion injury in rats through suppression of inflammation, oxidative stress and apoptosis. Biomedicine and Pharmacotherapy. 110, 9-19 (2019).
  17. Wallert, M., et al. alpha-Tocopherol preserves cardiac function by reducing oxidative stress and inflammation in ischemia/reperfusion injury. Redox Biology. 26, 101292(2019).
  18. Ashafaq, M., et al. Catechin hydrate ameliorates redox imbalance and limits inflammatory response in focal cerebral ischemia. Neurochemical Research. 37 (8), 1747-1760 (2012).
  19. Gallagher, S., Chakavarti, D. Immunoblot analysis. Journal of Visualized Experiments. 20 (16), 759(2008).
  20. Abt, M. A., Grek, C. L., Ghatnekar, G. S., Yeh, E. S. Evaluation of lung metastasis in mouse mammary tumor models by quantitative real-time PCR. Journal of Visualized Experiments. (107), e53329(2016).
  21. Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. Y., Kim, Y. H. Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments. Journal of Visualized Experiments. (62), e3923(2012).
  22. Wu, Y., et al. Cathelicidin aggravates myocardial ischemia/reperfusion injury via activating TLR4 signaling and P2X(7)R/NLRP3 inflammasome. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 139, 75(2020).
  23. Franke, M., et al. The NLRP3 inflammasome drives inflammation in ischemia/reperfusion injury after transient middle cerebral artery occlusion in mice. Brain Behaviour and Immunity. 92, 223(2021).
  24. Lawrence, T. The nuclear factor NF-kappaB pathway in inflammation. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 1 (6), 001651(2009).
  25. Liu, H., et al. Pterostilbene attenuates astrocytic inflammation and neuronal oxidative injury after ischemia-reperfusion by inhibiting NF-kappaB phosphorylation. Frontiers in Immunology. 10, 2408(2009).
  26. Prakash, R., et al. Sivelestat-loaded nanostructured lipid carriers modulate oxidative and inflammatory stress in human dental pulp and mesenchymal stem cells subjected to oxygen-glucose deprivation. Materials Science and Engineering: C Materials for Biological Applications. 120, 111700(2021).
  27. Prakash, R., et al. Oxidative stress enhances autophagy in stem cells through Erk1/2 signaling pathway - implications for neurotransplantations. Stem Cell Reviews and Reports. , (2021).
  28. Ahmad, A., et al. Gelatin-coated polycaprolactone nanoparticle-mediated naringenin delivery rescue human mesenchymal stem cells from oxygen glucose deprivation-induced inflammatory stress. ACS Biomaterials Science and Engineering. 5 (2), 683-695 (2019).
  29. Guan, X., et al. The neuroprotective effects of carvacrol on ischemia/reperfusion-induced hippocampal neuronal impairment by ferroptosis mitigation. Life Science. 235, 116795(2019).
  30. Jin, Z., Guo, P., Li, X., Ke, J., Wang, Y., Wu, H. Neuroprotective effects of irisin against cerebral ischemia/ reperfusion injury via Notch signaling pathway. Biomedicine and Pharmacotherapy. 120, 109452(2019).
  31. Wainrach, S., Sotelo, J. R. Electron microscope study of the developing chick embryo heart. Zeitschrift fur Zellforschung und mikroskopische Anatomie. 55, 622-634 (1961).
  32. Joshi, V. C., Wilson, A. C., Wakil, S. J. Assay for the terminal enzyme of the stearoyl coenzyme A desaturase system using microsomes. Journal of Lipid Research. 18 (1), 32-36 (1977).
  33. Kain, K. H., et al. The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research. Development Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).
  34. Mann, R. A., Moore, K. L., Persaud, T. V. N. Limitations in the u~e of the early chick embryo 88 a teratological model. Teratology. 7, 22-23 (1973).
  35. Chen, T., Vunjak-Novakovic, G. In vitro models of ischemia-reperfusion injury. Regenerative English and Translation Medicine. 4 (3), 142-153 (2018).
  36. Ma, R., et al. Animal models of cerebral ischemia: A review. Biomedicine and Pharmacotherapy. 131, 110686(2020).
  37. Bromage, D. I., et al. Remote ischaemic conditioning reduces infarct size in animal in vivo models of ischaemia-reperfusion injury: a systematic review and meta-analysis. Cardiovascular Research. 113 (3), 288-297 (2017).
  38. Kalogeris, T., Baines, C. P., Krenz, M., Korthuis, R. J. Cell biology of ischemia/reperfusion injury. International Review of Cell and Molecular Biology. 298, 229-317 (2012).
  39. Hogers, B., DeRuiter, M. C., Baasten, A. M., Gittenberger-de Groot , A. C., Poelmann, R. E. Intracardiac blood flow patterns related to the yolk sac circulation of the chick embryo. Circ Res. 76 (5), 871-877 (1995).
  40. Rezzola, S., et al. angiogenesis-inflammation cross talk in diabetic retinopathy: novel insights from the chick embryo chorioallantoic membrane/human vitreous platform. Frontiers in Immunology. 11, 581288(2020).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Ischemia ReperfusionChick Embryo ModelIn Ovo ModelHook Ischemia ModelDoppler Blood FlowRight Vitelline ArteryWestern BlottingAutophagy MarkersInflammatory CytokinesApoptosis Pathways

Related Articles