В этой статье описывается моделирование ишемии-реперфузии (I / R) в 3-дневном эмбрионе цыпленка с использованием крючка, настроенного на спинальную иглу, чтобы лучше понять развитие и лечение I / R. Эта модель проста, быстра и недорога.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
* These authors contributed equally
В этой статье описывается моделирование ишемии-реперфузии (I / R) в 3-дневном эмбрионе цыпленка с использованием крючка, настроенного на спинальную иглу, чтобы лучше понять развитие и лечение I / R. Эта модель проста, быстра и недорога.
Расстройства ишемии и реперфузии (I / R), такие как инфаркт миокарда, инсульт и заболевания периферических сосудов, являются одними из ведущих причин болезни и смерти. Многие модели in vitro и in vivo в настоящее время доступны для изучения механизма I/R в заболевании или поврежденных тканях. Однако до настоящего времени не сообщалось о модели ovo I/R, что позволило бы лучше понять механизмы I/R и ускорить скрининг лекарств. В этой статье описывается моделирование I /R с использованием крючка спинальной иглы в 3-дневном эмбрионе цыпленка, чтобы понять механизмы развития и лечения I/R. Наша модель может быть использована для исследования аномалий на уровнях ДНК, РНК и белка. Этот метод прост, быстр и недорог. Текущая модель может использоваться независимо или в сочетании с существующими моделями I/R in vitro и in vivo .
Ишемия-реперфузионное повреждение тканей было связано с рядом патологий, включая сердечные приступы, ишемический инсульт, травмы и заболевания периферических сосудов1,2,3,4,5. В первую очередь это связано с отсутствием всестороннего понимания прогрессирования заболевания и отсутствием эффективной исследовательской модели. Ишемическое повреждение возникает, когда кровоснабжение определенного участка ткани прекращается. В результате ишемическая ткань в конечном итоге некротизируется, хотя скорость варьируется в зависимости от ткани. Следовательно, восстановление кровоснабжения может помочь смягчить ущерб. Однако в некоторых случаях было замечено, что реперфузия вызывает больше повреждений тканей, чем одна только ишемия6,7,8. Поэтому понимание молекулярных и клеточных механизмов ишемии-реперфузии требуется для разработки эффективного терапевтического вмешательства. В настоящее время не известно эффективного лечения I/R травм. Это несоответствие побудило к созданию новых экспериментальных моделей, начиная от моделей in vitro до in vivo, для решения существующей проблемы9,10,11,12,13.
Эмбрионы цыплят (Gallus gallus domesticus) широко используются в исследованиях из-за их простоты доступа, этической приемлемости, относительно большого размера (по сравнению с другими эмбрионами), низкой стоимости и быстрого роста14. Мы использовали эмбрион цыпленка в 72 ч развития для создания in ovo I/R путем окклюдирования и высвобождения правой вителлиновой артерии с помощью спинномозговой иглы. Мы назвали его моделью ишемии-реперфузии Hook-I/R (рисунок 1). Модель, используемая в этом исследовании, способна точно моделировать все последующие процессы, включая окислительные и воспалительные пути, которые часто связаны с повреждением I/R15,16,17.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Институциональный этический комитет по защите животных в Медицинском колледже и больнице Лакхнау Эры выпустил письменный отказ, в котором говорилось, что для проведения этих экспериментов не требуется официального разрешения в соответствии с Комитетом по контролю и надзору за экспериментами на животных (CPCSEA). Тем не менее, были соблюдены стандартные операционные процедуры, чтобы свести к минимуму любую возможность эмбрионального дистресса.
1. Подготовка буфера (таблица 1)
2. День 1
3. День 2
4. День 4
5. Лечение
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Метод допплеровской визуализации кровотока был использован для оценки эффективности нашей модели. Короче говоря, мы сравнили данные контрольной группы с данными из группы RVA, чтобы определить успех нашего творения. На рисунке 4A изображен типичный поток, связанный с контрольным животным, в то время как на рисунке 4B показаны результаты, полученные от RVA. Число 1-8 представляет различные события, связанные с фазами ввода-вывода. Вкратце числовые 1-3 соответству...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Целью исследований ишемии-реперфузии является создание терапевтических стратегий, которые предотвращают гибель клеток и способствуют выздоровлению29,30. Чтобы преодолеть существующие ограничения в исследованиях I/R, мы разработали модель эмбриона цыпленка Hook I/R для получения надежной и воспроизводимой модели I/R. Насколько нам известно, наша модель является первой I/R моделью, когда-либо созданной в 3-дневном эмбрионе цыпленка для рутинных экспериментов I/R, п...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.
Мы хотим выразить нашу признательность Шанкару за его критический вклад во время видеографии и монтажа, г-ну Бакеру Хуссейну за закадровый голос, г-ну Асгару Ризви за редактирование видео, г-ну Мохаммаду Хайдеру за видеосъемку, г-ну Мохаммаду Данишу Сиддики за помощь в ходе экспериментов.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| (-80° В) морозильная камера | Haier, Китай | - | |
| 1,5 мл Центрифужная трубка | TARSONS, Индия | 500010X | |
| 100 мм чашка Петри (стерильная) | Tarsons, Индия | 460050 | |
| 18G Игла (18G× 1,5 (в 1,25&раз; 38 мм) | Ramsons, Индия | 13990 | |
| мл Шприц | DISPO VAN-26G | ||
| игла (26G× 1/2 (10,45x13 мм) | DISPO VAN, Индия | 30722D | |
| 37° C инкубатор для яиц с регулируемым процентом влажности | Gentek, Индия | GL-100 | |
| 37° C лабораторный инкубатор | SCIENCE TECH, Индия | CB 101-14 | |
| 3-метиладенин (3-MA) | Sigma Aldrich, США | M9281 | |
| 3 мл пастбищный пипетка | TARSONS, Индия | 940050 | |
| 50 мл Стакан | TARSONS, | Индия-5 | |
| мл Шприц | DISPO VAN, Индия | IP53 | |
| 70% этанол | Merck Millipore, Соединенные Штаты | 64-17-5 | |
| Клейкая лента/виолончельная лента | Sunrise, | Индия-Праймеры | |
| Ambra1 | Applied Biosystems, Фостер-Сити, США Hs00387943_m1 | ||
| Технология передачи сигналов клеток IgG против мыши | , США | 7076S | |
| Anti-rabbit IgG | Jackson Immuno Research Laboratories, США | 711-035-152 | |
| Atg7 | R& D Systems, США | MAB6608 | |
| Atg7 праймеры | Applied Biosystems, Фостер-Сити, США | Hs00893766_m1 | |
| Автоклавная сумка | Tarsons, Индия | 550022 | |
| Автоклавная машина | местного производства, Лакхнау, | ||
| Proteintech, США | 66665-1-Ig | ||
| Beta Actin | ImmunoTag, США | ITT07018 | |
| Бычья сыворотка альбумин | Himedia, Мумбаи, Индия | TC194 | |
| Хлорид кальция | Himedia, Мумбаи, Индия | GRM534 | |
| Каталаза | ImmunoTag, США | ITT5155 | |
| Чистящие салфетки | Kimberly-Clark, Индия | 370080 | |
| Расщепленная каспаза3 | ImmunoTag, США | ITT07022 | |
| ди-натрия гидрофосфат гептагидрат | Himedia, Мумбаи, Индия | GRM39611 | |
| допплеровский расходомер крови | Moors instrument, Великобритания | moorVMS-LDF1 | |
| Egg rack | -- | ||
| Egg rack | - | ||
| GAPDH | ImmunoTag, США | M1000110 | |
| GAPDH праймеры | Applied Biosystems, Фостер-сити, США | ||
| Glycine | Himedia, Мумбаи, Индия | MB013 | |
| Почечный лоток | HOSPITO-LC3A | ||
| /B | Технология клеточной сигнализации, США | лаборатории 4108S | |
| Methanol | Rankem, Мумбаи, Индия | M0252 | |
| Микроманипулятор | Narishige, Япония | M-152 | |
| N-ацетил-L-цистеин (NAC) | Sigma Aldrich, США | A7250 | |
| Naringenin | Sigma Aldrich, США | 67604-48-2 | |
| NF-kβ | Thermo Fisher Scientific, США | 51-0500 | |
| NLRP3 | ImmunoTag, США | ITT07438 | |
| Плоскогубцы для носа | местного производства, Лакхнау, | ||
| щипцы | Stoelting, Германия | 52106-40 | |
| Хирургические инструменты для глазной оболочки глаза | , Джайпур, Индия | Hard Age Vannas Микроножницы под углом 8 см / 3 1/8 " | |
| OHP маркер | Camlin, | ||
| ImmunoTag, США | ITT08329 | ||
| Ножницы с острым краем | Stoelting, Германия | 52132-11 | |
| Хлорид калия | Himedia, Мумбаи, Индия | MB043 | |
| Фосфат калия одноосновной безводный | Himedia, Мумбаи, Индия | MB050 | |
| Ингибитор протеазы | Abcam, США | Ab65621 | |
| SOD-1 | ImmunoTag, США | ITT4364 | |
| Хлорид натрия | Fisher Scientific, Мумбаи, Индия | 27605 | |
| Додецилсульфат натрия | Himedia, Мумбаи, Индия | Спинальная игла GRM886 | |
| 25GA; 3,50 ДЮЙМА (90,51 X 90 мм) | Рамсон, Индия | GS-2029 | |
| Стерео Зум хирургический микроскоп | Olympus, Япония | SZ2-STU3 | |
| Отброс шприцев | BIOHAZARD | 882210 | |
| Зубчатые щипцы | Stoelting, Германия | 52102-30 | |
| Tris Base | G Biosciences, США | RC1217 | |
| Tris Соляная кислота | Himedia, Мумбаи, Индия | MB030 | |
| Tween 20 | G Biosciences, Соединенные Штаты | RC1227 | |
| Курица Белый Леггорн 0-дневные яйца | - | ||
| -Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK | MP Biomedicals, LLC, США | FK009 |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.