Это пошаговое руководство по использованию коммерчески доступной ротационной системы культивирования клеток для культивирования лимфоцитов в условиях имитации микрогравитации с использованием специализированных одноразовых сосудов для культивирования. Этот метод культивирования может быть применен к любой культуре клеток суспензионного типа.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Культивирование лимфоцитов в условиях смоделированной микрогравитации с использованием роторной системы культивирования клеток
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Учитывая текущие ограничения проведения биологических исследований в космосе, существует несколько вариантов воздействия на клеточную культуру смоделированной микрогравитации (SMG) на Земле. Эти варианты различаются по своим методам, принципам и пригодности для использования с культурой суспензионных клеток. Здесь описан метод культивирования клеток для воздействия на лимфоциты смоделированной микрогравитации с использованием коммерчески доступной ротационной системы культивирования клеток, также известной как 2D-клиностат или устройство с вращающейся стенкой (RWV). Этот метод культивирования клеток использует принцип усредненного по времени обнуления вектора гравитации для имитации микрогравитации путем вращения клеток вокруг горизонтальной оси. Клетки, культивируемые в этой системе, могут быть собраны и использованы во многих различных экспериментальных анализах для оценки влияния моделируемой микрогравитации на клеточную функцию и физиологию. Метод культивирования может незначительно варьироваться в зависимости от используемого типа клеток или линии, но описанный здесь способ может быть применен к любой культуре клеток суспензионного типа.
Введение
Было показано, что космический полет влияет на многие аспекты физиологии человека, включая иммунную систему. Многие исследования продемонстрировали доказательства иммунной дисрегуляции в результате космического полета in vivo и воздействия моделируемой микрогравитации (SMG) in vitro1,2,3,4. Одним из основных аспектов космической среды, влияющих на физиологию человека, является микрогравитация. Микрогравитация относится к «невесомости», испытываемой из-за низких гравитационных сил в космической среде
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Следующие шаги должны быть выполнены внутри стерильного шкафа биологической безопасности.
1. Подготовка сосудов для культивирования клеток
- Достаньте сосуды для культивирования из пластиковой упаковки. Маркируйте каждый сосуд на ободе в соответствии с тем, какой тип/линия клеток используется, будь то контроль (1G) или обработка (SMG), а также любая другая соответствующая информация.
- Стабилизируйте сосуд и осторожно откройте заливное отверстие, не касаясь колышка/уплотнительного кольца крышки заливного порта. Поместите колпачок на прокладку для этанола колышком / уплотнительным кольцом вверх, п....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Этот метод культивирования считается успешным, если: 1) пролиферация клеток приблизительно одинакова в контрольных группах (и в идеале во всех экспериментальных группах), 2) пролиферация подходящая, учитывая плотность посева, продолжительность обработки и время удвоения типа/линии клеток, и 3) жизнеспособность собранных клеток составляет 85% или выше (таблица 1 ). В идеале полученные клетки должны быть такими же здоровыми, как и в стандартной клеточной культуре, особенно для использования в последующих э.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
По мере того, как человечество готовится к более длительным космическим миссиям на Луну и Марс, необходимо провести дополнительные исследования, чтобы снизить серьезные риски для здоровья астронавтов. Одним из основных аспектов космической среды, влияющих на физиологию человека, является микрогравитация. Здесь был описан метод культивирования клеток для подвергания лимфоцитов SMG с использованием коммерчески доступной системы ротационных клеточных культур.
Этот протокол содержит несколько важн.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Конфликт интересов у авторов отсутствует.
Благодарности
Эта работа поддержана Канадским космическим агентством (CSA), исследовательский грант (17ILSRA3, Immuno Profile). Авторы выражают признательность и благодарность доктору Роксане Фурнье (Университет Торонто), доктору Рэндалу Греггу (Мемориальный университет Линкольна) и Претишу Милабатуле (Университет Аризоны) за их помощь в первоначальном устранении неполадок этого протокола.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Одноразовый сосуд с высоким аспектным отношением (HARV) (10 мл) | Synthecon | D-410 | Gamma (4/коробка) |
| Шприцы с наконечником Luer-Lok (3 мл) | BD | 309657 | Для присоединения к 10 мл HARVs |
| NK92 Cell-line | ATCC | CRL-2407 | |
| Ротационная система для культивирования клеток (RCCS) | для вращающихся стенок Synthecon | RCCS-4D | |
| Конические пробирки Sarsedt 15 мл | Fisher Scientific | 50-809-220 | |
| Конические пробирки Sarsedt 50 мл | Fisher Scientific | 50-809-218 | |
| Стерильные серологические пипетки Sarsedt | Fisher | Scientific 86.1254.001 | |
| T25 колбы для культуры суспензии | Sarsedt | 83.3910.502 | Для контроля колб |
Ссылки
- ElGindi, M., et al. May the force be with you (or not): the immune system under microgravity. Cells. 10 (8), 1941(2021).
- Choukèr, A., Ullrich, O. The Immune System in Space: Are we Prepared. , Springer International Publishing. Cham. (2016).
- Crucian, B. E., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
