Методическая статья

Модифицированная методика использования неонатальных мышиных сердец в препарате Лангендорфа

DOI:

10.3791/63349

⸱

4 марта 2022 г.

 , 
1Department of Anesthesiology, Vanderbilt University Medical Center, 2Department of Anesthesiology, Columbia University Medical Center

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Настоящий протокол описывает канюляцию аорты и ретроградную перфузию неонатального мышиного сердца ex-vivo . Стратегия двух человек, использующая рассекающий микроскоп и притупленную маленькую калибровочную иглу, позволяет надежно каннюляцию. Количественная оценка продольного сократительного напряжения достигается с помощью силового преобразователя, подключенного к вершине левого желудочка.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Использование ретроградного перфузированного сердца ex-vivo уже давно является краеугольным камнем исследования ишемии-реперфузии с момента его разработки Оскаром Лангендорфом более века назад. Хотя этот метод применялся к мышам в течение последних 25 лет, его использование у этого вида было ограничено взрослыми животными. Разработка успешного метода последовательного каннуляции неонатальной мышиной аорты позволила бы систематически изучать изолированное ретроградное перфузированное сердце в критический период развития сердца у генетически модифицируемых и недорогих видов. Модификация препарата Лангендорфа позволяет канюляцию и установление реперфузии в неонатальном мышином сердце при минимизации ишемического времени. Оптимизация требует метода двух человек, чтобы обеспечить успешную канюляцию аорты новорожденной мыши с использованием рассекающего микроскопа и модифицированной коммерчески доступной иглы. Использование такого подхода позволит надежно установить ретроградную перфузию в течение 3 мин. Поскольку хрупкость сердца неонатальной мыши и размер полости желудочков препятствует прямому измерению внутрижелудочкового давления, создаваемого с помощью баллона, необходимо использовать датчик силы, соединенный швом с вершиной левого желудочка для количественной оценки продольного сократительного напряжения. Этот метод позволяет исследователям успешно установить изолированный ретроградно-перфузированный препарат сердца новорожденных мышей с постоянным потоком, что позволяет изучать биологию развития сердца ex-vivo . Важно отметить, что эта модель станет мощным инструментом для исследования физиологических и фармакологических реакций на ишемию-реперфузию в неонатальном сердце.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Сердечные препараты Ex-vivo были основным продуктом физиологических, патофизиологических и фармакологических исследований на протяжении более века. Основываясь на работе Элиаса Сайона в 1860-х годах, Оскар Лангендорф адаптировал изолированную модель лягушки для ретроградной перфузии, создавая давление на корень аорты, чтобы обеспечить коронарный поток насыщенным кислородом перфусатом1. Используя свою адаптацию, Лангендорф смог продемонстрировать корреляцию между коронарным кровообращением и механической функцией2. Ретроградное перфузированное сердце ex-vivo, позже одноименное названное техникой Лангендо....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Институциональный комитет по уходу за животными и их использованию Медицинского центра Колумбийского университета получил одобрение для всех описанных методов. Для исследования использовались дикие самцы мышей C57Bl/6 послеродового дня 10.

1. Подготовка аппарата Лангендорфа

  1. Чтобы свести к минимуму сложность, используйте нерециркуляционный оксигенированный перфусат в аппарате Лангендорфа (см. Таблицу материалов) через постоянный поток или постоянное давление.
    1. Используйте буфер Кребса-Генселеита (KHB), содержащий 120 ммоль/л NaCl, 4,7 ммоль/л KCl, 1,2 ммоль/л MgSO4, 1,2 м....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мыши P10 использовались для моделирования временной точки в младенчестве человека 26,27. Пятнадцать изолированных сердец новорожденных мышей C57Bl/6 были собраны и успешно каннулированы. Сердца перфузировали непрерывным потоком 2,5 мл мин-1 нагретого насыщенного кислородом KHB. Были измерены метаболические параметры, включая экстракцию глюкозы, потребление кислорода, выработку лактата и физиологические параметры, такие как частота сердечных сокращений,.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Настоящая работа описывает успешную канюляцию аорты и ретроградную перфузию в изолированном сердце новорожденной мыши. Важно отметить, что это позволяет исследователям преодолеть барьеры, которые молодой мышиный возраст и небольшой размер сердца ранеепредставляли 8. Хотя этот подход не является сложным в дизайне, он требует значительной степени технических навыков. Ключевыми шагами, которые неизбежно бросят вызов даже самым технически опытным исследователям, будут канюляция аорты и закрепление кан.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NIH/NINDS R01NS112706 (R.L.)

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Аппарат для грызунов LangendorffRadnoti130102EZ
24 G катетерBD381511
26 G игла на шприц 1 мл комбоBD309597
26 G стальная иглаBD305111
5-0 шелковый шовный материалEthiconS1173
Bio AmpADInstrumentsFE135
Bio CableAdinstrumentsMLA1515
CaCl2Sigma-AldrichC4901-100G
Циркуляционная нагревательная вода BathHaakeDC10
изогнутые ирисовые ножницыMedlineMDS10033Z
препарирующий микроскопNikonSMZ-2B
найти пружинные ножницыKentПреобразователь силы INS600127
КондиционерыMLT1030/D
глюкозаSigma-AldrichG8270-100G
ГепаринАгент400-01
Трубка высокого давленияEdwards Lifesciences50P184
Щипцы для повязки на радужную оболочку глазаKentINS650915-4
Ювелирный стиль изогнутый мелкие щипцыMiltex17-307-MLTX
KClSigma-AldrichP3911-25G
KH2PO4Sigma-AldrichP0662-25G
MgSO4Sigma-AldrichM7506-500G
NaClSigma-AldrichS9888-25G
NaHCO3Sigma-AldrichS6014-25G
Роликовый насосGilsonMinipuls 3
прямые ножницы для пресеченияKentINS600393-G
Временная проводка для кардиостимуляцииEthiconTPW30
Широкий диапазон силовых преобразователейИнструментыMLT1030/A

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bell, R., Mocanu, M., Yellon, D. Retrograde heart perfusion: The Langendorff technique of isolated heart perfusion. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).
  2. Skrzypiec-Spring, M., Grotthus, B., Szeląg, A., Schulz, R.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи