Энтомопатогенные грибковые колонии выделяют из образцов тропической почвы с помощью приманки Tenebrio , приманки Galleria , а также селективной искусственной среды, т. е. агара декстрозы картофеля, обогащенного дрожжевым экстрактом, дополненным хлорамфениколом, тиабендазолом и циклогексимидом (среда CTC).
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Сравнение методов выделения энтомопатогенных грибов из образцов почвы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Целью настоящего исследования является сравнение эффективности использования приманок от насекомых с искусственной селективной средой для выделения энтомопатогенных грибов (EPF) из образцов почвы. Почва является богатой средой обитания для микроорганизмов, в том числе EPF, особенно принадлежащих к родам Metarhizium и Beauveria, которые могут регулировать вредителей членистоногих. Биопрепараты на основе грибов доступны на рынке в основном для борьбы с вредителями сельскохозяйственных членистоногих. Тем не менее, несмотря на высокое эндемичное биоразнообразие, лишь немногие штаммы используются в коммерческих биопродуктах во всем мире. В настоящем исследовании 524 образца почвы были выращены на агаре декстрозы картофеля, обогащенном дрожжевым экстрактом, дополненным хлорамфениколом, тиабендазолом и циклогексимидом (среда CTC). Рост колоний грибов наблюдался в течение 3 недель. Все Metarhizium и Beauveria EPF были морфологически идентифицированы на уровне рода. Кроме того, некоторые изоляты были молекулярно идентифицированы на уровне видов. Двадцать четыре из этих 524 образцов почвы были также исследованы на предмет появления EPF с использованием метода приманки для насекомых (Galleria mellonella и Tenebrio molitor). В общей сложности 51 штамм EPF был выделен (41 Metarhizium spp. и 10 Beauveria spp.) из 524 образцов почвы. Все грибковые штаммы были выделены либо из пахотных земель, либо из лугов. Из 24 образцов, отобранных для сравнения, 91,7% были положительными на EPF с использованием приманки Galleria , 62,5% с использованием приманки Tenebrio и 41,7% с использованием CTC. Наши результаты показали, что использование приманок для насекомых для изоляции EPF от почвы более эффективно, чем использование среды CTC. Сравнение методов изоляции в дополнение к идентификации и сохранению EPF оказывает положительное влияние на знания о биоразнообразии. Улучшение коллекции EPF поддерживает научное развитие и технологические инновации.
Введение
Почва является источником нескольких микроорганизмов, в том числе энтомопатогенных грибов (EPF). Эта конкретная группа грибов признана по их способности колонизировать и часто убивать членистоногих хозяев, особенно насекомых1. После выделения, характеризации, отбора вирулентных штаммов и регистрации EPF массово производятся для борьбы с членистоногими вредителями, что подтверждает их экономическую значимость2. Соответственно, выделение EPF считается первым шагом к разработке биопестицида. Beauveria spp. (Hypocreales: Cordycipitaceae) и Metarhizium spp. (Hypocreales: Clavicipitaceae) являются наиболее ра....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Поскольку в настоящем исследовании был получен доступ к бразильскому генетическому наследию, исследование было зарегистрировано в Национальной системе управления генетическим наследием и связанными с ним традиционными знаниями (Sisgen) под кодом AA47CB6.
1. Отбор проб почвы
- Соберите 800 г почвы (с вторичными корнями растений или без них) на глубину до 10 см с помощью небольшой лопаты. Храните их в полипропиленовых мешках при комнатной температуре до начала эксперимента.
ПРИМЕЧАНИЕ: Небольшие корни также могут быть собраны, поскольку СООБЩАЕТСЯ, что EPF обладают компетенцией в ризосфере. Чем быстрее обработка об....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
В общей сложности 524 образца почвы были взяты с лугов: пастбищ скота (165 образцов), местных тропических лесов (90 образцов), берега озера (42 образца) и культивируемых / пахотных земель (227 образцов) в период с 2015 по 2018 год в штате Рио-де-Жанейро, Бразилия. Подробная информация о географических координатах проб, положительных на EPF, приведена в дополнительной таблице 1.
Из 524 образцов почвы 500 образцов были проанализированы только с использованием среды CTC, а 24 обр.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Естественные и сельскохозяйственные почвенные среды обитания являются типичными средами для EPF22 и отличным природным резервуаром. В настоящем исследовании рассматривались два метода изоляции EPF с использованием приманок от насекомых по сравнению с селективной средой. Первым шагом для изоляции является сбор образцов почвы. Правильное хранение и идентификация образцов почвы имеют решающее значение. Информация о широте, долготе, типе почвы и биоме имеет важное значение для исследований, связанных .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов.
Благодарности
Это исследование было частично профинансировано Coordenacão de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) из Бразилии, финансовый код 001, Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ) (номер проекта E-26/010.001993/2015), и Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) из Бразилии.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Автоклав | Phoenix Luferco | 9451 | |
| Шкаф биобезопасности | Airstream ESCO | AC2-4E3 | |
| Хлорамфеникол | Sigma-Aldrich | C0378 | |
| Климатические камеры | Eletrolab | EL212/3 | |
| Coverslip | RBR | 3871 | |
| Циклогексимид | Sigma-Aldrich | C7698 | |
| Дригальский шпатель | Мариенфельд | 1800024 | |
| GPS приложение | Геолокация приложение | 2.1.2005 | |
| Лактофенол синий раствор | Sigma-Aldrich | 61335 | |
| Микроскоп | Zeiss Axio star plus | 1169 149 | |
| Микроскоп камера | Zeiss Axiocam 105 цвет | 426555-0000-000 | |
| Микроскоп софтвер | Zen lite Zeiss 3.0 | ||
| Предметное стекло для микроскопа | Olen | k5-7105-1 | |
| Микротрубка | BRAND | Z336769-1PAK | |
| Пластины Петри | Kasvi | K30-6015 | |
| Наконечник для пипетки | Vatten | VT-230-200C/VT-230-1000C | |
| Pippette | HTL - Labmatepro | LMP 200 / LMP 1000 | |
| Пластиковые горшки | Prafesta descartá veis | 8314 | |
| Полипропиленовые мешки | Extrusa | 38034273/5561 | |
| Картофельная декстроза агар | Kasvi | K25-1022 | |
| Prism software 9.1.2 | Графическая площадка | ||
| Лопата | Tramontina | 77907009 | |
| Tenebrio mollitor | Safari | QP98DLZ36 | |
| Тиабендазол | Sigma-Aldrich | T8904 | |
| Tween 80 | Vetec | 60REAVET003662 | |
| Vortex | Biomixer | QL-901 | |
| Дрожжевой экстракт | Kasvi | K25-1702 |
Ссылки
- Roberts, D. W., St. Leger, R. J. Metarhizium spp., cosmopolitan insect-pathogenic fungi: Mycological aspects. Advances in Applied Microbiology. 54, 1-70 (2004).
- do Nascimento Silva, J., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
