Методическая статья

Быстрое пятно Гольджи для визуализации дендритного позвоночника в гиппокампе и префронтальной коре

DOI:

10.3791/63404

⸱

3 декабря 2021 г.

 , 
1Department of Science Education, Donald and Barbara Zucker School of Medicine at Hofstra/Northwell, 2Department of Psychology, Sacred Heart University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол описывает модификацию быстрого метода Гольджи, который может быть адаптирован к любой части нервной системы, для окрашивания нейронов в гиппокампе и медиальной префронтальной коре крысы.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Пропитка Гольджи с использованием набора окрашивания Гольджи с незначительными адаптациями используется для пропитки дендритных шипов в гиппокампе крыс и медиальной префронтальной коре. Этот метод является заметным улучшением по сравнению с предыдущими методами пропитки Гольджи, потому что предварительно смешанные химические вещества безопаснее в использовании, нейроны последовательно хорошо пропитываются, существует гораздо меньше фонового мусора, а для данной области существуют чрезвычайно небольшие отклонения в плотности позвоночника между экспериментами. Более того, мозг может накапливаться после определенного момента и храниться замороженным до дальнейшей обработки. С помощью этого метода можно изучить любую область мозга, представляющую интерес. После окрашивания и проскальзывания покрытия плотность дендритного позвоночника определяется путем подсчета количества шипов на длину дендрита и выражается в виде плотности позвоночника на 10 мкм дендрита.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Метод использования дихромата калия и нитрата серебра для маркировки нейронов был впервые описан Камилло Гольджи 1,2 и впоследствии использован Сантьяго Рамоном-и-Кахалем для получения огромного объема работы, дифференцирующей нейронные и глиальные подтипы. Недавно опубликованная книга с его иллюстрациями теперь доступна3. После исследований Рамона-и-Кахала, которые были опубликованы более 100 лет назад, было использовано очень мало пропитки Гольджи. Пропитка Гольджи – это трудоемкий процесс, позволяющий осуществлять трехмерную визуализацию нейронов с помощью светового микроскопа. На пр....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все экспериментальные процедуры одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию Университета Святого Сердца и соответствуют Руководству NIH по уходу за животными и их использованию.

1. Выделение и инфильтрация мозговой ткани

  1. Растворы премиксов А и В окрашивающего набора Golgi за 24 ч до использования и хранить в темных флаконах и/или в темноте. Внесите приблизительно 80 мл смеси раствора А и В, что достаточно для замены раствора через 24 ч. Хранить в герметичных бутылках.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Перфузия физиологическим раствором или параформальдегидом не требуется.
  2. Приносят в жертву....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Используя быстрый метод Гольджи, клетки последовательно хорошо пропитываются, так что есть много клеток для анализа. Это заметное улучшение по сравнению с предыдущими методами, где эксперименты должны были быть объединены, чтобы иметь достаточно данных для анализа. Таким образом, больше образцов может быть обработано одновременно, а мозг может храниться замороженным до обработки. Примеры пропитанных Гольджи клеток в области CA1 гиппокампа показаны с низкой и высокой мощностью на рисунке 3. П.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Настоящий протокол описывает метод пропитки Гольджи, позволяющий быстро одновременно обрабатывать многие срезы. Это улучшение по сравнению с ранее описанными5 более трудоемкими методами и последовательно дает пропитанные нейроны для анализа. Кроме того, существует меньшее воздействие токсичных химических веществ, используемых при пропитке Гольджи. Наиболее сложной частью процесса является то, чтобы секции были плоскими на слайдах, что требует значительной практики. Важно держать все как можно холо.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана Исследовательской инициативой студентов Университета Святого СердцаGrants.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Картонные слайды лоткиFisher Scientific12-587-10
Покровные стекла 24 х 60ммFisher Scientific12-545-M
FD Rapid GolgiStain kitFD NeurotechnologiesPK 401Стабильный при РТ в темноте месяцами; Набор для окрашивания Гольджи
Замораживающий спрейFisherScientific 23-022524
HISTO-CLEARFisher Scientific50-899-90147очищающий агент
NCSS SoftwareКейсвилл, Юта, США
PermountFisher ScientificSP-15-100монтажный материал
Superfrost Plus предметные стекла для микроскопаFisher Scientific12-550-15
Тканевое соединение Tek CTYO OCTFisher Scientific14-373-65Используется для крепления мозга на патроне криостата

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pannese, E. The Golgi Stain: invention, diffusion and impact on neurosciences. Journal of the History of the Neurosciences. 8 (2), 132-140 (1999).
  2. Bentivoglio, M., et al. The Original Histological Slides ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи