Методическая статья

Модель грызунов, индуцированная TNBS, для изучения патогенной роли механического стресса при болезни Крона

DOI:

10.3791/63499

⸱

1 марта 2022 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine, the University of Texas Medical Branch, 2Department of Pathology, the University of Texas Medical Branch

* These authors contributed equally

В этой статье

Уведомление об исправлении

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Настоящий протокол описывает развитие модели колита, подобной модели колита Крона, у грызунов. Трансмуральное воспаление приводит к стенозу в месте инстилляции ТНБС, а механическое увеличение наблюдается в сегменте, близком к стенозу. Эти изменения позволяют изучать механические нагрузки при колите.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), такие как болезнь Крона (БК), являются хроническими воспалительными заболеваниями желудочно-кишечного тракта, затрагивающими примерно 20 на 1 000 000 в Европе и США. CD характеризуется трансмуральным воспалением, фиброзом кишечника и люминальным стенозом. Хотя противовоспалительные методы лечения могут помочь контролировать воспаление, они не эффективны при фиброзе и стенозе при БК. Патогенез БК не совсем понятен. Текущие исследования сосредоточены в основном на описании механизмов дисрегулируемого иммунного ответа кишечника. В то время как CD-ассоциированное трансмуральное воспаление, фиброз кишечника и люминальный стеноз представляют собой механическое напряжение для стенки кишечника, роль механического напряжения при CD четко не определена. Чтобы определить, играет ли механическое напряжение независимую патогенную роль в БК, был разработан протокол модели CD-подобного колита, вызванной TNBS, у грызунов. Эта модель трансмурального воспаления и фиброза, вызванная TNBS, напоминает патологические признаки CD в толстой кишке. Он индуцируется интраколонической инстилляцией TNBS в дистальную толстую кишку взрослых крыс Sprague-Dawley. В этой модели трансмуральное воспаление приводит к стенозу в месте инстилляции TNBS (сайт I). Механическое растяжение наблюдается в участке, расположенном ближе к месту инстилляции (участок Р), представляя собой механическое напряжение, но не видимое воспаление. Кишечная часть дистальнее воспаления (участок D) не представляет ни воспаления, ни механического напряжения. Наблюдались отличительные изменения экспрессии генов, иммунного ответа, фиброза и роста гладких мышц на разных участках (P, I и D), что подчеркивает глубокое воздействие механического напряжения. Таким образом, эта модель CD-подобного колита поможет нам лучше понять патогенные механизмы CD, в частности, роль механического стресса и механической экспрессии генов, вызванной стрессом, в иммунной дисрегуляции, кишечном фиброзе и ремоделировании тканей в CD.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), включая язвенный колит (UC) и болезнь Крона (CD), характеризуются хроническим воспалением в желудочно-кишечном тракте (GI). Он затрагивает ~1-2 миллиона американцев1. Предполагаемые ежегодные расходы на лечение ВЗК в США составляют 11,8 миллиарда долларов. В отличие от UC, CD характеризуется трансмуральным воспалением и стриктурным образованием 2,3. Стриктурное образование (стеноз) встречается у 70% больных БК3 и может быть вызвано трансмуральным воспалением (воспалительный стеноз) или фиброзом кишечника (фиброзным стенозом)4,5. Фиброз кишечника характеризуется чрезмерным отложением коллагена и других внеклеточных матриц (ECM) с гладкомышечными клетками (SMC) как одним из основных типов мезенхимальных клеток, участвующих в процессе 3,4. Гиперплазия гладкой мускулатуры, связанная с гипертрофией, является еще одним значительным гистологическим изменением фиброзного стеноза в CD6. Хотя образование стриктуры при БК связано с хроническим воспалением, никакое противовоспалительное лечение не является эффективным, за исключением хирургического лечения 2,6. Однако послеоперационные рецидивы составляют почти 100%, при наличии достаточного времени 2,7. Как воспалительная реакция, фиброз и гиперплазия SMC могут также развиваться при невоспалительных состояниях (т.е. непроходимости кишечника) в кишечнике 8,9; считается, что в формировании стриктуры участвуют как воспаление зависимые, так и независимые механизмы 3,4. Учитывая, что обширные исследования воспалительных механизмов не привели к какой-либо эффективной терапии образования стриктур, необходимы исследования возможной роли независимых от воспаления механизмов в кишечном фиброзе.

Как невоспалительный фактор, механическое напряжение (РС), связанное с отеком, воспалительной инфильтрацией клеток, деформацией тканей, фиброзом и стенозом 10,11,12,13, обычно встречается при ВЗК, особенно БК, который характеризуется трансмуральным воспалением. Механическое напряжение наиболее примечательно при стенозивном БК, где стеноз (воспалительный или фиброзный) в месте воспаления представляет собой механическое напряжение в местной ткани и приводит к растяжению просвета в сегменте, близком к местуобструкции 10,14. Предыдущие исследования in vitro показали, что механическое напряжение изменяет экспрессию генов специфических медиаторов воспаления (например, ЦОГ-2, IL-6)8,14,15 и факторов роста (т.е. TGF-β) в тканях желудочно-кишечного тракта, особенно в гладкомышечных клетках кишечника (SMC)16. Недавние исследования также показали, что экспрессия специфических профиброзных медиаторов, таких как фактор роста соединительной ткани (CTGF), очень чувствительна к механическому напряжению17,18. Было выдвинуто предположение, что механическое напряжение может играть независимую патогенную роль в CD-ассоциированном воспалении, фиброзе и ремоделировании тканей. Тем не менее, патогенное значение механического стресса при воспалении кишечника, фиброзе и гиперплазии гладких мышц при БК остается в значительной степени неисследованным. Это может быть отчасти потому, что воспаление является более заметным и лучше изученным процессом, чем механическое воздействие. Что еще более важно, не было четко определенной животной модели ВЗК, чтобы отличить эффект механического стресса от эффекта воспаления.

В настоящей работе описана грызуновая модель кроноваподобного колита, индуцированного интраколонизацией гаптен-реагента 2,4,6-тринитробензоловой сульфоновой кислоты (TNBS)19,20, который может служить целью изучения роли механического напряжения в CD. Установлено, что инстилляция ТНБС индуцировала локализованное (~2 см в длину) трансмуральное воспаление с сужением просвета (стенозом) в дистальной части толстой кишки. Стеноз приводит к выраженному растяжению кишечника (механическому напряжению)14,15, но не видимому воспалению в сегменте толстой кишки, близком к месту инстилляции. Напротив, сегмент толстой кишки дистальнее места стеноза не представляет ни воспаления, ни механического напряжения. Значительные сайт-специфические изменения в экспрессии генов, воспаление, фиброз и гиперплазия SMC наблюдались в трех разных участках. Результаты показывают, что механическое напряжение, особенно механическая экспрессия генов, вызванная стрессом, может играть решающую роль в развитии фиброза и гиперплазии при колите Крона.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты на животных проводились в соответствии с институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию Медицинского отделения Техасского университета (#0907051C). Для исследования использовались самцы или самки крыс Sprague-Dawley, ~ 8-9 недель.

1. Подготовка животных

  1. Быстрые крысы в течение 24 ч и обрабатывают их слабительным (очищающим средством для кишечника, см. Таблицу материалов) на ночь.
  2. На следующий день обезболивают крыс с помощью анестезиологической системы (см. Таблицу материалов), подвергая их воздействию 2% изофлурана вместе с 1 л/мин кислорода во время введения TNBS. Проверьте наличие рефлексов или защемления пальцев ног, чтобы подтвердить анестезию.
  3. Приготовьте свежий раствор TNBS в соответствии с массой тела.
    ПРИМЕЧАНИЕ: TNBS - 65 мг/кг массы тела в 250 мкл 40% этанола.
  4. Поставьте крыс в лежачее положение на столе для анестезии. Чтобы вызвать колит, вставьте через анус медицинский полиуретановый катетер открытого класса на ~ 7-8 см от анальной грани и осторожно закапывают TNBS (подготовленный на этапе 1.3) в толстую кишку19. Вводите фиктивным контрольным крысам только с 250 мкл физиологического раствора.
  5. После закапывания TNBS или физиологического раствора держите крыс в лежачем и слегка опущенном положении (~ 30 °), с закрытым анусом в течение 2 минут, чтобы помочь распределению TNBS и избежать разливов.
  6. Обеспечьте крыс пищей и водой ad libitum в течение 7 дней и ежедневно наблюдайте за массой тела, потреблением пищи, калом и общим состоянием здоровья.

2. Тканевые препараты

  1. В день эвтаназии усыпляют крыс с помощью ингаляцииСО2 и подтверждают эвтаназию с вывихом шейки матки.
  2. Откройте брюшко крысы с помощью хирургических ножниц и щипцов.
  3. Осторожно удалите всю толстую кишку (над анальным каналом) и немедленно перенесите толстую кишку в ледяной буфер HBSS 1x.
  4. Выпрямите двоеточие в буфере и измерьте длину двоеточия с помощью линейки. Возьмите нейлоновую нить и обведите вокруг толстой кишки, чтобы измерить внешнюю окружность сегментов толстой кишки в контроле и крысах, обработанных TNBS. Возьмите ткани полной толщины для гистологии.
  5. Разрежьте толстую кишку вдоль брыжеечной доски и хорошо очистите толстую кишку буфером HBSS. Оцените оценку толстой кишки для макроскопического воспаления на основе критериев, какописано ранее 19 с минимальными изменениями.
    ПРИМЕЧАНИЕ: 0 = нормальная слизистая оболочка; 1 = локализованная гиперемия, но без эрозий или язв; 2 = язва и стеноз (пораженный участок < 5 мм); 3 = тяжелая язва, рубец и стеноз (пораженный участок > 5 мм).
  6. Соберите образцы ткани толстой кишки из участка P (часть 2-3 см до орального края участка воспаления), участка I (место воспаления, обычно в 4-6 см от конца толстой кишки, куда закапывается TNBS) и участка D (часть 1-2 см дистальнее аборального края участка воспаления), соответственно у крыс, обработанных TNBS.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Ткань толстой кишки ~1-2 см длиной была взята из каждого сегмента. Кроме того, ткани толстой кишки длиной 2 см (~ 4-6 см от конца толстой кишки) крыс, обработанных физиологическим раствором, были взяты в качестве фиктивного контроля (S) (Рисунок 1).
  7. Берут образцы тканей с каждого участка для подготовки полной толщины, а при желании – слои слизистой оболочки/подслизистой и мускулистой наружной оболочки соответственно, а также21,22.
  8. Сначала заморозьте образцы тканей в жидком азоте, прежде чем хранить их при -80 °C для хранения до одного года и для будущих целей (т.е. препаратов РНК).

3. Гистопатологическая оценка воспаления кишечника и фиброза

  1. Зафиксируют ткани толстой кишки полной толщины в 10% формалине в течение 48 ч, затем переводят на 70% этанол в течение 24-48 ч.
  2. Используйте микротом для вырезания парафиновых срезов толщиной 5 мкм для гематоксилина и эозина (H&E) и трихромовых пятен Массона 6,19,23 (см. Таблицу материалов) соответственно.
  3. Получайте и просматривайте изображения с помощью вертикального микроскопа, оснащенного камерой высокого разрешения с совместимым программным обеспечением (см. Таблицу материалов).
  4. Оценка индексов воспаления и фиброза двумя независимыми исследователями, включая желудочно-кишечного хирургического патологоанатома в соответствии с критериями, описанными ранее 6,23 с изменениями. Оценки см. в дополнительном файле 1.
  5. Измерьте толщину и количество ячеек круговых и продольных мышечных слоев на поперечное сечение в четырех видах каждого окрашенного H&E образца и возьмите среднее значение четырех измерений для каждого образца.

4. Экстракция РНК и количественная ОТ-ПЦР

  1. Гомогенизировать иссеченные ткани толстой кишки, полученные из фиктивного контроля и трех участков (P, I, D) крыс с колитом TNBS в экстракционном реагенте набора для экстракции РНК (см. Таблицу материалов).
  2. Изолируйте РНК из каждого образца, используя набор. Элюируют гранулы РНК в 30 мкл рпазной воды.
  3. Количественная оценка концентрации РНК и проверка чистоты с помощью микрообъемного спектрофотометра UV-Vis (см. Таблицу материалов).
  4. Используйте 1 мкг общей РНК для синтеза кДНК21,22 с использованием набора синтеза РНК (см. Таблицу материалов).
  5. Анализируйте и количественно оценивайте уровни экспрессии генов, выполняя ПЦР в режиме реального времени с 50 нг кДНК в качестве шаблона, зондами IL-6 и CTGF с использованием коммерческого набора ПЦР для системы ПЦР в реальном времени (см. Таблицу материалов).
  6. Используйте контрольную рРНК гена 18S для нормализации образцов и количественной оценки относительной экспрессии генов, используя полученные значения Cq.

5. Статистический анализ

  1. Используйте программное обеспечение для статистического анализа (см. Таблицу материалов) для сравнения фиктивного контроля и крыс с колитом TNBS.
  2. Считать значение p < 0,05 статистически значимым15,19.
  3. Чтобы проверить различия между двумя группами, используйте t-тестовый анализ Student и выполните тест ANOVA, если сравнения более двух групп15,19.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Макроскопический взгляд на подобный колит Крона, индуцированный внутриколонной инстилляцией ТНБС
Как показано на рисунке 1, интраколоническая инстилляция ТНБС у крыс вызывала локализованное трансмуральное воспаление (~2 см в длину) с утолщенной стенкой кишечника и суженным просветом (стенозом) в месте закапывания в дистальной части толстой кишки (Рисунок 1А). Сайт инстилляции ТНБС называется сайтом I. В результате трансмурального воспаления и...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

TNBS-индуцированный колит был введен в 1989 году и с тех пор используется в качестве экспериментальной модели болезни Крона 19,20,23. Существенные особенности этой модели у грызунов включают развитие трансмурального воспаления, которое очень напоминает гистопатологические поражения, развившиеся при болезни Крона человека19,20. Предыдущие исследования модели были сосредот...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не сообщают о конфликте интересов и им нечего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа частично поддерживается грантами NIH (R01 DK124611 для XZS) и Министерства обороны США (W81XWH-20-1-0681 для XZS). Гистологические работы проводились с помощью Лаборатории хирургической патологии UTMB.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Управляющее программное обеспечение ACT-1 Ver2.63Сенсорный
C1000 с 96-луночным модулем быстрой реакцииBIO-RAD1851196
CFX96 Модуль оптических реакций для систем ПЦР в реальном времениBIO-RAD1845097
Dako Agilent Artisan Link Pro Специальный красительDakoAR310
Dako-Agilent Masson's Trichrome Kit ref# AR173DakoAR173
DXM1200 Цифровая цветная HR-камераNikonDXM1200
Eukaryotic 18S рРНК Эндогенный контрольThermoFisher Scientific4352930E
E-Z AnesthesiaE-Z Systems Inc.EZ-155
GraphPad Prism 9GraphPad9.0.2 (161)
Hard-Shell 96-луночные ПЦР-планшеты, низкопрофильные, тонкостенные, с юбкой, белый/прозрачныйBIO-RADHSP9601
HBSS (Corning Hank's Balanced Salt Solution, 1x без кальция и магния)CORNING21-021-CV
HM 325 MicrotomeThermo Scientific23-900-667
ИзофлуранПирамалNDC 66794-017-10
LI-COR Odyssey Цифровая система визуализацииLI-COR9120
Mastercycler epGradient Термоамплификатор с панелью управления 5340 ТермоамплификаторEppendorf5341
Медицинский открытый полиуретановый катетерCovidien8890703013
NanoDrop 2000/2000c СпектрофотометрыThermo Fisher ScientificND2000CLAPTOP
Nikon Eclipse E800 вертикальный микроскопNikonE800
нитроцеллюлоза/фильтровальная бумага бутерброды 50, 0,45 шт; m, 7 x 8,5 смBIO-RAD1620215
Полиэтиленгликоль 3350, осмотическое слабительноеMiralaxC8175Доза: 17г на 226 мл воды
RNeasy Mini Kit (250)
250 RNeasy Mini Spin Columns, Сборные пробирки (1,5 мл и 2 мл), Реагенты и буферы без РНКазы		QIAGEN74106
SuperScript III Система синтеза первой цепочкиThermoFisher Scientific18080051
TaqMan Анализ экспрессии генов Rn00573960_g1 зонда CTGFThermoFisher Scientific4331182
TaqMan Анализ экспрессии генов Rn99999011_m1 IL6 ProbeThermoFisher Scientific4331182
TaqMan Fast Advanced Master MixThermoFisher Scientific4444557
Tissue-Tek Prisma H& E Набор для окрашивания #1Sakura6190
Tissue-Tek Prisma Plus Automated Slide StainerSakura6171
TNBS (раствор пикрилсульфоновой кислоты)SIGMA-ALDRICH92822
термоамплификатор Nikon DXM1200F

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kappelman, M. D., et al. The prevalence and geographic distribution of Crohn's disease and ulcerative colitis in the United States. Clinical Gastroenterology and Hepatology. 5 (12), 1424-1429 (2007).
  2. Hwang, J. M., Varma, M. G. Surgery for inflammatory bowel disease. World Journal of Gastroenterology. 14 (17), 2678-2690 (2008).
  3. Latella, G., Rieder, F. Intestinal fibrosis: Ready to be reversed. Current Opinion in Gastroenterology. 33 (4), 239-245 (2017).
  4. Rieder, F., Fiocchi, C., Rogler, G. Mechanisms, management, and treatment of fibrosis in patients with inflammatory bowel diseases. Gastroenterology. 152 (2), 340-350 (2017).
  5. Bettenworth, D., et al. Assessment of Crohn's disease-associated small bowel strictures and fibrosis on cross-sectional imaging: A systematic review. Gut. 68 (6), 1115-1126 (2019).
  6. Chen, W., Lu, C., Hirota, C., Iacucci, M., Ghosh, S., Gui, X. Smooth muscle hyperplasia/hypertrophy is the most prominent histological change in Crohn's fibrostenosing bowel strictures: A semiquantitative analysis by using a novel histological grading scheme. Journal of Crohn's and Colitis. 11 (1), 92-104 (2017).
  7. Olaison, G., Smedh, K., Sjödahl, R. Natural course of Crohn's disease after ileocolic resection: Endoscopically visualised ileal ulcers preceding symptoms. Gut. 33 (3), 331-335 (1992).
  8. Lin, Y. M., Li, F., Shi, X. Z. Mechanical stress is a pro-inflammatory stimulus in the gut: In vitro, in vivo and ex vivo evidence. PLoS One. 9, 106242(2014).
  9. Gabella, G., Yamey, A. Synthesis of collagen by smooth muscle in the hyertrophic intestine. Experimental Physiology. 62 (3), 257-264 (1977).
  10. Katsanos, K. H., Tsianos, V. E., Maliouki, M., Adamidi, M., Vagias, I., Tsianos, E. V. Obstruction and pseudo-obstruction in inflammatory bowel disease. Annals of Gastroenterology. 23 (4), 243-256 (2010).
  11. Johnson, L. A., et al. Matrix stiffness corresponding to strictured bowel induces a fibrogenic response in human colonic fibroblasts. Inflammatory Bowel Disease. 19 (5), 891-903 (2013).
  12. Gayer, C. P., Basson, M. D. The effects of mechanical forces on intestinal physiology and pathology. Cell Signalling. 21 (8), 1237-1244 (2009).
  13. Cox, C. S., et al. Hypertonic saline modulation of intestinal tissue stress and fluid balance. Shock. 29 (5), 598-602 (2008).
  14. Shi, X. Z. Mechanical regulation of gene expression in gut smooth muscle cells. Frontiers in Physiology. 8, 1000(2017).
  15. Shi, X. Z., Lin, Y. M., Powell, D. W., Sarna, S. K. Pathophysiology of motility dysfunction in bowel obstruction: Role of stretch-induced COX-2. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 300 (1), 99-108 (2011).
  16. Gutierrez, J. A., Perr, H. A. Mechanical stretch modulates TGF-beta1 and alpha1(I) collagen expression in fetal human intestinal smooth muscle cells. American Journal of Physiology. 277 (5), 1074-1080 (1999).
  17. Lipson, K. E., Wong, C., Teng, Y., Spong, S. CTGF is a central mediator of tissue remodeling and fibrosis and its inhibition can reverse the process of fibrosis. Fibrogenesis Tissue Repair. 5, Supp 1 24(2012).
  18. Chaqour, B., Goppelt-Struebe, M. Mechanical regulation of the Cyr61/CCN1 and CTGF/CCN2 proteins. The FEBS Journal. 273 (16), 3639-3649 (2006).
  19. Shi, X. Z., Winston, J. H., Sarna, S. K. Differential immune and genetic responses in rat models of Crohn's colitis and ulcerative colitis. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 300 (1), 41-51 (2011).
  20. Antoniou, E., et al. The TNBS-induced colitis animal model: An overview. Annals of Medicine and Surgery (London). 11, 9-15 (2016).
  21. Shi, X. Z., Sarna, S. K. Gene therapy of Cav1.2 channel with VIP and VIP receptor agonists and antagonists: A novel approach to designing promotility and antimotility agents. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 295 (1), 187-196 (2008).
  22. Lin, Y. M., Sarna, S. K., Shi, X. Z. Prophylactic and therapeutic benefits of COX-2 inhibitor on motility dysfunction in bowel obstruction: Roles of PGE2 and EP receptors. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 302 (2), 267-275 (2012).
  23. Morris, G. P., Beck, P. L., Herridge, M. S., Depew, W. T., Szewczuk, M. R., Wallace, J. L. Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon. Gastroenterology. 96 (3), 795-803 (1989).
  24. Mudter, J., Neurath, M. F. Il-6 signaling in inflammatory bowel disease: Pathophysiological role and clinical relevance. Inflammatory Bowel Disease. 13 (8), 1016-1023 (2007).
  25. Geesala, R., Lin, Y. M., Zhang, K., Shi, X. Z. Targeting mechano-transcription process as therapeutic intervention in gastrointestinal disorders. Frontiers in Pharmacology. 12, 809350(2021).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Исправление

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Formal Correction: Erratum: A TNBS-Induced Rodent Model to Study the Pathogenic Role of Mechanical Stress in Crohn's Disease
Posted by JoVE Editors on 5/20/2022. Citeable Link.

An erratum was issued for: A TNBS-Induced Rodent Model to Study the Pathogenic Role of Mechanical Stress in Crohn's Disease. The Introduction and Protocol were updated.

The first sentence of the Introduction was updated from:

Inflammatory bowel diseases (IBD) such as Crohn's disease (CD) are chronic inflammatory disorders of the gastrointestinal tract affecting approximately 20 per 1,00,000 in Europe and USA. CD is characterized by transmural inflammation, intestinal fibrosis, and luminal stenosis.

to:

Inflammatory bowel diseases (IBD) such as Crohn's disease (CD) are chronic inflammatory disorders of the gastrointestinal tract affecting approximately 20 per 1,000,000 in Europe and USA. CD is characterized by transmural inflammation, intestinal fibrosis, and luminal stenosis.

Step 1.3 in the Protocol was updated from:

Prepare fresh TNBS solution according to body weights.
NOTE: TNBS - 65 mg/kg of body weight in 250 µL of 40% ethanol was used.

to:

Prepare fresh TNBS solution according to body weights.
NOTE: TNBS - 65 mg/kg of body weight in 250 µL of 40% ethanol/saline was used.

Теги

TNBS

Похожие статьи