Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Выделение врожденных лимфоидных клеток группы 2 из слизистой оболочки носа мыши для обнаружения экспрессии CD226

2.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/63525

⸱

10 мая 2022 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Otolaryngological Department of Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, 2Institute of Medical Research, Northwestern Polytechnical University, 3Orthopedic Department of Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, 4Department of Immunology, Fourth Military Medical University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Врожденные лимфоидные клетки группы 2 (ILC2), участвующие в воспалении 2 типа, в основном участвуют в реакции на гельминтозную инфекцию, аллергические заболевания, метаболический гомеостаз и восстановление тканей. В этом исследовании продемонстрирована процедура выделения ILC2 из слизистой оболочки носа мышей и обнаружения экспрессии CD226.

Аннотация

Благодаря многочисленным исследованиям врожденных лимфоидных клеток группы 2 (ILC2), опубликованным на протяжении многих лет, широко известно, что ILC2 участвуют в регуляции различных патологических процессов, включая иммунитет против гельминтов, восстановление тканей, термогенез и аутоиммунные заболевания, такие как астма и аллергический ринит (AR). ILC2 постоянно находятся в периферических тканях, таких как кожа, кишечник, легкие и носовая полость; Однако существует ограниченная информация об их точных функциях в иммунитете слизистой оболочки носа. CD226 представляет собой активирующую костимулирующую молекулу, в основном экспрессируемую на естественных клетках-киллеров (NK), Т-клетках и воспалительных моноцитах. Однако остается неизвестным, экспрессируют ли ILC2 CD226 или играют роль в патогенезе заболеваний, связанных с ILC2s. Здесь мы разработали метод выделения и идентификации ILC2 из слизистой оболочки носа и обнаружили экспрессию CD226 на ILC2, полученных от здоровых мышей и мышей с AR. В данной работе описан протокол выделения и идентификации ILC2 из слизистой оболочки носа мышей, который поможет исследовать внутренний патологический механизм иммунологических нарушений при заболеваниях слизистой оболочки носа.

Введение

Врожденные лимфоидные клетки группы 2 (ILC2) были впервые обнаружены в тканях брюшной полости мышей, и впоследствии было продемонстрировано, что они присутствуют в крови и других периферических тканях, таких как легкие, кожа и носовая полость 1,2,3. Как клетки, резидентные в тканях, ILC2 в основном поддерживаются и размножаются локально и функционируют как первые охранники, реагирующие на экзогенные вредные стимулы, продуцируя многочисленные цитокины типа 2 и индуцируя иммунитет типа2 4,5,6. ILC2 также могут оказывать свое воздействие, перемещаясь к инфицированным тканям 7,8.

Подобно клеткам Т-хелперов 2 (Th2), сложные регуляторные сети ILC2 обеспечивают их значительное участие в прогрессировании различных воспалительных заболеваний 2 типа, включая аллергические заболевания дыхательных путей 8,9. При астме аферины, полученные из эпителиальных клеток, могут активировать ILC2s, которые дополнительно способствуют воспалению легких за счет секреции интерлейкина (IL)-4, IL-5 и IL-1310. Клинические исследования также показали, что уровни ILC2 были значительно повышены в мокроте и крови пациентов с тяжелой астмой, что свидетельствует о связи ILC2 с тяжестью астмы и их функцией в качестве предиктора прогрессирования астмы11.

Аллергический ринит (АР) является распространенным хроническим воспалительным заболеванием, которое ежегодно поражает миллионы людей, и эффективные методы лечения этого заболевания ограничены12,13. ILC2 играют решающую роль в патофизиологии АР, будь то фаза сенсибилизации или генерация симптомов и фазавоспаления 14. Сообщалось, что у пациентов с АР уровни ILC2 в периферической крови повышены как локально, так и системно15. Тем не менее, некоторые эффекты и основные механизмы ILC2 на патофизиологию и прогрессирование AR все еще требуют дальнейшего изучения.

CD226 - трансмембранный гликопротеин, который служит костимулирующей молекулой - в основном экспрессируется на естественных клетках-киллеров (NK), Т-клетках и других воспалительных моноцитах16,17. Взаимодействие CD226 и его лигандов (CD155 и/или CD112) или конкурента (TIGIT) позволяет ему участвовать в биологических функциях различных иммунныхклеток18. Связывание лигандов на антигенпрезентирующих клетках с CD226 на цитотоксическом лимфоците (CTL) способствует активации обеих клеток одновременно, в то время как активация CTL может быть дополнительно подавлена TIGIT (Т-клеточный иммунорецептор с доменами Ig и ITIM), конкурентом CD22619,20. Исследование ex vivo на людях показало, что CD226 и CD155 на Т-клетках регулируют баланс между Th1 / Th17 и Th2 посредством дифференциально модулирующих подмножествTh 21. CD226 также может опосредовать адгезию тромбоцитов и убивающую опухоль NKактивность 22,23. Между тем, CD226 хорошо изучен в патогенезе различных инфекционных заболеваний, аутоиммунных заболеваний и опухолей 18,24,25. В настоящее время CD226 стал новым светлым пятном для иммунотерапии. Исследования показали, что внеклеточные везикулы могут обратить вспять экспрессию CD226 на NK-клетках, чтобы восстановить их цитотоксическую активность и вмешаться в прогрессирование рака легких26. Недавнее исследование выявило подкластер ILC 3-й группы кишечника плода, характеризующийся высокой экспрессией CD226 при секвенировании одноклеточной РНК27, что указывает на то, что CD226 может играть роль во врожденном иммунитете, опосредованном лимфоидными клетками.

Наши знания о ILC2 при воспалении дыхательных путей в основном основаны на исследованиях астмы; Однако мало что известно об их функциях в иммунитете слизистой оболочки носа. Таким образом, был создан протокол для выделения и идентификации ILC2 из слизистой оболочки носа. Исследование фокусируется на экспрессии CD226 на ILC2 в тканях носа и его вариациях между здоровыми мышами и мышами AR. Это может дать новое представление об основных механизмах ILC2-опосредованной регуляции местного иммунитета и послужить основой для разработки новых подходов к лечению AR.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты проводились в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных. Все процедуры и протоколы были одобрены Комитетом по этике научных исследований Четвертого военно-медицинского университета (No 20211008).

1. Создание модели Murine AR

  1. Размещайте самцов и самок мышей дикого типа (WT) C57BL/6 в возрасте 8-12 недель в определенных условиях, свободных от патогенов, и обеспечьте стандартную лабораторную пищу и воду.
  2. Эмульгируйте 50 мкг овальбумина (OVA) в 0,2 мл стерильного PBS, содержащего 2 мг гидроксида алюминия, на чистой скамье для поддержания стерильности. В дни 0, 7 и 14 внутрибрюшинно вводят самкам или самцам мышей по 50 мкг эмульгированной OVA.
  3. На 21-й, 22-й, 23-й, 24-й и 25-й дни интраназально закапывают мышам 50 мкг OVA, растворенных в 30 мкл стерильного PBS (15 мкл на ноздрю) под ингаляционной анестезией (2-3% изофлуран со скоростью потока кислорода или 0,5 л/мин).
  4. Усыпьте мышей через 24 часа после последнего испытания (26-й день).

2. Выделение мононуклеарных клеток (ТНК) из слизистой оболочки носа

  1. Усыпляют мышей вывихом шейки матки под глубоким наркозом. Замочите голову мышей в 75% этаноле на 5 минут и избегайте попадания этанола во внешнюю ноздрю. Положите живот вниз на операционный стол.
  2. Срежьте передние зубы. По средней линии головы сделайте надрез и разрежьте кожу ножницами.
  3. Удалите нижнюю челюсть, отрежьте весь нос вдоль конца неба и поместите ткань в 60-миллиметровую чашку Петри, содержащую 5 мл ледяного PBS. С помощью ножниц и щипцов удалите плоть и мышцы, прилипшие к костям.
  4. Перенесите нос мыши в новую чашку Петри диаметром 60 мм, содержащую 5 мл ледяного PBS. Дважды промойте кости 5 мл ледяного PBS.
  5. Перенесите нос в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл.
  6. Достаточно разбить и перенести нос в пробирку объемом 15 мл, содержащую 2 мл предварительно подогретого буфера для переваривания (среда RPMI 1640 с добавлением 1 мг/мл коллагеназы IV и 10 ЕД/мл ДНКазы I).
  7. Закройте крышку и поместите трубку вертикально в орбитальный шейкер при 37 ° C при непрерывном перемешивании при 120-150 об/мин в течение 40 мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Предварительно нагрейте буфер для переваривания до 37 °C для достижения максимальной активности ферментов.
  8. Добавьте 5 мл ледяной среды RPMI 1640, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS), чтобы остановить процесс пищеварения.
  9. Отфильтруйте через сетчатый фильтр для ячеек размером 70 мкм для удаления твердых фрагментов.
  10. Центрифугу при 500 x g в течение 5 мин, а затем аккуратно выбросьте надосадочную жидкость.
  11. Ресуспендировать гранулы в ледяной среде RPMI 1640 и центрифуге при 500 x g в течение 5 мин. Аккуратно выбросьте надосадочную жидкость.
  12. Ресуспендировать клеточную гранулу в 4 мл среды с градиентом плотности 40% (160 мкл 10x PBS + 1,44 мл исходного раствора среды с градиентом плотности + 2,4 мл среды RPMI 1640).
  13. Аккуратно вставьте пипетку Пастера на дно пробирки и медленно добавьте 2,5 мл среды с градиентом плотности 80% (200 мкл 10x PBS + 1,8 мл исходного раствора среды с градиентом плотности + 0,5 мл среды RPMI 1640).
  14. Установите скорость ускорения и замедления центрифуги ниже третьей передачи и центрифуги на уровне 400 x g в течение 15 мин при комнатной температуре (RT).
  15. Удалите верхний слой примесей перед сливом ячеек на границе раздела, чтобы избежать потенциального загрязнения. Осторожно слейте слой мононуклеарных клеток (ТНК) на границе раздела сред с градиентом плотности 40%/80% в пробирку объемом 15 мл, содержащую 2 мл ледяного PBS, с помощью пипетки. Промойте клетки ледяным PBS дважды.

3. Окрашивание поверхности для анализа FCM

  1. Соберите клетки и центрифугу при 500 x g в течение 5 мин при 4 °C. Ресуспендируют клеточную гранулу в окрашивающем буфере (PBS с добавлением 2% FBS и 0,1% NaN3) и центрифуге при 500 x g в течение 5 мин при 4 °C. Откажитесь от надосадочной жидкости.
    ВНИМАНИЕ: Будьте осторожны при приготовлении буфера для окрашивания. NaN3 очень токсичен и может вызвать повреждение органов при проглатывании, вдыхании или контакте с кожей. Кроме того, избегайте попадания в окружающую среду.
  2. Ресуспендируют клетки в 80 мкл блокирующего раствора (антитела против CD16/32 (1:100), разведенные в окрашивающем буфере) на пробирку. Выдерживать 30 мин в темноте при температуре 4 °C.
  3. Без промывки добавьте 20 мкл соответствующего разбавления коктейля антител, окрашивающих поверхность (таблица 1).
  4. Добавьте 1 мкл (на тест) фиксируемого жизнеспособного красителя 520 (FVD) непосредственно перед добавлением коктейля антител в образцы. Инкубировать в темноте при температуре 4 °C в течение 30 мин. Установите соответствующие антитела к изотипу и флуоресценцию минус один (FMO) в качестве отрицательного контроля.
  5. Промойте клетки в 500 мкл окрашивающего буфера центрифугированием при 500 x g в течение 5 мин при 4 °C.
  6. Ресуспендируют клеточную гранулу в 200 мкл окрашивающего буфера. Добавьте 50 мкл вихревых абсолютных счетных шариков в окрашенные клетки и перемешайте. Подвергните их анализу проточной цитометрии (FCM).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Данные FCM были получены с помощью спектрального анализатора клеток и проанализированы с помощью программного обеспечения для анализа проточной цитометрии (FCM).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Мышиная модель, индуцированная OVA, была разработана для изучения роли ILC2 в AR. Построение мышиной модели AR было основано на предыдущих исследованиях с небольшими изменениями 28,29,30,31. Было снято 10-минутное видео для измерения частоты чихания и расчесывания носа после последнего носового вызова. Аллергические симптомы мышей, индуцированных OVA-индуцированной AR, были представлены на

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

ILC2 тесно связаны с воспалением и воспалительными заболеваниями 2 типа, о чем свидетельствует растущее число исследований. Как мышиные модели, так и наблюдение за человеком способствуют лучшему пониманию его функции в верхних дыхательных путях. В патофизиологии астмы ILC2 активируются через стромальный лимфопоэтин тимуса, IL-25 и IL-33, которые в основном продуцируются эпителиальными клетками. Затем, отражая клетки Th2, ILC2 продуцируют IL-4, IL-5 и IL-13, усугубляя воспаление 2 типа32. Кроме тог...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам раскрывать нечего.

Благодарности

Р.З. был поддержан Национальным фондом естественных наук Китая (No 81871258) и средствами, предоставленными Четвертым военно-медицинским университетом (No 2020rcfczr). Ю.З. был поддержан Программой фундаментальных исследований естественных наук провинции Шэньси (No 2021JM-081).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Гидроксид алюминияMeilun biological Technology21645-51-2
CD11beBioscience11-0112-82Используется в коктейле
антител CD11cBioLegend117306Используется в коктейле
антител CD16/32BioLegend101302Клон: 93; Разведение 1:100
CD226BioLegend128812Используется в коктейле антител
CD3eBioLegend100306Используется в коктейле антител
CD45BioLegend103128Используется в коктейле
антител CD45ReBioscience11-0452-82Используется в коктейле
антител CD90.2BD Pharmingen553014Используется в антителах коктейль
Коллагеназа IVDIYIBioDY40128
CountBright абсолютные счетные бусиныInvitrogenC36950абсолютные счетные бусины
Dnase figure-materials-1BeyotimeD7076
Фетальная бычья сывороткаgibco10270-106
Корректируемая жизнеспособность красителя eFluor 520 (FITC)eBioscience65-0867-14FVD
HBSS, кальций, магнийServicebioG4204-500
KLRG1eBioscience17-5893-81Используется в коктейле
антител NaN3SIGMAS2002
Программное обеспечение NovoExpressAgilentTechnologiesVersion 1.5.0программное обеспечение для анализа проточной цитометрии (FCM)
OVASIGMA9006-59-1
PBS, 1xServicebioG4202-500
PBS, 10xServicebioG4207-500
PercollYeasen40501ES60плотность градиентные среды
RPMI 1640 питательные средыCorning10-040-CVRV
Спектральный анализатор клетокSONYSA3800

Ссылки

  1. Huang, Y., et al. S1P-dependent interorgan trafficking of group 2 innate lymphoid cells supports host defense. Science. 359 (6371), 114-119 (2018).
  2. Price, A. E., et al. Systemically dispersed innate IL-13-expressing cells in type 2 immunity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (25), 11489-11494 (2010).
  3. Ebihara, T., et al. Trained innate lymphoid cells in allergic diseases. Allergology International. 70 (2), 174-180 (2021).
  4. Gasteiger, G., Fan, X., Dikiy, S., Lee, S. Y., Rudensky, A. Y. Tissue residency of innate lymphoid cells in lymphoid and nonlymphoid organs. Science. 350 (6263), 981-985 (2015).
  5. Moro, K., et al. Interferon and IL-27 antagonize the function of group 2 innate lymphoid cells and type 2 innate immune responses. Nature Immunology. 17 (1), 76-86 (2016).
  6. Helou, D. G., et al. LAIR-1 acts as an immune checkpoint on activated ILC2s and regulates the induction of airway hyperreactivity. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 149 (1), 223-236 (2022).
  7. Karta, M. R., et al. beta2 integrins rather than beta1 integrins mediate Alternaria-induced group 2 innate lymphoid cell trafficking to the lung. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 141 (1), 329-338 (2018).
  8. Helou, D. G., et al. PD-1 pathway regulates ILC2 metabolism and PD-1 agonist treatment ameliorates airway hyperreactivity. Nature Communications. 11 (1), 3998(2020).
  9. Kabata, H., Moro, K., Koyasu, S. The group 2 innate lymphoid cell (ILC2) regulatory network and its underlying mechanisms. Immunological Reviews. 286 (1), 37-52 (2018).
  10. Zheng, H., et al. The role of Type 2 innate lymphoid cells in allergic diseases. Frontiers in Immunology. 12, 586078(2021).
  11. Maggi, L., et al. The dual function of ILC2: From host protection to pathogenic players in type 2 asthma. Molecular Aspects of Medicine. 80, 100981(2021).
  12. Meltzer, E. O., et al. Burden of allergic rhinitis: results from the Pediatric Allergies in America survey. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 124, 3 Suppl 43-70 (2009).
  13. Wheatley, L. M., Togias, A. Clinical practice. Allergic rhinitis. The New England Journal of Medicine. 372 (5), 456-463 (2015).
  14. Bousquet, J., et al. Allergic rhinitis. Nature Reviews. Disease Primers. 6 (1), 95(2020).
  15. Kato, A. Group 2 innate lymphoid cells in airway diseases. Chest. 156 (1), 141-149 (2019).
  16. Nakamura-Shinya, Y., et al. DNAM-1 promotes inflammation-driven tumor development via enhancing IFN-gamma production. International Immunology. 34 (3), 149-157 (2022).
  17. Braun, M., et al. CD155 on Tumor cells drives resistance to immunotherapy by inducing the degradation of the activating receptor CD226 in CD8(+) T cells. Immunity. 53 (4), 805-823 (2020).
  18. Huang, Z., Qi, G., Miller, J. S., Zheng, S. G. CD226: An emerging role in immunologic diseases. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 564(2020).
  19. Gilfillan, S., et al. DNAM-1 promotes activation of cytotoxic lymphocytes by nonprofessional antigen-presenting cells and tumors. Journal of Experimental Medicine. 205 (13), 2965-2973 (2008).
  20. Zhang, D., et al. TIGIT-Fc alleviates acute graft-versus-host disease by suppressing CTL activation via promoting the generation of immunoregulatory dendritic cells. Biochimica et Biophysica Acta: Molecular Basis of Disease. 1864, 3085-3098 (2018).
  21. Lozano, E., Joller, N., Cao, Y., Kuchroo, V. K., Hafler, D. A. The CD226/CD155 interaction regulates the proinflammatory (Th1/Th17)/anti-inflammatory (Th2) balance in humans. Journal of Immunology. 191 (7), 3673-3680 (2013).
  22. Kojima, H., et al. CD226 mediates platelet and megakaryocytic cell adhesion to vascular endothelial cells. Journal of Biological Chemistry. 278 (38), 36748-36753 (2003).
  23. Martinet, L., Smyth, M. J. Balancing natural killer cell activation through paired receptors. Nature Reviews. Immunology. 15 (4), 243-254 (2015).
  24. Yeo, J., Ko, M., Lee, D. H., Park, Y., Jin, H. S. TIGIT/CD226 axis regulates anti-tumor immunity. Pharmaceuticals. 14 (3), Basel, Switzerland. 200(2021).
  25. Nakano, M., et al. Association of elevated serum soluble CD226 levels with the disease activity and flares of systemic lupus erythematosus. Scientific Reports. 11 (1), 16162(2021).
  26. Chang, W. A., et al. miR-150-5p-containing extracellular vesicles are a new immunoregulator that favor the progression of lung cancer in hypoxic microenvironments by altering the phenotype of NK cells. Cancers. 13 (24), 6552(2021).
  27. Stehle, C., et al. T-bet and RORalpha control lymph node formation by regulating embryonic innate lymphoid cell differentiation. Nature Immunology. 22 (10), 1231-1244 (2021).
  28. Piao, C. H., Fan, Y. J., Nguyen, T. V., Song, C. H., Chai, O. H. Mangiferin alleviates ovalbumin-induced allergic rhinitis via Nrf2/HO-1/NF-kappaB signaling pathways. International Journal of Molecular Sciences. 21 (10), 3415(2020).
  29. Zhao, Y., Tao, Q., Wu, J., Liu, H. DMBT1 has a protective effect on allergic rhinitis. Biomedicine and Pharmacotherapy. 121, 109675(2020).
  30. Piao, C. H., et al. Ethanol extract of Dryopteris crassirhizoma alleviates allergic inflammation via inhibition of Th2 response and mast cell activation in a murine model of allergic rhinitis. Journal of Ethnopharmacology. 232, 21-29 (2019).
  31. Liang, M. J., et al. Immune responses to different patterns of exposure to ovalbumin in a mouse model of allergic rhinitis. European Archives of Oto-Rhino-Laryngology. 273 (11), 3783-3788 (2016).
  32. Ebbo, M., Crinier, A., Vely, F., Vivier, E. Innate lymphoid cells: major players in inflammatory diseases. Nature Reviews. Immunology. 17 (11), 665-678 (2017).
  33. Seehus, C. R., et al. Alternative activation generates IL-10 producing type 2 innate lymphoid cells. Nature Communications. 8 (1), 1900(2017).
  34. Cai, T., et al. IL-17-producing ST2(+) group 2 innate lymphoid cells play a pathogenic role in lung inflammation. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 143 (1), 229-244 (2019).
  35. Golebski, K., et al. IL-1beta, IL-23, and TGF-beta drive plasticity of human ILC2s towards IL-17-producing ILCs in nasal inflammation. Nature Communications. 10 (1), 2162(2019).
  36. Lei, A., Zhou, J. Cell-surface molecule-mediated cell-cell interactions in the regulation of ILC2-driven allergic inflammation. Cellular and Molecular Life Sciences. 76 (22), 4503-4510 (2019).
  37. Maazi, H., et al. ICOS:ICOS-ligand interaction is required for type 2 innate lymphoid cell function, homeostasis, and induction of airway hyperreactivity. Immunity. 42 (3), 538-551 (2015).
  38. Lei, A. H., et al. ICAM-1 controls development and function of ILC2. The Journal of Experimental Medicine. 215 (8), 2157-2174 (2018).
  39. Drake, L. Y., Iijima, K., Kita, H. Group 2 innate lymphoid cells and CD4+ T cells cooperate to mediate type 2 immune response in mice. Allergy. 69 (10), 1300-1307 (2014).
  40. Wang, Y., et al. The comparation of intraperitoneal injection and nasal-only delivery allergic rhinitis model challenged with different allergen concentration. American Journal of Rhinology & Allergy. 33 (2), 145-152 (2019).
  41. Niu, Y., et al. HIF1alpha deficiency in dendritic cells attenuates symptoms and inflammatory indicators of allergic rhinitis in a SIRT1-dependent manner. International Archives of Allergy and Immunology. 181 (8), 585-593 (2020).
  42. Van Nguyen, T., et al. Anti-allergic rhinitis activity of alpha-lipoic acid via balancing Th17/Treg expression and enhancing Nrf2/HO-1 pathway signaling. Scientific Reports. 10 (1), 12528(2020).
  43. Pyun, B. J., et al. Gardenia jasminoides attenuates allergic rhinitis-induced inflammation by inhibiting periostin production. Pharmaceuticals (Basel). 14 (10), 986(2021).
  44. Liu, Z., et al. Analysis of expression of ILC2 cells in nasal mucosa based on animal model of allergic bacterial infection rhinitis. Journal of Infection and Public Health. 14 (1), 77-83 (2021).
  45. Hu, B., Wang, Y., Zheng, G., Zhang, H., Ni, L. Effect of parasympathetic inhibition on expression of ILC2 cells in a mouse model of allergic rhinitis. The World Allergy Organization journal. 14 (9), 100582(2021).
  46. Autengruber, A., Gereke, M., Hansen, G., Hennig, C., Bruder, D. Impact of enzymatic tissue disintegration on the level of surface molecule expression and immune cell function. European Journal of Microbiology & Immunology. 2 (2), 112-120 (2012).
  47. Krisna, S. S., et al. Optimized protocol for immunophenotyping of melanoma and tumor-bearing skin from mouse. STAR Protocols. 2 (3), 100627(2021).
  48. Hoyler, T., et al. The transcription factor GATA-3 controls cell fate and maintenance of type 2 innate lymphoid cells. Immunity. 37 (4), 634-648 (2012).
  49. Huang, Y., et al. IL-25-responsive, lineage-negative KLRG1(hi) cells are multipotential 'inflammatory' type 2 innate lymphoid cells. Nature Immunology. 16 (2), 161-169 (2015).
  50. Loering, S., et al. Differences in pulmonary group 2 innate lymphoid cells are dependent on mouse age, sex and strain. Immunology and Cell Biology. 99 (5), 542-551 (2021).
  51. Lin, L., et al. Allergic inflammation is exacerbated by allergen-induced type 2 innate lymphoid cells in a murine model of allergic rhinitis. Rhinology Journal. 55 (4), 339-347 (2017).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Экспрессия CD226аллергический ринитпроточная цитометрияизоляция клетокградиент плотностиокрашивание поверхностных антигеновмононуклеарные клеткимодель на мышах
Выделение врожденных лимфоидных клеток группы 2 из слизистой оболочки носа мыши для обнаружения экспрессии CD226
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.