Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

5-аминолевулиновая кислота-опосредованная фотодинамическая терапия первичных опухолей костей и клеточных линий метастазов в кости

1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/63644

⸱

10 мая 2022 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Cell Biology, Department of Orthopaedic Surgery, University Hospital of Tübingen, 2Department of Orthopaedic Surgery, University Hospital of Tübingen

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Данный протокол представляет собой пошаговый методологический подход к воздействию линий метастатических клеток костей и первичных опухолей костей на фотодинамическую терапию (ФДТ), опосредованную 5-аминолевулиновой кислотой. Влияние на потенциал/инвазивность миграции клеток, жизнеспособность, апоптоз и потенциал старения также анализируется после воздействия ФДТ.

Аннотация

Метастазы в кости связаны с плохим прогнозом и низким качеством жизни пациентов. Фотодинамическая терапия (ФДТ) является неинвазивной терапией, которая может быть нацелена на локальные метастатические поражения костей. В данной работе представлен метод in vitro для изучения эффекта ФДТ в адгезивных клеточных линиях. С этой целью мы демонстрируем пошаговый подход к тому, чтобы подвергнуть как первичные (гигантоклеточная опухоль кости), так и метастатические раковые линии костей человека (полученные из первичной инвазивной протоковой карциномы молочной железы и почечной карциномы) 5-аминолевулиновой кислоте (5-ALA)-опосредованной ФДТ.

Через 24 ч после облучения 5-ALA-PDT (длина волны синего света 436 нм) терапевтический эффект оценивали с точки зрения потенциала миграции клеток, жизнеспособности, апоптотических особенностей и остановки клеточного роста (старения). После облучения 5-ALA-PDT клеточные линии скелетно-мышечной системы по-разному реагируют на одни и те же дозы и воздействие ФДТ. В зависимости от степени повреждения клеток, вызванного воздействием ФДТ, отмечались две разные судьбы клеток – апоптоз и старение. Вариабельная чувствительность к ФДТ-терапии среди различных клеточных линий рака костей дает полезную информацию для выбора более подходящих условий ФДТ в клинических условиях. Этот протокол разработан для иллюстрации использования ФДТ в контексте неопластических клеточных линий опорно-двигательного аппарата. Он может быть скорректирован для исследования терапевтического эффекта ФДТ на различные линии раковых клеток, различные фотосенсибилизаторы и источники света.

Введение

Терапевтические возможности лечения метастазов в костях по-прежнему ограничены и сложны, несмотря на продолжающиеся разработки в области лечения рака. В настоящее время стандартным методом является лучевая терапия, которая связана с такими осложнениями, как местная эритема, токсичность для внутренних органов1 и недостаточные переломы2. Существует потребность в альтернативных противоопухолевых методах лечения, поскольку пациенты с метастазами в кости часто страдают от боли, гиперкальциемии и неврологических симптомов, которые приводят к нарушению подвижности и снижению качества жизни3. Последние результаты показывают, что ФДТ представляет собой многообещающий, альтернативный, противоопухолевый вариант лечения непосредственно нацеленных на поражения костей, который может быть использован отдельно или в качестве поддерживающеголучевой терапии.

Механизм ФДТ в основном основан на передаче энергии от светочувствительного соединения (фотосенсибилизатора) к тканевому кислороду. Этот фотосенсибилизатор работает аналогично конденсатору на наноскопическом уровне. Он может накапливать энергию в основном состоянии при облучении соответствующей длиной волны света и высвобождает накопленную энергию при возвращении из возбужденного состояния в исходное основное состояние5. Высвобождаемая энергия приводит к двум фотохимическим реакциям: одна из них — превращение кислорода в активные радикалы кислорода путем переноса водорода или электрона. Во-вторых, это получение синглетных частиц кислорода путем горизонтальной передачи энергии от подложки фотосенсибилизатора к локальным триплетным частицам кислорода6. Активные радикалы кислорода и синглетные молекулы кислорода оказывают высокоцитотоксическое действие на локальные опухолевые клетки и индуцируют окклюзию сосудов и местную воспалительную реакцию путем апоптоза эндотелиальных клеток опухолевых кровеносных сосудов7.

Обычные фотосенсибилизаторы являются производными семейства порфиринов, таких как гематопорфирины и бензопорфирины8. Применение фотосенсибилизирующих веществ с более высоким сродством к опухолевой ткани может повысить селективность ФДТ9 лет. В частности, 5-АЛК, который является биосинтетическим предшественником протопорфирина IX, может накапливаться в опухолевых клетках, таких как актинический кератоз, базалиома, опухоль мочевого пузыряи рак желудочно-кишечного тракта. Различные подходы к доставке с использованием 5-ALA также могут варьировать эффективность ФДТ в отношении локализации опухоли. Таким образом, местное применение 5-АЛК с применением ФДТ стало дерматологической терапией первой линии против актинического кератоза10. Последние результаты по костным метастазам инвазивных протоковых клеточных линий рака молочной железы указывают на возможное ингибирование миграции клеток и индукцию апоптоза после воздействия ФДТ с 5-ALA11. Тем не менее, использование ФДТ в субфасциальных тканях человека, таких как костная ткань, все еще находится на доклинической или экспериментальной клинической стадии, поскольку эффективность необходимо повысить. Применение наночастиц в светотерапии уже показало большое влияние в стоматологии12. Таким образом, вполне вероятно, что сочетание применения наночастиц с ФДТ расширит область ее применения в сторону ортопедической онкологии.

В следующем протоколе описывается, как препарировать клетки, происходящие из первичных опухолей костей, и клеточные линии костных метастазов, и подвергнуть их 5-ALA-опосредованной PDT в течение заданного времени воздействия. Также включено подробное описание того, как выполнять и оценивать потенциал миграции клеток, жизнеспособность и старение после облучения 5-ALA-PDT. Пошаговые инструкции обеспечивают простой и лаконичный подход к получению надежных и воспроизводимых данных. Также обсуждаются преимущества, ограничения и будущие перспективы подхода ФДТ к опухолевым поражениям костей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Были использованы три различных типа клеточных линий: "MAM" - клеточная линия, происходящая из костных метастазов почечно-клеточной карциномы, "MAC" - костные метастазы инвазивной протоковой карциномы молочной железы и "17-1012" - гигантоклеточная опухоль кости. В качестве контрольной группы использовали мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из костного мозга. Перед началом исследования было получено институциональное и этическое одобрение (номер проекта: 008/2014BO2 - для линий раковых клеток и номер проекта: 401/2013 BO2 для МСК).

1. Культура клеток

ПРИМЕЧАНИЕ: Питательные среды могут быть приготовлены заранее. Питательная среда для MAM и 17-1012 состоит из RPMI с добавлением 10% (v/v) фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 2 мМ L-глутамина. Питательная среда для ПДК и МСК состоит из модифицированной Дульбекко среды Игла (DMEM) с заменителем глутамина (см. Таблицу материалов), 4,5 г/л D-глюкозы с добавлением 10% (v/v) FBS.

  1. Забор и пассаж клеток до тех пор, пока не будет достигнуто 80% слияние.
  2. Промойте клетки 5 мл фосфатно-солевого буфера (PBS) и аспирируйте PBS из колбы с помощью пипетки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот этап обеспечивает удаление остаточной полной среды, содержащей ингибиторы протеазы.
  3. Добавьте 3 мл 0,05% (v/v) трипсина-ЭДТА для диссоциации адгезивных клеток со дна колбы, в которой они культивируются.
  4. Инкубируйте колбы в течение 5 минут при 37 °C во влажной атмосфере с 5%CO2.
  5. Наблюдайте за отслоением клеток под фазово-контрастным микроскопом.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Время инкубации должно быть скорректировано для каждого типа клеток. Не допускайте контакта клеток с раствором трипсина в течение более длительных периодов времени (>10 минут).
  6. Остановите трипсинизацию, добавив 3 мл питательной среды.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Обязательно добавьте соответствующую питательную среду для каждого типа клеток, содержащую 10% (v/v) FBS.
  7. Перенесите отделенные элементы в центрифужную пробирку и центрифугируйте их в течение 7 мин при 350 × г при 7 °C.
  8. Выбросьте надосадочную жидкость.
  9. Повторно суспендируйте гранулы клеток в 1 мл питательной среды и подсчитайте клетки с помощью гемоцитометра, как описано ранее13.

2. Настройка и экспозиция ФДТ

  1. Подготовьте устройство PDT (см. Таблицу материалов), подключив все кабели и аксессуары.
  2. Приглушите свет в комнате, чтобы избежать ненужного рассеивания света.
  3. Расположите и стабилизируйте легкое волокно с помощью клейкой ленты непосредственно на верхней части луночной пластины.
    Примечание: Равномерное распределение световых волокон в верхней части лунок желательно для обеспечения того, чтобы все клетки облучались и получали одинаковое количество энергии (Рисунок 1).
  4. Следите за тем, чтобы не сильно погнуть или повредить легкое волокно, так как это может привести к снижению интенсивности света.
  5. Накройте пластины лунок алюминиевой фольгой, чтобы свести к минимуму рассеивание света.
  6. Включите устройство PDT, нажав кнопку ВКЛ/ВЫКЛ.
  7. Вставьте измерительную карту в слот на передней панели устройства PDT.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В комплект поставки входит одна измерительная карта, соответствующая времени экспозиции 300 с. Дополнительная программа на 2 000 с автоматически интегрируется в устройство PDT. Для обоих периодов экспозиции свет подается в режиме непрерывного выхода в течение указанных периодов.
  8. Убедитесь, что таймер на дисплее лайтбокса PDT изменяется на предписанное время, указанное на карте дозирования.
  9. Начните процедуру ФДТ, нажав на встроенную ножную педаль.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В устройство встроена функция автоматической остановки, и система работает автоматически. Не останавливайте световой процесс и не удаляйте легкое волокно до завершения цикла. По завершении светового цикла затвор источника света закрывается, и свет больше не подается.

3. Миграционный анализ

  1. Затравочные клетки следующие: 2 × 104 клетки - МАС, 1 × 104 клетки - МАМ, 3 х 104 - 17-1012, и 2,5 × 104 - МСК в каждую 2-камерную культуральную вставку, интегрированную в непрозрачные F-образные, 6-луночные планшеты.
  2. Инкубируйте клетки при 37 °C, 5%CO2 в течение 24 ч. После этого снимите вставки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для того, чтобы получить исходную точку отсчета для миграции и начальный размер несмещенного зазора, используется отдельная пластина, которая не будет подвергаться дальнейшему воздействию 5-ALA-PDT (шаги 3.3-3.4), а вместо этого будет непосредственно окрашена и количественно определена (шаги 3.5-3.12).
  3. Замените среду свежей средой без FBS, содержащей 1 мМ 5-ALA.
  4. Инкубируйте клетки при 37 °C, 5%CO2 в течение 4 ч.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В качестве контроля дополнительные лунки должны быть одновременно покрыты средой без 5-АЛК.
  5. Подвергните элементы воздействию ФДТ с синим светом (436 нм, 36 Дж/см2) в режиме непрерывного выхода в течение заданных временных интервалов 300 с или 2000 с, как указано в разделе 2.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Планшеты, которые не подвергались воздействию ФДТ, должны использоваться в качестве контроля.
  6. Инкубируйте клетки при 37 °C, 5%CO2 в течение 24 ч.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Периодически проверяйте клетки, чтобы оценить степень миграции для каждого типа клеток. Это должно быть оптимизировано для каждой клеточной линии.
  7. Промойте клетки 1,5 мл PBS и после этого полностью удалите PBS.
  8. Зафиксируйте клетки, добавив и инкубируя клетки с 1,5 мл 4% (v/v) параформальдегида в PBS в течение 10 минут.
  9. Добавьте 1,5 мл 70% (v/v) этанола и инкубируйте в течение 10 минут.
  10. Выбросьте этанол и дайте пластинам высохнуть на воздухе при комнатной температуре в течение 10 минут.
  11. Инкубируйте клетки с 1,5 мл 0,2% (v/v) синего красителя Кумасси и 90% (v/v) этанола в течение 20 минут.
  12. Вымойте тарелки дважды дистиллированной водой.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы тщательно вымыть пластины и удалить оставшийся мусор, полностью погрузите пластины 2-3 раза в чистую воду двойной дистилляции.
  13. Дайте пластинам высохнуть на воздухе при комнатной температуре в течение 24 часов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: На этом этапе высушенные тарелки можно хранить при комнатной температуре не менее нескольких недель.
  14. Визуализируйте и фотографируйте миграцию клеток в щели с помощью обратного фазово-контрастного микроскопа с 10-кратным увеличением.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Наблюдайте и фотографируйте миграцию живых клеток в течение 24 часов после воздействия 5-ALA-PDT. Тем не менее, фиксированные клетки могут быть сохранены и сфотографированы позже.
  15. Экспортируйте изображения в желаемом формате и количественно оцените пробелы с помощью программного обеспечения для обработки и анализа научных изображений, как описано ранее14.

4. Анализ жизнеспособности

  1. Затравить все клетки при плотности 1,5 × 104в 96-луночные планшеты в 50 мкл питательной среды.
  2. Инкубируйте клетки при 37 °C, 5%CO2 в течение 24 ч в стандартном инкубаторе для клеточных культур.
  3. Добавьте еще 50 мкл питательной среды, не содержащей FBS, содержащей 5-ALA в конечной концентрации 1 мМ.
  4. Инкубируйте клетки при 37 °C, 5%CO2 в течение 4 ч в стандартном инкубаторе для клеточных культур.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте концентрацию в 2 раза, так как клетки уже покрыты 50 мкл питательной среды. Следует включить контроль с питательной средой.
  5. Подвергайте клетки воздействию ФДТ синим светом (436 нм, 36 Дж/см2) в режиме непрерывной выработки в течение заданных временных интервалов 300 с или 2000 с, как указано в разделе 2.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Также должен быть включен отрицательный контроль, который не подвергается воздействию ФДТ.
  6. Облученные клетки инкубируют при 37 °C, 5%CO2 в течение 24 ч в стандартном инкубаторе для клеточных культур.
  7. Добавьте 15 мкл реагента MTS в клетки и инкубируйте клетки в течение 90 мин при 37 °C, 5%CO2.
  8. Измерьте поглощение с помощью спектрофотометрического ридера на длине волны 490 нм.

5. Анализ остановки клеточного роста/старения (активность β-галактозидазы (β-Gal))

ПРИМЕЧАНИЕ: Все использованные здесь реагенты и буферы были предоставлены в наборе для анализа (см. Таблицу материалов).

  1. Затравливают клетки при плотности 1,5 × 104в 96-луночные планшеты в 100 мкл питательной среды. Инкубируйте клетки в течение 24 ч, 37 °C, 5%CO2 в стандартном инкубаторе для клеточных культур.
  2. Добавьте 100 μл свежей среды, не содержащей FBS, с 5-ALA в конечной концентрации 1 мМ и инкубируйте в течение 4 часов при 37 °C, 5%CO2.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В качестве контроля отдельные лунки следует одновременно накрыть свежей средой без фотосенсибилизатора 5-ALA.
  3. Подвергайте клетки воздействию ФДТ синим светом (436 нм, 36 Дж/см2) в режиме непрерывной выработки в течение заданных временных интервалов 300 с или 2000 с, как указано в разделе 2.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В комплект также должна входить отрицательная контрольная пластина, которая не подвергается воздействию ФДТ.
  4. Инкубируйте клетки в течение 24 ч при 37 °C, 5%CO2 в стандартном инкубаторе для клеточных культур.
  5. Выбросьте средство и промойте клетки два раза PBS.
  6. Налейте на клетки 100 мкл 1x буфера для лизиса клеток и инкубируйте в течение 5 минут при 4 °C.
  7. Центрифугируйте лизат при 350 × г 1 в течение 10 мин при 4 °C и соберите надосадочную жидкость.
  8. Пипеткой внесите 50 мкл надосадочной жидкости в новый 96-луночный планшет и добавьте еще 50 мкл 2-кратного буфера для анализа.
  9. Поместите новый планшет на 96 лунок в инкубатор с температурой 37 °C на 1,5 часа.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Паштеты должны быть защищены от света во избежание фотообесцвечивания.
  10. Перелейте 50 μL смеси в 96-луночный планшет с непрозрачными стенками и добавьте 200 μL стоп-раствора.
  11. Измерьте поглощение с помощью флуоресцентного микропланшетного ридера при возбуждении 360 нм/излучении 465 нм.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

После воздействия 5-АЛК ФДТ контрольная группа МСК не показала заметного эффекта с точки зрения миграции после облучения 5-АЛК ФДТ (рис. 2A, i, v, ix). Напротив, клетки MAC (рис. 1B и рис. 2A, iii, vii, xi) и 17-1012 (рис. 1B и рис. 2A, ii, vi, x) клетки демонстрировали снижение миграционного потенциала при воздействии свет...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Несмотря на существующие варианты лечения, терапевтический ответ на рак вариафичен, что свидетельствует в пользу новых подходов или даже комбинированных методов лечения метастазов в костях с сохранением исходной структуры ткани. В этом контексте ФДТ является перспективной альтернативой. С упрощенной точки зрения, ФДТ состоит из двух основных компонентов: (1) нетоксичного светочувствительного красителя, называемого фотосенсибилизатором (ФС), и (2) внешнего источника света соответствующей ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.

Благодарности

Благодарим наших соавторов из оригинальных публикаций за помощь и поддержку.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
300 с дозированная карта для PDTIlluminOss Medical Inc., East Providence, Rhode Insland, СШАн/дhttp://www.illuminoss.com
фотосенсибилизатор 5-аминолевулиновой кислоты (5-ALA)Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, СШАA779310 мг
6 луночных планшетовGreiner Bio-One, Frickenhausen, Германия657160
8 луночных камерных слайдовSARSTEDT AG & Co. KG, Мюнхен, Германия94.6140.802
96 Луночные планшеты (F-buttom)Greiner Bio-One, Фрикенхаузен, Германия655180
CellTiter 96 Водный раствор One
Анализ пролиферации клеток
(MTS-Assay)		Promega, Fitchburg,
Wisconsin, США		G3580
Анализ клеточного старенияBiotrend Chemikalien GmbH, Kö ln, ГерманияCBA-231Количественный анализ, связанный со старением ß-галактозидазы
Coomassie Brilliant Blue R250Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США350550,5% (w/v)
Культуральные вставки 2Wellibidi GmbH, Grä felfing, Германия80209
DMEM (1x) + GlutaMax-ILife Technologies, Карлсбад, Калифорниен, США31966-021
Фетальная бычья сыворотка (FBS)Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, СШАF7524
Флуоресцентный микропланшетный ридерPromega, Мэдисон, Висконсин, СШАGlowMAx®,
GM3510
ГемоцитометрHecht Assistent, Sondheim, Deutschland4042
ImageJNational Institutes of Health, Be-thesda, Maryland, СШАImageJ (version: 1.53a)Программное обеспечение для обработки и анализа научных изображений; https://imagej.net/
Inverse phase-contrast microscopeLeica, Wetzlar, GermanyDM IMBRE 100
Methanol AnulaR NormapurVWR, Fontenay-Sous-Bois, France20847.307
ПараформальдегидSigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США15812795% чистоты
(световой короб и аксессуары)IlluminOss Medical Inc., Ист Провиденс, Род Инсленд, СШАн/д
пенициллин-стрептомицинThermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США15140-12210 000 ЕД/мл пенициллина
10 000 г/мл стрептомицина
фосфатно-солевого буфера (PBS)Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США10010-015
RPMI 1640Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США21875034
Спектрофотометр/микропланшетный ридерBioTek Instruments GmbH, Бад Фридрихсхолл, ГерманияEL800
Трипановый синий краситель 0,4%Sigma-Aldrich, St Луис, Миссури, СШАT8154
Trypsin-EDTA 10xSigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, СШАT4174
порошок, устройство для ФДТ

Ссылки

  1. Milano, M. T., Constine, L. S., Okunieff, P. Normal tissue tolerance dose metrics for radiation therapy of major organs. Seminars in Radiation Oncology. 17 (2), 131-140 (2007).
  2. Higham, C. E., Faithfull, S. Bone health and pelvic radiotherapy. Clinical Oncology. 27 (11), 668-678 (2015).
  3. von Moos, R., et al. Pain and health-related quality of life in patients with advanced solid tumours and bone metastases: integrated results from three randomized, double-blind studies of denosumab and zoledronic acid. Supportive Care in Cancer. 21 (12), 3497-3507 (2013).
  4. Stewart, F., Baas, P., Star, W. What does photodynamic therapy have to offer radiation oncologists (or their cancer patients). Radiotherapy and Oncology. 48 (3), 233-248 (1998).
  5. Dolmans, D. E. J. G. J., Fukumura, D., Jain, R. K. Photodynamic therapy for cancer. Nature Reviews Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).
  6. Kwiatkowski, S., et al. Photodynamic therapy-mechanisms, photosensitizers and combinations. Biomedicine and Pharmacotherapy. 106, 1098-1107 (2018).
  7. Huang, Z., et al. Photodynamic therapy for treatment of solid tumors--potential and technical challenges. Technology in Cancer Research and Treatment. 7 (4), 309-320 (2008).
  8. Kou, J., Dou, D., Yang, L. Porphyrin photosensitizers in photodynamic therapy and its applications. Oncotarget. 8 (46), 81591-81603 (2017).
  9. Josefsen, L. B., Boyle, R. W. Photodynamic therapy: novel third-generation photosensitizers one step closer. British Journal of Pharmacology. 154 (1), 1-3 (2008).
  10. Dragieva, G., et al. A randomized controlled clinical trial of topical photodynamic therapy with methyl aminolaevulinate in the treatment of actinic keratoses in transplant recipients. British Journal of Dermatology. 151 (1), 196-200 (2004).
  11. Sachsenmaier, S. M., et al. Assessment of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy on bone metastases: an in vitro study. Biology. 10 (10), 1020(2021).
  12. Mitsiadis, T. A., Woloszyk, A., Jiménez-Rojo, L. Nanodentistry: combining nanostructured materials and stem cells for dental tissue regeneration. Nanomedicine. 7 (11), 1743-1753 (2012).
  13. Ricardo, R., Phelan, K. Counting and determining the viability of cultured cells. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (16), e752(2008).
  14. Nunes, J. P. S., Dias, A. A. M. ImageJ macros for the user-friendly analysis of soft-agar and wound-healing assays. BioTechniques. 62 (4), 175-179 (2017).
  15. Dai, T., et al. Concepts and principles of photodynamic therapy as an alternative antifungal discovery platform. Frontiers in Microbiology. 3, 120(2012).
  16. Chen, X., Zhao, P., Chen, F., Li, L., Luo, R. Effect and mechanism of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy in esophageal cancer. Lasers in Medical Science. 26 (1), 69-78 (2011).
  17. Bacellar, I. O., Tsubone, T. M., Pavani, C., Baptista, M. S. Photodynamic efficiency: from molecular photochemistry to cell death. International Journal of Molecular Sciences. 16 (9), 20523-20559 (2015).
  18. Song, Y. S., Lee, B. Y., Hwang, E. S. Dinstinct ROS and biochemical profiles in cells undergoing DNA damage-induced senescence and apoptosis. Mechanisms of Ageing and Development. 126 (5), 580-590 (2005).
  19. Faber, J., Fonseca, L. M. How sample size influences research outcomes. Dental Press Journal of Orthodontics. 19 (4), 27-29 (2014).
  20. Anker, H. S. Biological aspects of cancerby Julian Huxley. Review. Perspectives in Biology and Medicine. 2 (2), 246(1959).
  21. Alizadeh, A. A., et al. Toward understanding and exploiting tumor heterogeneity. Nature Medicine. 21 (8), 846-853 (2015).
  22. McGranahan, N., Swanton, C. Clonal heterogeneity and tumor evolution: past, present, and the future. Cell. 168 (4), 613-628 (2017).
  23. Dai, Z., et al. Research and application of single-cell sequencing in tumor heterogeneity and drug resistance of circulating tumor cells. Biomarker Research. 8 (1), 60(2020).
  24. Barron, G. A., Moseley, H., Woods, J. A. Differential sensitivity in cell lines to photodynamic therapy in combination with ABCG2 inhibition. Journal of Photochemistry and Photobiology. 126, 87-96 (2013).
  25. Perry, R. R., et al. Sensitivity of different human lung cancer histologies to photodynamic therapy. Cancer Research. 50 (14), 4272-4276 (1990).
  26. Choi, B. -H., Ryoo, I. -G., Kang, H. C., Kwak, M. -K. The sensitivity of cancer cells to pheophorbide a-based photodynamic therapy is enhanced by NRF2 silencing. PLoS One. 9 (9), 107158(2014).
  27. Du, K. L., et al. Preliminary results of interstitial motexafin lutetiuç mediated PDT for prostate cancer. Lasers in Surgery and Medicine. 38 (5), 427-434 (2006).
  28. Gunaydin, G., Gedik, M. E., Ayan, S. Photodynamic therapy-current limitations and novel approaches. Frontiers in Chemistry. 9, 691697(2021).
  29. Fisher, C., et al. Photodynamic therapy for the treatment of vertebral metastases: a phase I clinical trial. Clinical Cancer Research. 25 (19), 5766-5776 (2019).
  30. Cochrane, C., Mordon, S. R., Lesage, J. C., Koncar, V. New design of textile light diffusers for photodynamic therapy. Materials Science and Engineering: C. 33 (3), 1170-1175 (2013).
  31. Wen, J., et al. Mitochondria-targeted nanoplatforms for enhanced photodynamic therapy against hypoxia tumor. Journal of Nanobiotechnology. 19 (1), 440(2021).
  32. Li, W. -P., Yen, C. -J., Wu, B. -S., Wong, T. -W. Recent advances in photodynamic therapy for deep-seated tumors with the aid of nanomedicine. Biomedicines. 9 (1), 69(2021).
  33. Ozdemir, T., Lu, Y. -C., Kolemen, S., Tanriverdi-Ecik, E., Akkaya, E. U. Generation of singlet oxygen by persistent luminescent nanoparticle-photosensitizer conjugates: a proof of principle for photodynamic therapy without light. ChemPhotoChem. 1 (5), 183-187 (2017).
  34. Abrahamse, H., Hamblin, M. R. New photosensitizers for photodynamic therapy. The Biochemical Journal. 473 (4), 347-364 (2016).
  35. Kim, M. M., Darafsheh, A. Light sources and dosimetry techniques for photodynamic therapy. Photochemistry and Photobiology. 96 (2), 280-294 (2020).
  36. Saravana-Bawan, S., David, E., Sahgal, A., Chow, E. Palliation of bone metastases-exploring options beyond radiotherapy. Annals of Palliative Medicine. 8 (2), 168-177 (2019).
  37. Wise-Milestone, L., et al. Local treatment of mixed osteolytic/osteoblastic spinal metastases: is photodynamic therapy effective. Breast Cancer Research and Treatment. 133 (3), 899-908 (2012).
  38. Dentro, S. C., et al. Characterizing genetic intra-tumor heterogeneity across 2,658 human cancer genomes. Cell. 184 (8), 2239-2254 (2021).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Клеточные линии опухолей костейфотодинамическая терапия in vitroмиграция клетокжизнеспособность клетокиндукция апоптозаклеточное старениеклеточные линии рака

Эта статья была опубликована

Видео скоро будет доступно

Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.