Описана хирургическая методика и процесс децеллюляризации композитных задних конечностей крыс. Децеллюляризацию проводят с использованием низкоконцентрированного додецилсульфата натрия через машинную перфузионную систему ex vivo .
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Закупка и децеллюляризация задних конечностей крыс с использованием биореактора ex vivo на основе перфузии для васкуляризированной композитной аллотрансплантации
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Пациентам с тяжелыми травматическими повреждениями и потерей тканей требуется сложная хирургическая реконструкция. Васкуляризированная композитная аллотрансплантация (VCA) является развивающимся реконструктивным путем для переноса нескольких тканей в качестве композитной субъединицы. Несмотря на многообещающий характер VCA, долгосрочные иммуносупрессивные требования являются значительным ограничением из-за повышенного риска злокачественных новообразований, токсичности конечных органов и оппортунистических инфекций. Тканевая инженерия бесклеточных композитных каркасов является потенциальной альтернативой в снижении потребности в иммуносупрессии. Здесь описана добыча крысиной задней конечности и ее последующая децеллюляризация с использованием додецилсульфата натрия (SDS). Представленная стратегия закупок основана на общей бедренной артерии. Была построена и использована для децеллюляризации задней конечности машинной системы на основе перфузии. Была выполнена успешная перфузионная децеллюляризация, в результате чего появился белый полупрозрачный вид задней конечности. Наблюдалась интактная, перфузируемая сосудистая сеть по всей задней конечности. Гистологические анализы показали удаление ядерного содержимого и сохранение тканевой архитектуры во всех тканевых компартментах.
Введение
VCA является новым вариантом для пациентов, нуждающихся в сложной хирургической реконструкции. Травматические повреждения или резекции опухоли приводят к потере объемной ткани, которую может быть трудно реконструировать. VCA предлагает трансплантацию нескольких тканей, таких как кожа, кости, мышцы, нервы и сосуды, в качестве композитного трансплантата от донора к реципиенту1. Несмотря на свой многообещающий характер, VCA ограничен из-за длительных иммуносупрессивных схем. Пожизненное применение таких препаратов приводит к повышению риска оппортунистических инфекций, злокачественных новообразований и токсичности конечных ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Трупные самцы крыс Льюиса (300-430 г), полученные из Научно-исследовательского института больницы общего профиля Торонто, использовались для всех экспериментов. Для всех хирургических процедур для поддержания асептической техники использовались стерильные инструменты и расходные материалы (см. Таблицу материалов). Все процедуры были выполнены в соответствии с руководящими принципами Комитета по уходу за животными в Научно-исследовательском институте больниц общего профиля Торонто, Сеть университетского здравоохранения (Торонто, Онтарио, Канада). В общей сложности четыре задних конечности были децеллюляризированы.
1. П....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Протокол закупок был успешным в изоляции и каннулировании общих бедренных артерий для последующих этапов перфузии. Репрезентативные изображения рассечения на рисунке 1A,B показывают расположение разреза и экспозицию бедренных сосудов на достаточном расстоянии от точек бифуркации. На фиг.2 показано устройство, необходимое для подготовки биореактора и перфузионного контура. Конечную точку децеллюляризации определяли путем наблюдения за белым, полу.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Задние конечности крыс полезны в качестве экспериментальных моделей в VCA5. Тканевая инженерия бесклеточных каркасов представляет собой первый шаг в устранении недостатков долгосрочных режимов иммуносупрессии, связанных с VCA. Использование композитных трансплантатов представляет собой дополнительную проблему, учитывая наличие нескольких тканей, каждая из которых обладает уникальными функциональными, иммуногенными и структурными свойствами. Настоящий протокол показывает успешный метод получения бе.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов, о которых можно было бы заявить.
Благодарности
Рисунок 3А был создан в BioRender.com.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0,9% хлорида натрия для инъекций USP 50 мл | Baxter Corporation | JB1308M | |
| 1 мл одноразовых серологических пипеток | |||
| 10 мл одноразовых шприцев | полученных из исследовательского учреждения | ||
| Получено из научно-исследовательского учреждения | |||
| 70% изопропилового спирта | , полученного из исследовательского учреждения | ||
| Acrodisc Шприцевой фильтр 0,2 &; m | VWR | CA28143-310 | |
| Щипцы Адсона, прямые | инструменты для тонкой науки | 11006-12 | |
| Ангиокатетер 24 G 19 мм (¾ ”) | VWR | 38112 | |
| Антибиотик-антимикотический раствор (100x) 100 мл | Multicell | 450-115-EL | |
| Косторез | Fine Science Tools | 12029-12 | |
| Соединители для 1/16" - 1/8" трубки | McMasterCarr | 5117K52 | |
| Female Luer to barbed adapter (PVDF) - 1/8" ID | McMasterCarr | 51525K328 | |
| Тонкие щипцы | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Тонкие щипцы с микропритупленными наконечниками | Fine Science Tools | 11253-20 | |
| Гепарин натрия для инъекций 10 000 МЕ/10 мл | LEO Pharma Inc. | 006174-09 | |
| Адаптер с наружной резьбой Luer на колючий (PVDF) - 1/8" ID | McMasterCarr | 51525K322 | |
| Микроиглодержатель | WLorenz | 04-4125 | |
| Микроножницы | WLorenz | SP-4506 | |
| Надуксусная кислота | Sigma Aldrich | 269336-100ML | |
| Перистальтический насос, 3-канальный | Cole Parmer | RK-78001-68 | |
| Фосфатно-солевой буфер 1x 500 мл | Wisent | 311-425-CL | |
| Раствор для хирургического скраба | полученный из насосной трубки исследовательского института | ||
| , 3-стоп, трубка насоса Tygon E-LFL | Cole Parmer | RK-96450-40 | |
| платиновый силикон | Cole Parmer | RK-96410-16 | |
| лезвие скальпеля - #10 | Fine Science Tools | 10010-00 | |
| Ручка для скальпеля - #3 | Fine Science Tools | 10003-12 | |
| Реагент додецилсульфат натрия Класс: Чистота: >99%, 1 кг | Bioshop | SDS003.1 | |
| Хирургический шов #6-0 | Covidien | VS889 |
Ссылки
- Kueckelhaus, M., et al. Vascularized composite allotransplantation: Current standards and novel approaches to prevent acute rejection and chronic allograft deterioration. Transplant International. 29 (6), 655-662 (2016).
- Duisit, J., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
