В данной работе мы описываем экспериментальную модель инфаркта миокарда, процедуру эхокардиографии для изучения ремоделирования и функции сердца, а также процедуры количественной оценки фиброза и гипертрофии в участках, окрашенных в красный цвет и родамином, а также размер и индекс расширения инфаркта в срезах, окрашенных трихромом Массона.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Экспериментальная модель инфаркта миокарда для изучения восстановления и ремоделирования сердца у мышей с нокаутом
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Сердечно-сосудистые заболевания являются наиболее распространенной причиной смерти в западных странах, при этом наиболее распространенной формой является острый инфаркт миокарда (ИМ). В данной статье описывается протокол изучения роли галектина 3 (Gal-3) во временной эволюции заживления и ремоделирования сердца на экспериментальной животной модели ИМ.
Описанные процедуры включают экспериментальную модель ИМ с постоянной коронарной лигатурой у самцов мышей C57BL/6J (контроль) и нокаута Gal-3 (KO), процедуру эхокардиографии для изучения ремоделирования сердца и систолической функции in vivo, гистологическую оценку интерстициального фиброза миокарда с окрашенными в красный цвет пикрозириусом и окрашенными лектином родамином срезами для изучения гипертрофии миоцитов по площади поперечного сечения (MCSA), а также количественная оценка размера инфаркта и ремоделирования сердца (истончение рубца, толщина перегородки и индекс расширения) с помощью планиметриметрии в срезах, окрашенных трихромом Массона и трифенилтетразолием хлоридом. Гал-3 У мышей с КО с ИМ наблюдалось нарушение ремоделирования сердца и увеличение коэффициента истончения рубцов и индекса расширения. В начале ИМ функция миокарда и ремоделирование сердца также были серьезно нарушены. Через 4 недели после ИМ также была нарушена естественная эволюция фиброза у инфарктированных мышей Gal-3 KO.
Таким образом, экспериментальная модель ИМ является подходящей моделью для изучения временной эволюции восстановления и ремоделирования сердца у мышей с генетической делецией Gal-3 и других животных моделей. Недостаток Gal-3 влияет на динамику восстановления сердца и нарушает развитие ремоделирования и функции сердца после ИМ.
Введение
Инфаркт миокарда (ИМ) является наиболее распространенной формой сердечно-сосудистых заболеваний. После ИМ миокард претерпевает последовательные морфологические и функциональные изменения, включая заживление зоны инфаркта ИМ, ремоделирование желудочков (ВР) и дисфункцию миокарда1. Заживление ИМ является динамичным и хорошо организованным процессом, связанным с глубокой воспалительной инфильтрацией, которая заканчивается образованием фиброзного рубца 2,3. Экспериментальная модель ИМ у мышей в настоящее время используется для изучения ремоделирования сердц....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Все эксперименты, описанные в этом протоколе, были одобрены Комитетом по уходу за животными и исследованиям Университета Буэнос-Айреса (CICUAL) в соответствии с Комитетом Национального исследовательского совета (США) по обновлению Руководства по уходу за лабораторными животными и их использованию13. Для экспериментов использовали самцов мышей C57BL/6J и Gal-3 KO соответствующего возраста (8-10 недель) весом 30-35 г, что позволяет лучше проводить хирургические манипуляции. Предоставляйте животным доступ к воде и пище в неограниченном количестве. Мышей Gal-3 KO разводили на ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Выживаемость и вскрытие после ИМ
В течение 4 недель наблюдения 17% (4/23) мышей C57 против 40% (8/20) мышей Gal-3 KO были найдены мертвыми. Было проведено вскрытие; у мертвых мышей Gal-3 KO сердце было больше, чем у мышей C57 (рис. 1), а у 38% мышей C57 по сравнению с 32% мышей Gal-3 KO были макроскопические сгустки грудной клетки, которые были напрямую связаны с разрывом сердца. Последнее продемонстрировало, что причина смерти не была связана с.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Экспериментальная модель ИМ с помощью постоянной лигатуры коронарных артерий используется для изучения широкого спектра патофизиологических механизмов восстановления и ремоделирования сердца 5,14,17. В этой статье обобщены различные методы, используемые в настоящее время в этой лаборатории для изучения временной эволюции восстановления сердца и ее влияния на ремоделирование желудочков после инфа.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявить.
Благодарности
Авторы с благодарностью оценивают техническую помощь Аны Кьяро. Эта работа была поддержана грантами Аргентинского агентства по содействию науке и технологиям (PICT 2014-2320, 2019-02987 и PICT 2018-03267 to VM) и Университета Буэнос-Айреса (UBACyT 2018- 382 20020170100619BA to GEG).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 8-0 шелковый шов | Ethicon | ||
| C57BL/6J | Кафедра биоресурсов факультета ветеринарии Университета Буэнос-Айреса, Аргентина | ||
| Щипцы | |||
| Hardvard 386 | компании Hardvard Грелка | ||
| поддерживает температуру животного во время операции | |||
| Изображение Pro-Plus 6.0 | Медиа Кибернетика | Программное обеспечение для анализа изображений | |
| Кетамин | Холидей | ||
| Массон Трихром | БИОПУР | ||
| Пикрозириус красный | БИОПУР | ||
| Ретракторы | |||
| Аппарат искусственной вентиляции легких для грызунов Модель 683 | Гарвардский аппарат | Механический аппарат ИВЛ | |
| Ножницы | |||
| Стереоскопическое увеличительное стекло | Arcano | ||
| Vivid 7 machine (General Electric Medical Systems, Horten, Норвегия) | General Electric | Любое программное обеспечение для слежения может быть использовано с этим протоколом | |
| WGA no. RL-1022, Vector Laboratories, Burlingame | Vector Laboratories | ||
| Ксилазин | Pro-Ser |
Ссылки
- Opie, L. H., Commerford, P. J., Gersh, B. J., Pfeffer, M. A. Controversies in ventricular remodelling. Lancet. 367 (9507), 356-367 (2006).
- Frangogiannis, N. G. The inflammatory response in myocardial injury, repair, and remodelling. Nature Reviews Cardiology. 11 (5....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
