Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Органотипические культуры экплантатов сетчатки макаки

1.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/64178

⸱

24 августа 2022 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Yunnan Eye Institute & Key Laboratory of Yunnan Province, Yunnan Eye Disease Clinical Medical Center, Affiliated Hospital of Yunnan University, Yunnan University, 2Institute for Ophthalmic Research, Eberhard-Karls-Universität Tübingen

В этой статье

Краткое содержание

Эксплантаты сетчатки, полученные от макак дикого типа, культивировали in vitro. Дегенерацию сетчатки и сигнальный путь цГМФ-ФКГ индуцировали с помощью ингибитора ФДЭ6 запринаста. Накопление цГМФ в эксплантах при различных концентрациях запринаста верифицировали с помощью иммунофлюоресценции.

Аннотация

Наследственная дегенерация сетчатки (РД) характеризуется прогрессирующей гибелью фоторецепторных клеток. Чрезмерная активация пути циклической гуанозинмонофосфата (цГМФ)-зависимой протеинкиназы (PKG) в фоторецепторных клетках вызывает гибель фоторецепторных клеток, особенно в моделях, содержащих мутации фосфодиэстеразы 6b (PDE6b). В предыдущих исследованиях RD использовались в основном мышиные модели, такие как мыши rd1 или rd10 . Учитывая генетические и физиологические различия между мышами и людьми, важно понять, в какой степени сетчатка приматов и грызунов сопоставима. Макаки имеют высокий уровень генетического сходства с людьми. Таким образом, для культивирования эксплантатов сетчатки in vitro были отобраны макаки дикого типа (в возрасте 1-3 лет), включающие комплекс сетчато-ретинальный пигментный эпителий (RPE)-сосудистая оболочка. Эти эксплантаты обрабатывали различными концентрациями запринаста ингибитора ФДЭ6 для индукции сигнального пути цГМФ-ПКГ и моделирования патогенеза РД. Накопление цГМФ и гибель клеток в эксплантах сетчатки приматов были впоследствии проверены с помощью иммунофлюоресценции и анализа TUNEL. Модель сетчатки приматов, созданная в этом исследовании, может служить для актуальных и эффективных исследований механизмов цГМФ-PKG-зависимой РД, а также для разработки будущих подходов к лечению.

Введение

Наследственная дегенерация сетчатки (РД) характеризуется прогрессирующей гибелью фоторецепторных клеток и обусловлена мутациями в широком спектре патогенных генов1. Конечным результатом РД является потеря зрения, и в подавляющем большинстве случаев болезнь остается неизлечимой по сей день. Поэтому важно изучать клеточные механизмы, приводящие к гибели фоторецепторов, используя модели, которые точно представляют состояние болезни человека. Здесь особый интерес представляют модели, основанные на приматах, из-за их близости к человеку. Примечательно, что такие модели могут способствовать разработке соответствующих терапевтических вмешательств, которые могут остановить или отсрочить гибель фоторецепторных клеток.

Предыдущие исследования механизмов гибели клеток при РД показали, что снижение или потеря активности фосфодиэстеразы 6 (ФДЭ6), вызванная мутациями генов, запускающих РД, приводит к снижению гидролиза циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ)2,3. цГМФ является специфическим агонистом циклических нуклеотид-управляемых ионных каналов (CNGC) во внешних сегментах стержней (АФК), а также ключевой молекулой, ответственной за преобразование световых сигналов в электрические сигналы в фоторецепторных клеткахпозвоночных 4. Восстановленный гидролиз цГМФ вызывает накопление цГМФ в АФК, что приводит к открытию КНГК 5. Следовательно, пути фототрансдукции активируются, что приводит к увеличению концентрации катионов в фоторецепторных клетках. Этот процесс налагает метаболическую нагрузку на фоторецепторы, которая при чрезмерной активации, например, мутациями в ФДЭ6, может вызвать гибель клеток.

Многие исследования показали, что значительное перенакопление цГМФ в фоторецепторах мышиных моделей с различными мутациями гена RD может вызывать активацию цГМФ-зависимой протеинкиназы (PKG)3,6. Это приводит к значительному увеличению умирающих, TUNEL-положительных клеток и постепенному истончению клеточного слоя фоторецепторов. Предыдущие исследования показывают, что гиперактивация ФКГ, вызванная повышенным уровнем цГМФ, является необходимым и достаточным условием для индукции гибели фоторецепторных клеток 2,5. Исследования на различных мышиных моделях РД также показали, что активация ПКГ, вызванная повышенными уровнями цГМФ в фоторецепторах, приводит к чрезмерной активации нижестоящих эффекторов, таких как поли-АДФ-рибоза-полимераза 1 (PARP1), гистондеацетилазы (HDAC) и кальпаин 2,7,8,9. Это подразумевает причинно-следственные связи между этими различными белками-мишенями и гибелью фоторецепторных клеток.

Однако предыдущие исследования патологии, токсикофармакологии и терапии РД были в основном основаны на мышиных моделях РД10,11,12. Тем не менее, остаются огромные трудности в клиническом переводе этих результатов. Это связано со значительными генетическими и физиологическими различиями между мышами и людьми, особенно в отношении структуры сетчатки. Напротив, нечеловекообразные приматы (NHP) также имеют высокую степень сходства с людьми в отношении генетических характеристик, физиологических моделей и регуляции факторов окружающей среды. Например, оптогенетическая терапия была исследована как средство восстановления активности сетчатки в моделиNHP 13. Лингам и его коллеги продемонстрировали, что индуцированные человеком плюрипотентные стволовые клетки-предшественники сетчатки могут спасти повреждение колбочковых фоторецепторов в NHP14. Поэтому модели NHP важны для изучения патогенеза РД и разработки эффективных методов лечения. В частности, NHP-модели РД, демонстрирующие патогенные механизмы, сходные с таковыми у людей, могут сыграть решающую роль в исследованиях по разработке и токсикофармакологическому анализу in vivo новых лекарств.

Ввиду длительного жизненного цикла, высокого уровня технических трудностей и высоких затрат, связанных с созданием моделей приматов in vivo , мы создали модель инопланетных приматов (NHP) in vitro с использованием культур эксплантированной сетчатки макак. Во-первых, были отобраны макаки дикого типа в возрасте 1-3 лет для культивирования эксплантатов сетчатки in vitro , которые включали комплекс сетчатка-RPE-сосудистая оболочка. Затем эксплантаты обрабатывали различными концентрациями запринаста ингибитора ФДЭ6 (100 мкМ, 200 мкМ и 400 мкМ), чтобы индуцировать сигнальный путь цГМФ-ПКГ. Гибель фоторецепторных клеток была количественно определена и проанализирована с помощью анализа TUNEL, а накопление цГМФ в эксплантах было проверено с помощью иммунофлуоресценции. Учитывая высокую степень сходства в отношении распределения и морфологии клеток, толщины слоя сетчатки и других физиологических характеристик сетчатки у обезьян и человека, установление сигнального пути цГМФ-ПКГ в модели сетчатки in vitro может способствовать будущим исследованиям патогенеза РД, а также исследованиям в области разработки и токсикофармакологии новых препаратов для лечения РД.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Исследование на животных было рассмотрено и одобрено Комитетом по этике Института зоологии Китайской академии наук (IACUC-PE-2022-06-002), а также обзором этики животных и протоколом животных Юньнаньского университета (YNU20220149).

1. Приготовление эксплантатов сетчатки

  1. Получают глазные яблоки приматов от макак дикого типа в возрасте от 1 до 3 лет, хранят в растворе для хранения тканей и транспортируют на льду в течение 3 часов после энуклеации после принесения обезьян в жертву или после естественной смерти.
  2. Для приготовления раствора протеиназы К растворяют 25 мг протеиназы К в 250 мкл дистиллированной воды, а затем добавляют 225 мкл раствора к 18,5 мл базальной среды (R16).
  3. Промойте глазные яблоки в 10 мл 5% повидон-йода (повидон-йод: вода = 1:19) в течение 30 с и окуните их в 5% пенициллин/стрептомицин (PEN/STREP):p хосфат-буферный физиологический раствор = 1:19 на 1 мин, чтобы избежать бактериального загрязнения. Затем инкубируйте глазные яблоки в 10 мл среды R16 в течение 5 минут.
  4. Предварительно нагрейте раствор протеиназы К в инкубаторе с температурой 37 °C. Затем погрузите глазные яблоки в 10 мл раствора протеиназы К и инкубируйте в течение 2 мин. Погрузите глазные яблоки в 10 мл раствора R16 + фетальной бычьей сыворотки (1:1), инкубируйте в течение 5 минут, а затем перенесите глазные яблоки в 10 мл свежего R16 для окончательного промывания.
  5. Отделите склеру, роговицу, радужную оболочку, хрусталик и стекловидное тело и разрежьте сетчатку с 4 сторон пинцетом и ножницами (рис. 1A-L).
  6. Разрежьте эксплантаты сетчатки с лезвиями трепана, разделенные на пять частей: лезвие трепанта диаметром 4 мм для носовой/височной/верхней/нижней стороны и лезвие трепана, диаметром 6 мм для центральной стороны (содержащее диск зрительного нерва и макулу; Рисунок 1М-О). Разрез на следующем расстоянии от головки зрительного нерва: 1,5 мм для носа, 4 мм для височной и 2 мм для верхней и нижней стороны.
  7. Перенесите эксплантаты сетчатки (содержащие сетчатку и сосудистую оболочку) с депрессором век и поместите их в середину вставки фоторецепторной стороной вверх (рис. 1P). Поместите примерно 1 мл полной среды (R16 с добавлением BSA, трансферрина, прогестерона, инсулина, Т3, кортикостерона, витамина B1, витамина B12, ретинола, ретинилацетата, DL-токоферола, токоферилацетата, линолевой кислоты, L-цистеина HCl, глутатиона, глутамина, витамина С) под мембрану на пластине, чтобы полностью покрыть сетчатку.

2. Культура эксплантата сетчатки приматов

  1. Культуру сетчатки эксплантируют в полной среде и помещают в инкубатор с температурой 37 °C, аэрируемый увлажненным 5%CO2.
  2. Применяют препарат в соответствующей концентрации к питательной среде сетчатки (например, запринаст в концентрациях 100 мкМ, 200 мкМ или 400 мкМ). Используйте не менее трех эксплантатов в каждом состоянии лечения и используйте эксплантаты без лекарства в качестве контроля. Лечат препаратом в течение 4 дней.

3. Фиксация и криосекционирование

  1. Инкубируют эксплантаты сетчатки с 1 мл параформальдегида (ПФА) в течение 45 мин, кратковременно промывают их 1 мл фосфатно-буферного физиологического раствора (PBS), а затем инкубируют с 10% сахарозой в течение 10 мин, 20% сахарозой в течение 20 мин и 30% сахарозой в течение 30 мин (1 мл для каждого эксплантата сетчатки).
  2. Разрежьте эксплантаты сетчатки с помощью лезвий трепана, чтобы обеспечить постоянство размеров эксплантатов, полученных из разных участков со следующими характеристиками: четыре квадранта на периферии, 6 мм в центре. Затем перенесите эксплантаты сетчатки в жестяную коробку (примерно 1,5 см x 1,5 см x 1,5 см) со средой для встраивания O.C.T., чтобы покрыть ткань. Немедленно заморозьте срезы тканей в жидком азоте и поместите в холодильник с температурой -20 °C для хранения.
  3. Используйте острое лезвие, чтобы разрезать агар на небольшой блок, содержащий образец ткани, разрежьте блоки образца на участки размером 10 мкм и поместите их на предметные стекла адгезионного микроскопа с помощью мягкой щетки. Затем высушите в течение 45 минут при 40 ° C и храните при -20 ° C до использования.

4. Иммуногистохимия (рис. 2)

  1. Окрашивание cGMP
    1. Высушите предметные стекла и нарисуйте гидрофобное кольцо вокруг участков сетчатки с помощью жидкостной блокирующей ручки, чтобы покрыть образцы.
    2. Погрузите предметные стекла в 200 мкл 0,3% фосфатного буферного физиологического раствора и Triton X-100 на предметное стекло (PBST) на 10 мин при комнатной температуре, а затем в блокирующий раствор (5% обычная ослиная сыворотка, 0,3% PBST, 1% BSA, 200 мкл на предметное стекло) в течение 1 ч при комнатной температуре.
    3. Инкубируйте образцы в течение ночи с первичным антителом (1:250, овец против цГМФ, 200 мкл на предметное стекло), приготовленным в блокирующем растворе при 4 ° C, а затем промывайте PBS в течение 10 мин (200 мкл на предметное стекло) 3 раза.
    4. Инкубируйте образцы с вторичными антителами (1:300, Donkey anti sheep Alxea Fluor 488, 200 мкл на предметное стекло) в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем промойте PBS в течение 10 мин, 3 раза. Накройте образцы антибактериальной монтажной средой, содержащей 4',6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI), и храните при температуре 4 °C не менее 30 минут перед визуализацией.
  2. Окрашивание TUNEL
    1. Высушите предметные стекла при комнатной температуре в течение 15 минут и нарисуйте водоотталкивающее барьерное кольцо вокруг образцов тканей сетчатки с помощью ручки-блокатора жидкости, а затем инкубируйте их в 40 мл PBS в течение 15 минут.
    2. Инкубируют предметные стекла в 42 мл (на пять предметных стекол) TBS (0,05 М трис-буфера) при 37 °C. Аспирируйте TBS и инкубируйте образцы с 6 мкл протеиназы K в течение 5 мин. Затем промывайте предметные стекла 3 раза с помощью TBS в течение 5 минут каждый раз.
    3. Подвергните предметные стекла воздействию 40 мл раствора этанол-уксусной кислоты в чоплине, накройте прозрачным листом и выдерживайте при -20 °C в течение 5 мин. Промывайте предметные стекла 3 раза с помощью TBS в течение 5 минут каждый раз.
    4. Подвергните предметные стекла воздействию блокирующего раствора (1% BSA; 200-300 мкл на предметное стекло в соответствии с требованиями) и инкубируйте во влажной камере в течение 1 часа.
    5. Приготовьте раствор набора TUNEL, красный TMR, в следующей пропорции: 62,50 мкл блокирующего раствора (1% BSA), 56,25 мкл этикетирующего раствора (TMR-dUTP) и 6,25 мкл фермента (пропорция для каждого предметного стекла). Добавляют приблизительно 130 мкл этого раствора на предметное стекло и выдерживают при 37 °C в течение 1 ч. Затем промойте предметные стекла PBS в течение 5 минут (200 мкл на предметное стекло), 2 раза.
    6. Наложите на образцы предметные стекла, содержащие 1-2 капли антифавальной монтажной среды, с DAPI, а затем инкубируйте предметные стекла при 4 °C в течение не менее 30 минут перед визуализацией.
  3. Окрашивание cGMP в сочетании с окрашиванием TUNEL
    1. Окрашивание cGMP сопровождалось окрашиванием TUNEL. Следуйте шагам окрашивания TUNEL от шага 4.2.1 до шага 4.2.5, а затем продолжите шаги окрашивания cGMP от шага 4.1.2 до шага 4.1.4.
  4. Выполняйте световую и флуоресцентную микроскопию с параметрами камеры следующим образом: время экспозиции = 125 мс, размер ROI = 2752 x 2208, цвет = B/M. Делайте снимки с помощью программного обеспечения. Сфотографируйте четыре различных поля с помощью цифровой камеры с 20-кратным увеличением каждого участка и получите репрезентативные изображения из центральных областей сетчатки с помощью DAPI (465 нм), EGFP (509 нм), TMP (578 нм), при этом сканирование Z-Stack имеет интервал = 1 мкм и опционально = 1,251 мкм.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

В этом исследовании культуру эксплантата сетчатки макаки проводили с использованием эксплантов, содержащих комплекс сетчатка-RPE-сосудистая оболочка (рис. 1, дополнительный рисунок S1). По сравнению с культивированием клеток сетчатки in vitro с использованием сетчатки без прикрепленного RPE и сосудистой оболочки, наша культура эксплантатов способствует лучшей выживаемости клеток и, соответственно, продлевает выживание фоторецепторных клеток.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Визуальная фототрансдукция относится к биологическому процессу, посредством которого световые сигналы преобразуются в электрические сигналы фоторецепторными клетками в сетчатке глаза. Фоторецепторные клетки представляют собой поляризованные нейроны, способные к фототрансдукции, и существует два разных типа фоторецепторов, называемых палочками и колбочками по форме их внешних сегментов. Палочки отвечают за скотопическое зрение, а колбочки — за фотопическое зрение и зрение высокой остроты. Наследственный РД относится к ней...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Все авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Это исследование было поддержано грантами Национального фонда естественных наук Китая (No 81960180), Фонда наследия Зинкэ и Фонда Шарлотты и Тистоу Керстан, Юньнаньского клинического медицинского центра глазных болезней (ZX2019-02-01). Мы благодарим профессора Лунбао Лю (Институт зоологии Китайской академии наук, Куньмин, Китай) за то, что он поделился глазными яблоками обезьян, использованными в этом исследовании.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Бычий сывороточный альбумин (БСА)SigmaB2064Блокирующий раствор
КортикостеронSigmaC2505Добавки полной среды
DL-токоферолSigmaT1539Добавки полной среды
Ослик против овец, Alxea Fluor 488Life technologies corporationA11015Вторичное антитело cGMP
Раствор этанол-уксусной кислотыShyuanyeR20492Фиксирующая жидкость
Фетальная бычья сывороткаGemini900-108Блокирующий раствор
Флуоресцентный микроскопCarl ZeissAxio Imager.M2Иммунофлуоресцентная визуализация
ГлутаминSigmaG8540Добавки полной среды
ГлутатионSigmaG6013Добавки полной среды
in situ Набор для обнаружения гибели клеток, TMR redRoche12156792910TUNEL анализ
инсулинаSigma16634Добавки полной среды
L-цистеин HClSigmaC7477Добавки полной среды
линолевой кислотыSigmaL1012Добавки полной среды
MACS для хранения тканей РастворMiltenyi130-100-008Оптимизированное хранение свежих образцов органов и тканей
Нормальная сыворотка ослякаSolarbioSL050Блокирующий раствор
Параформальдегид (PFA)BiosharpBL539AФиксирующий агент
PEN. / STREP. 100&раз;MilliporeTMS-AB2-CАнтибиотики Пенициллин / Стрептомицин
Фосфатный буферный раствор (PBS)SolarbioP1010Буферный раствор
Повидон-йодShanghailikang310411Дезинфектор
ПрогестеронSigmaP8783Добавки полной средней
протеиназы KMillpore539480Расщеплять белок
R16 mediumLife technologies corporation074-90743AОсновная среда
РетинолSigmaR7632Добавки полной среды
РетинилацетатSigmaR7882Добавки полной среды
Овцы анти-cGMPЯн де Венте, Университет Маастрихта, НидерландыПервичное антитело cGMP
СахарозаGHTECH57-50-1Обезвоживающий агент
T3SigmaT6397Добавки полной среды
Ткань-Тек среда (O.C.T. Compound)SAKURA4583Закладная среда
ТокоферилацетатSigmaT1157Добавки полной среды
ТрансферринSigmaT1283Добавки полной среды
TranswellCorning Incorporated3412
Трис-буфер (TBS)SolarbioT1080Блокирующий буфер
Triton X-100Solarbio9002-93-1Поверхностно-активный агент
VECTASHIELD Среда с DAPIVectorH-1200Монтажная среда
Витамин B1SigmaT1270Добавки полной среды
Витамин B12SigmaV6629Добавки полной среды
Витамин СSigmaA4034Добавки полной среды
ZaprinastSigmaZ0878Ингибитор PDE6
Zeiss Imager M2 Микроскоп  Zeiss, Оберкохен, Германиявертикальный микроскоп
LSM 900 Airyscanлазерный сканирующий микроскоп высокого разрешения
Zeiss Axiocam  Zeiss, Оберкохен, Германияцифровая камера
Zeiss Axiovision4.7
Adobe
Illustrator CC 2021 (Adobe Systems Incorporated, Сан-Хосе, Калифорния)
Глазные яблоки приматов дикого типамакак КУНЬМИНСКИЙ ИНСТИТУТ ЗООЛОГИИSYXK (figure-materials-1) K2017 -0008
Super Pap Pen Pen Pen (Блокатор жидкости, Diado, 0010, Япония
TUNEL kit solution (REF12156792910, Roche, Германия),

Ссылки

  1. O'Neal, T. B., Luther, E. E. StatPearls. , StatPearls Publishing. Copyright 2022, StatPearls Publishing LLC (2022).
  2. Power, M., et al. Cellular mechanisms of hereditary photoreceptor degeneration - Focus on cGMP. Progress in Retinal and Eye Research. 74, 100772(2020).
  3. Paquet-Durand, F., Hauck, S. M., van Veen, T., Ueffing, M., Ekström, P. PKG activity causes photoreceptor cell death in two retinitis pigmentosa models. Journal of Neurochemistry. 108 (3), 796-810 (2009).
  4. Tolone, A., Belhadj, S., Rentsch, A., Schwede, F., Paquet-Durand, F. The cGMP pathway and inherited photoreceptor degeneration: Targets, compounds, and biomarkers. Genes (Basel). 10 (6), 453(2019).
  5. Arango-Gonzalez, B., et al. Identification of a common non-apoptotic cell death mechanism in hereditary retinal degeneration. PLoS One. 9 (11), 112142(2014).
  6. Mencl, S., Trifunović, D., Zrenner, E., Paquet-Durand, F. PKG-dependent cell death in 661W cone photoreceptor-like cell cultures (experimental study). Advances in Experimental Medicine and Biology. 1074, 511-517 (2018).
  7. Power, M. J., et al. Systematic spatiotemporal mapping reveals divergent cell death pathways in three mouse models of hereditary retinal degeneration. Journal of Comparative Neurology. 528 (7), 1113-1139 (2020).
  8. Sancho-Pelluz, J., et al. Excessive HDAC activation is critical for neurodegeneration in the rd1 mouse. Cell Death & Disease. 1 (2), 24(2010).
  9. Kulkarni, M., Trifunović, D., Schubert, T., Euler, T., Paquet-Durand, F. Calcium dynamics change in degenerating cone photoreceptors. Human Molecular Genetics. 25 (17), 3729-3740 (2016).
  10. Trifunović, D., et al. cGMP-dependent cone photoreceptor degeneration in the cpfl1 mouse retina. Journal of Comparative Neurology. 518 (17), 3604-3617 (2010).
  11. Samardzija, M., et al. HDAC inhibition ameliorates cone survival in retinitis pigmentosa mice. Cell Death & Differentiation. 28 (4), 1317-1332 (2021).
  12. Schön, C., et al. Gene therapy successfully delays degeneration in a mouse model of PDE6A-linked Retinitis Pigmentosa (RP43). Human Gene Therapy. 28 (12), 1180-1188 (2017).
  13. McGregor, J. E., et al. Optogenetic therapy restores retinal activity in primate for at least a year following photoreceptor ablation. Molecular Therapy. 30 (3), 1315-1328 (2022).
  14. Lingam, S., et al. cGMP-grade human iPSC-derived retinal photoreceptor precursor cells rescue cone photoreceptor damage in non-human primates. Stem Cell Research & Therapy. 12 (1), 464(2021).
  15. Das, S., et al. The role of cGMP-signalling and calcium-signalling in photoreceptor cell death: perspectives for therapy development. Pflugers Archiv. 473 (9), 1411-1421 (2021).
  16. Hoon, M., Okawa, H., Della Santina, L., Wong, R. O. Functional architecture of the retina: Development and disease. Progress in Retinal and Eye Research. 42, 44-84 (2014).
  17. Schnichels, S., et al. Retina in a dish: Cell cultures, retinal explants and animal models for common diseases of the retina. Progress in Retinal and Eye Research. 81, 100880(2021).
  18. Maryam, A., et al. The molecular organization of human cGMP specific Phosphodiesterase 6 (PDE6): Structural implications of somatic mutations in cancer and retinitis pigmentosa. Computational and Structural Biotechnology Journal. 17, 378-389 (2019).
  19. Huang, L., Kutluer, M., Adani, E., Comitato, A., Marigo, V. New in vitro cellular model for molecular studies of retinitis pigmentosa. International Journal of Molecular Sciences. 22 (12), 6440(2021).
  20. Zhou, J., Rasmussen, M., Ekström, P. cGMP-PKG dependent transcriptome in normal and degenerating retinas: Novel insights into the retinitis pigmentosa pathology. Experimental Eye Research. 212, 108752(2021).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

cGMP PKG6TUNEL
Органотипические культуры экплантатов сетчатки макаки
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.