Здесь мы представляем подробные методы приготовления и оценки назальной самоорганизующейся наноэмульсионной противоопухолевой вакцины in vitro и in vivo.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Препарат, характеристики, токсичность и оценка эффективности назальной самоорганизующейся наноэмульсионной противоопухолевой вакцины in vitro и in vivo
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Эпитопные пептиды привлекли широкое внимание в области противоопухолевых вакцин из-за их безопасности, высокой специфичности и удобного производства; в частности, некоторые эпитопы, ограниченные MHC I, могут индуцировать эффективную активность цитотоксических Т-лимфоцитов для очистки опухолевых клеток. Кроме того, назальное введение является эффективным и безопасным методом доставки опухолевых вакцин из-за его удобства и улучшенной комплаентности пациентов. Однако эпитопные пептиды непригодны для назальной доставки из-за их плохой иммуногенности и недостаточной эффективности доставки. Наноэмульсии (НЭ) представляют собой термодинамически стабильные системы, которые могут быть загружены антигенами и доставлены непосредственно на поверхность слизистой оболочки носа. Ile-Lys-Val-Ala-Val (IKVAV) является основным пентапептидом ламинина, интегринсвязывающего пептида, экспрессируемого респираторными эпителиальными клетками человека. В этом исследовании методом низкоэнергетического эмульгирования была получена интраназальная самоорганизующаяся эпитопная пептидная пептидная опухолевая вакцина NE, содержащая синтетический пептид IKVAV-OVA257-264 (I-OVA ). Комбинация IKVAV и OVA257-264 может усиливать поглощение антигена эпителиальными клетками слизистой оболочки носа. Здесь мы устанавливаем протокол для изучения физико-химических характеристик с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ), атомно-силовой микроскопии (АСМ) и динамического рассеяния света (DLS); стабильность в присутствии белка муцина; токсичность путем изучения жизнеспособности клеток BEAS-2B, а также тканей носа и легких мышей C57BL/6; клеточное поглощение с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM); профили высвобождения путем визуализации мелких животных in vivo; и защитный и терапевтический эффект вакцины с использованием модели E.G7, несущей опухоль. Мы ожидаем, что протокол предоставит технические и теоретические подсказки для будущей разработки новых Т-клеточных эпитопных пептидных вакцин для слизистых оболочек.
Введение
Являясь одной из наиболее важных инноваций в области общественного здравоохранения, вакцины играют ключевую роль в борьбе с глобальным бременем болезней человека1. Например, в настоящее время тестируется более 120 вакцин-кандидатов от болезней COVID-19, некоторые из которых были одобрены во многих странах2. В недавних сообщениях говорится, что противораковые вакцины эффективно улучшили прогресс клинического лечения рака, поскольку они направляют иммунную систему больных раком на распознавание антигенов как чужеродных для организма3. Кроме того, множественные Т-клеточные эпитопы, расположенные внут....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Эксперименты на животных проводились в соответствии с Руководством по этической экспертизе благополучия животных на лабораторных животных (GB/T 35892-2018) и были одобрены Комитетом по благополучию и этике лабораторных животных Третьего военно-медицинского университета. Мышей усыпляли внутрибрюшинной инъекцией 100 мг / кг 1% пентобарбитала натрия.
1. Подготовка I-OVA NE
- Смешайте 1 мг монофосфориллипида А (MPLA) со 100 мкл ДМСО, встряхните в течение 5 мин и дайте ему постоять в течение 4 ч при комнатной температуре (RT) до полного растворения.
- Количественно добавьте Tween 80 и I-OVA и перемешайте.
ПРИМ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
В соответствии с протоколом мы завершили подготовку и экспериментальную оценку in vitro и in vivo доставки нановакцины против опухоли носа. TEM, AFM и DLS являются эффективными средствами для оценки основных характеристик поверхностного дзета-потенциала и размера частиц нановакцины (рис. 1). Эпителиальные клетки BEAS-2B являются полезной скрининговой моделью для тестирования токсичности назальных вакцин in vitro (рис. 2A). Микрофотогра.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Нановакцины, функционализированные мембранами иммуноцитов, имеют большие преимущества в терапии, направленной на болезнь, а побочные эффекты сводятся к минимуму благодаря таким свойствам, как уникальный опухолевый тропизм, идентификация специфических мишеней, длительная циркуляция, усиление межклеточных взаимодействий и низкая системная токсичность. Они также могут быть легко интегрированы с другими модулями лечения для совместного лечения рака 16,20. Желательные.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет известных конкурирующих финансовых интересов или личных отношений, которые могли бы повлиять на работу, представленную в этой статье.
Благодарности
Это исследование было поддержано No 31670938, 32070924, 32000651 Программы Национального фонда естественных наук Китая, No 2014jcyjA0107 и No 2019jcyjA-msxmx0159 Проектной программы Фонда естественных наук Чунцина, No 2020XBK24 и No 2020XBK26 специальных проектов Армейского медицинского университета, а также No 202090031021 и No 202090031035 Национальной программы инноваций и предпринимательства для студентов колледжей.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 96-луночные планшеты | Corning Incorporated, США CLS3922 | ||
| Считыватель микропланшетов Bio-Rad 6.0 | Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, США | Bio-Rad 6.0 | |
| CCK-8 kits | Dojindo, Япония | CK04 | |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf, Германия | ||
| DAPI | Sigma-Aldrich, Сент-Луис, США | D9542 | |
| фетальная бычья сыворотка (FBS) | Hyclone (Life Technology, США) | SH30088.03 | |
| FITC-меченая I-OVA | Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd. | NA | |
| HF 90/240 Инкубатор | Heal Force, Швейцария | NA | |
| HPLC | Шанхайская компания Botai Biotechology Co., Ltd. | E2695 | |
| Инвертированный микроскоп | Nikon, Япония | DSZ5000X | |
| IPC-208 | Университет Чун Цин, Китай | NA | |
| система IVIS | Caliper Life Science Limited Company | NA | |
| JEM-1230 TEM | JEOL Limited Company of Japan | 1230 TEM | |
| Malvern NANO ZS | Malvern Instruments Ltd., Великобритания | NA | |
| MPLA | Invivogen Lit. Co. | tlrl-mpla | |
| Мазь с неомицина сульфатом | Shanghai CP General Pharmaceutical Co., Ltd. | ||
| OVA257– 264 | Шанхай Ботай<бр/> Биотехнология Ко., Лтд. | NA | |
| RPMI 1640 medium | Hyclone (Life Technology, США) | SH30809.01 | |
| Конъюгация синтетического пептида (I-OVA) IKVAV-PA | Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd. | NA | |
| Zeiss LSM800 лазерный сканирующий конфокальный флуоресцентный микроскоп | Zeiss, Германия | Zeiss LSM800 |
Ссылки
- Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).
- Mohammed, I., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
