Методическая статья

Автоматическое отделение и сбор веществ, связанных с раком, из клинических образцов

2.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/64325

⸱

13 января 2023 г.

 ,  ,  , 
1Clinomics Inc.

В этой статье

Краткое содержание

В этой статье описывается применение автоматизированного оборудования для легкого и эффективного отделения и сбора веществ, таких как бесклеточная ДНК и циркулирующие опухолевые клетки, из цельной крови.

Аннотация

В последнее время жидкие биопсии стали использоваться для диагностики различных заболеваний, в том числе рака. Жидкости организма содержат много веществ, включая клетки, белки и нуклеиновые кислоты, происходящие из нормальных тканей, но некоторые из этих веществ также происходят из больной области. Исследование и анализ этих веществ в жидкостях организма играют ключевую роль в диагностике различных заболеваний. Поэтому важно точно отделить необходимые вещества, и для использования с этой целью разработано несколько методик.

Мы разработали устройство и платформу типа «лаборатория на диске» под названием CD-PRIME. Это устройство автоматизировано и имеет хорошие результаты по загрязнению образца и стабильности образца. Кроме того, он имеет преимущества хорошей доходности приобретения, короткого времени работы и высокой воспроизводимости. Кроме того, в зависимости от типа диска, подлежащего установке, плазма, содержащая бесклеточную ДНК, циркулирующие опухолевые клетки, мононуклеарные клетки периферической крови или пушистые оболочки могут быть разделены. Таким образом, приобретение различных материалов, присутствующих в жидкостях организма, может быть сделано для различных последующих применений, включая изучение омики.

Введение

Раннее и точное выявление различных заболеваний, в том числе онкологических, является важнейшим фактором в установлении стратегии лечения 1,2,3,4. В частности, раннее выявление рака тесно связано с повышением шансов на выживаемость пациента 5,6,7,8. В последнее время жидкие биопсии находятся в центре внимания для раннего выявления рака. Солидные опухоли подвергаются ангиогенезу и выделяют в кровь различные вещества. В частности, вкрови больных раком обнаружены циркулирующие ДНК (ctDNAs), циркулирующие РНК (ctRNAs), белки, везикулы, такие как экзосомы, и циркулирующие опухолевые клетки (CTC). Хотя существуют различия в количестве этих веществ, они последовательно наблюдаются не только на ранних стадиях, но и на более поздних стадиях 6,10. Однако эти индивидуальные различия очень высоки; например, количество бесклеточной ДНК (cfDNA), содержащей ctDNA, составляет менее 1000 нг, а количество CTC составляет менее 100 в 10 мл цельной крови у больных раком 11,12,13. Многие исследования характеризуют рак с использованием этих веществ, присутствующих в меньших количествах (например, cfDNA, ctDNA и CTC). Для получения точных результатов важно точно отделить небольшие количества веществ с высокой чистотой13,14. Обычно используются обычные методы центрифугирования, но они сложны в обращении и имеют низкую чистоту в зависимости от навыков пользователя. С момента открытия CTC было разработано несколько методов разделения, таких как центрифугирование или разделение по плотности, иммуногранула и микрофлюидные методы. С момента открытия ЦОК было разработано несколько методов сдерживания. Однако эти методы часто ограничены, когда необходимо изолировать клетки из различных чипов и мембран, используемых для их выделения15. Кроме того, методы маркировки требуют такого оборудования, как FACS, и существуют ограничения на последующий процесс из-за загрязнения маркировки.

В последнее время возросло использование жидких биопсий, и проводятся различные исследования для раннего выявления рака. Хотя этот метод прост, все еще существуют трудности в последующем анализе, и различные исследования пытаются преодолеть эти трудности16,17. Кроме того, многие сайты, включая больницы, требуют автоматизированных, воспроизводимых и высокочистых методов, которые удобны в использовании. Здесь мы разработали лабораторию на диске для автоматического отделения веществ от образцов крови после жидкой биопсии. Эти устройства основаны на принципе центрифугирования, микрофлюидики и захвата клеток размером с пору. Существует три типа дисков: LBx-1 может приобретать плазму и пышную оболочку, в то время как LBx-2 может приобретать плазму и PBMC из цельной крови объемом менее 10 мл; FAST-auto также может приобретать CTC с помощью мембраны, которая снимается с диска. До четырех дисков можно использовать за один прогон. Прежде всего, преимущество этого устройства и метода заключается в том, что он может получать различные вещества, полученные из рака, из одного и того же образца, используя небольшое количество крови. Это означает, что кровь пациента должна быть взята только один раз. Кроме того, он имеет преимущество в исключении ошибок из-за различий в периоде забора крови. Эта платформа проста в использовании и обеспечивает точные результаты для жидких биопсий и последующих применений. В этом протоколе введено использование устройства и картриджа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все образцы цельной крови были получены от пациентов с раком легких. Исследования и анализ в Clinomics проводятся Научно-исследовательским институтом геномики рака, а одобрение исследований IRB правительством возглавляется Комитетом по институциональному обзору Медицинского центра Асана (IRB NO. 2021-0802) с номером IRB, зарегистрированным для исследований в Clinomics.

1. Пробоподготовка

  1. Соберите 9 мл цельной крови в ЭДТА или cfDNA-стабильную пробирку для сбора крови.
  2. Хорошо перемешайте, перевернув трубку вверх и вниз примерно 10 раз.
  3. Хранить образцы при комнатной температуре (RT; для кратковременного хранения) или 4 °C (для длительного хранения). Не замораживать и не оттаивать.

2. Подготовка устройства

  1. Нажмите выключатель питания, чтобы включить прибор.
    ПРИМЕЧАНИЕ: На сенсорной панели появляется экран загрузки, и инструмент инициализируется. Держите руки подальше от инструмента во время инициализации. Экран выбора картриджа появится после завершения инициализации прибора.
  2. Выберите режим примера, который будет использоваться. Измените количество образцов, нажав стрелку.

3. Работа устройства и сбор образцов

  1. Загрузка патрона LBx-1
    1. Выберите тип картриджа на сенсорной панели прибора. Измените количество образцов, нажав кнопку со стрелкой.
    2. Откройте дверцу прибора и вставьте все картриджи, которые будут использоваться, в порядке количества на держателе картриджа. Убедитесь, что картридж правильно вставлены и держатель картриджа. Если картридж вставлен неправильно, это может привести к значительному повреждению инструмента.
    3. В общей сложности четыре картриджа поместите фиктивный картридж в пустое пространство держателя картриджа.
    4. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его.
    5. Закройте дверь и нажмите кнопку RUN на экране сенсорной панели. Прибор закрывает клапаны на картриджах, что занимает примерно 30 с.
    6. Следуйте сообщению, чтобы открыть дверцу, снять опорное колесо и извлечь закрытый клапан картридж из держателя картриджа.
    7. Положите картридж на стол и подготовьтесь к введению образца цельной крови. Пипетка максимум 10 мл образца цельной крови с использованием серологической пипетки.
      ВНИМАНИЕ: Опасность обращения с кровью. Во время всей процедуры обращения с образцами крови и реагентами важно носить лабораторный халат и лабораторные перчатки. Предоставленный MSDS должен быть тщательно изучен работниками лаборатории.
    8. Вставьте наконечник пипетки глубоко во входное отверстие картриджа и медленно введите образец цельной крови.
      ПРИМЕЧАНИЕ При использовании более или равного 9 мл образца цельной крови добавление фосфатно-буферного физиологического раствора (PBS) не требуется. При использовании менее 9 мл образца цельной крови добавьте PBS, чтобы сделать общий объем до 9 мл. Например, при использовании 7,2 мл цельной крови, пожалуйста, добавьте 1,8 мл PBS во входное отверстие образца. Серологическая пипетка или наконечник пипетки могут быть использованы для инъекций цельной крови и PBS. При использовании менее 8 мл образца цельной крови пышная оболочка не может быть восстановлена даже путем добавления 1 мл PBS. Для подготовки к гДНК используйте 200 мкл цельной крови, которая была отделена до этого этапа.
    9. Вставьте картриджи, которые будут использоваться, в порядке количества на держателе картриджа. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его. Закройте дверь и нажмите кнопку OK .
      ПРИМЕЧАНИЕ: Плазма и пышная оболочка отделяются от цельной крови автоматически, что занимает около 30 минут.
      ОСТОРОЖНО Опасность во время работы. Открытие двери или прикосновение к инструменту во время высокоскоростных операций вращения может привести к серьезным травмам. Также существует риск получения травмы из-за асимметричной нагрузки ротора. Если необычные вибрации и шумы возникают, когда инструмент запускается в режиме вспомогательного обогащения клеток или экспертном режиме, размещение картриджа может быть асимметричным. Немедленно нажмите клавишу питания, чтобы остановить и правильно установить картридж.
    10. Ищите сообщение на экране, сопровождаемое звуком тревоги, который появляется, когда разделение плазмы и пышного пальто завершено.
    11. Остановите сигнал тревоги, открыв дверь или нажав кнопку STOP . Откройте дверцу, извлеките картридж и положите его на стол.
    12. Извлеките 3 мл плазмы из плазменного выхода с помощью наконечника пипетки объемом 1 мл. Извлеките пушистый слой объемом 3 мл из выходного отверстия для пальто с помощью наконечника пипетки объемом 1 мл.
  2. Загрузка картриджа LBx-2
    1. Выберите имя картриджа на сенсорной панели прибора. Измените количество образцов, нажав кнопку со стрелкой.
    2. Откройте дверцу и вставьте картриджи, которые будут использоваться, в порядке номера на держателе картриджа.
    3. В общей сложности четыре картриджа поместите фиктивный картридж в пустое пространство держателя картриджа.
    4. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его. Убедитесь, что картридж правильно вставлен в держатель картриджа. Если картридж вставлен неправильно, это может привести к значительному повреждению инструмента.
    5. Закройте дверь и нажмите кнопку RUN на экране сенсорной панели. Прибор закрывает клапаны на картридже, что занимает примерно 30 с.
    6. Следуйте сообщению, чтобы открыть дверцу, снять опорное колесо, а также извлечь закрытый клапан картридж из держателя картриджа и поместить его на стол.
    7. Положите картридж на стол и подготовьтесь к введению раствора градиента плотности и образца цельной крови. Проверьте объем раствора градиента плотности и PBS, подлежащего инъекции, в зависимости от объема образца цельной крови (дополнительная таблица 1).
    8. Пипетка градиентного раствора плотности с помощью серологической пипетки. Вставьте наконечник пипетки глубоко во входное отверстие картриджа и медленно введите раствор градиента плотности.
    9. После инъекции раствора градиента плотности пипетку образца цельной крови с помощью серологической пипетки. Вставьте наконечник пипетки глубоко во входное отверстие картриджа и медленно введите образец цельной крови.
      ПРИМЕЧАНИЕ: При использовании менее 9 мл образца цельной крови добавьте PBS, ссылаясь на эту таблицу (Дополнительная таблица 1).
    10. Вставьте картриджи для использования в соответствии с номером на держателе картриджа. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его. Закройте дверь и нажмите кнопку OK .
    11. Плазма и PBMC отделяются от цельной крови автоматически, что занимает примерно 30 минут. Ищите сообщение, которое появляется, сопровождаемое звуком тревоги, когда разделение плазмы и PBMC завершено.
    12. Остановите сигнал тревоги, открыв дверь или нажав кнопку STOP . Откройте дверцу, извлеките картридж и положите его на стол.
    13. Извлеките 3 мл плазмы из плазменного выхода с помощью наконечника пипетки объемом 1 мл. Извлеките 3 мл PBMC из розетки PBMC с помощью наконечника пипетки объемом 1 мл.
  3. Загрузка картриджа FAST-auto
    1. Выберите картридж на сенсорной панели прибора. Измените количество образцов, нажав кнопку со стрелкой.
    2. Откройте дверцу и вставьте картриджи, которые будут использоваться, в порядке номера на держателе картриджа. В общей сложности четыре картриджа поместите фиктивный картридж в пустое пространство держателя картриджа.
    3. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его.
    4. Закройте дверь и нажмите кнопку RUN на экране сенсорной панели. Прибор закрывает клапаны на картридже, что занимает примерно 30 с.
    5. Следуйте сообщению, чтобы открыть дверцу, снять опорное колесо и извлечь закрытый клапан картридж из держателя картриджа.
    6. Поместите картридж на стол и подготовьтесь к инъекции раствора PBS и образца цельной крови. Пипетка 6 мл раствора PBS с использованием серологической пипетки. Вставьте наконечник пипетки глубоко во входное отверстие картриджа PBS и медленно введите 6 мл раствора PBS.
    7. После инъекции раствора PBS пипетку 3 мл цельной крови или образца PBMC, полученного из LBx-2 с использованием серологической пипетки, которую предварительно промывали 1% BSA для предотвращения прилипания остатка. Вставьте наконечник пипетки глубоко во входное отверстие картриджа и медленно введите образец цельной крови.
    8. Вставьте картриджи, которые будут использоваться, в порядке количества на держателе картриджа. Используйте опорное колесо для крепления картриджа и затяните стопорную гайку, чтобы закрепить его. Закройте дверь и нажмите кнопку OK .
    9. ЦОК обогащаются цельной кровью автоматически, что занимает примерно 15 минут. Найдите сообщение, которое появляется в сопровождении звукового сигнала тревоги, когда обогащение CTC завершено. Остановите сигнал тревоги, открыв дверь или нажав кнопку STOP .
    10. Откройте дверцу, извлеките картридж и положите его на стол. Вставьте устройство для удаления задней пластины (BPR) в четыре отверстия на передней панели картриджа. Нажмите на темно-синее крыло большими пальцами обеих рук, а затем нажимайте на светло-голубое тело, пока оно не щелкнет.
    11. Осторожно извлеките корпус картриджа, подняв его вверх. Очень аккуратно подберите фильтрующую мембрану за край с помощью пинцета. Пожалуйста, убедитесь, что вы используете внешний обод (крайняя часть шириной 1 мм) фильтрующей мембраны, чтобы зажать и удерживать фильтрующую мембрану.
    12. Осторожно поместите фильтрующую мембрану (на которой находятся обогащенные ЦОК) в трубку объемом 1,5 мл для приготовления нуклеиновых кислот. При необходимости восстановите отфильтрованную кровь к выходу крови с помощью наконечника пипетки объемом 1 мл.

4. Обслуживание системы

  1. Подготовка к очистке и дезинфекции инструмента
    1. Очищайте все доступные поверхности инструмента и аксессуаров раз в неделю, используя этанол и высушенные ткани, а также сразу при загрязнении.
    2. Регулярно очищайте чашу и вал ротора, используя спирт (этанол и изопропанол) или дезинфицирующие средства на спиртовой основе.
  2. Очистка и дезинфекция инструмента
    ПРИМЕЧАНИЕ: Общие сведения об устранении неполадок и другие примечания на устройстве см. в Дополнительной таблице 2.
    1. Выключите прибор с помощью главного выключателя питания. Отсоедините вилку питания от блока питания.
    2. Откройте дверцу и очистите и продезинфицируйте все доступные поверхности инструмента, включая кабель питания, используя влажную ткань и рекомендуемые чистящие средства.
    3. Проверьте вал ротора на наличие повреждений. Осмотрите прибор на предмет коррозии и повреждений.
    4. Подключайте прибор к блоку питания только в том случае, если он полностью высох внутри и снаружи.
  3. Отсоедините основную вилку питания и извлеките держатель предохранителя. Держатель предохранителя расположен над розеткой. Замените использованный предохранитель на запасной из контейнера.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Целью этой методики является легкое и автоматическое выделение связанных с раком веществ из цельной крови. В частности, любой желающий может использовать эту технику во всех подходящих областях исследований и анализа. Одновременное и воспроизводимое разделение нескольких веществ в одном образце крови имеет значение при жидкой биопсии. Диски LBx-1 и LBx-2 используются для выделения плазмы и пышной оболочки или PBMC из цельной крови. На рисунке 1 показаны материалы, разделенные применением дан...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Количество и концентрация cfDNA и CTC зависит от индивидуальности, стадии и типа рака. Это также зависит от состояния больного 2,4,5,10,20. В частности, на ранних или предраковых стадиях рака концентрации связанных с раком веществ очень низкие, поэтому существует высокая вероятность того, что его невозможно обнаружить. Тем не менее, раннее выявление оказывает ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, связанного с данной работой.

Благодарности

Эта рукопись была частично поддержана Корейским фондом разработки медицинских изделий (KMDF, грант No RS-2020-KD000019) и Корейским институтом развития индустрии здравоохранения (KHIDI, грант No HI19C0521020020).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1% BSA (Бычий сывороточный альбумин)Sigma-AldrichA3059
1,5 мл Микроцентрифужная пробиркаAxygenMCT-150-C-S
15 мл Коническая пробиркаSPL50015
4150 TapeStation SystemAgilentG2992AAЛента для скрининга бесклеточной ДНК (Agilent, 5067-5630), буфер для образцов бесклеточной ДНК (Agilent, 5067-5633)
Apostle MiniMax Высокоэффективный набор для выделения ДНК без клеток ApostleA17622-2505 мл X 50 подготовительная версия
BD Vacutainer пробирки для сбора кровиBD367525EDTA Пробирка для сбора крови (10 мл)
BioViewCCBSClinomicsИндивидуальная система Bioview. Оборудование для кастомизации на базе микроскопа Allegro Plus
CD45 Моноклональное антитело (HI30), PE-Alexa Fluor 610InvitrogenMHCD4522
FAST Автоматический картриджClinomicsCLX-M3001
LBx-1картридж ClinomicsCLX-M4101
LBx-2ClinomicsCLX-M4201
OPR-2000 инструментClinomicsCLX-I2001
Защитное стеклоMarienfeld SuperiorHSU-0101040
DynaMag 2 Магнитная подставкаThermo Fisher Scientific12321D
Ficoll Paque SolutionGE здравоохранение17-1440-03градиент плотности раствор
Фильтрующий наконечник, 10 & микро; LAxygenAX-TF-10Наконечники для пипеток с аэрозольными барьерами рекомендуются для предотвращения перекрестного загрязнения.
Фильтрующий наконечник, 200 & микро; LAxygenAX-TF-200Наконечники для пипеток с аэрозольными барьерами рекомендуются для предотвращения перекрестного загрязнения.
Фильтрующий наконечник, 100 & микро; LAxygenAX-TF-100Наконечники для пипеток с аэрозольными барьерами рекомендуются для предотвращения перекрестного загрязнения.
Наконечник с фильтром, 1000 & микро; LAxygenAX-TF-1000Наконечники для пипеток с аэрозольными барьерами рекомендуются для предотвращения перекрестного загрязнения.
FITC anti-human CD326 (EpCAM) антителоBioLegend324204
FITC Мышиный античеловеческий цитокератинBD Biosciences347653
раствор формальдегида (35 мас. % в H2O)Sigma Aldrich433284
Kimtech Science WipersYuhan-Kimberly41117
Латексная перчаткаMicroflex63-754
Штатив для разделения магнитных шариковV& P ScientificVP 772F2M-2
Ручное пипетирование  (0,5-10 & микро; L)Eppendorf3120000020
ручное пипетирование  (2-20 & микро; L)Eppendorf3120000038
ручное пипетирование  (10-100 & микро; L)Eppendorf3120000046
ручное пипетирование  (20-200 & микро; L)Eppendorf3120000054
ручное пипетирование  (100-1000 & микро; L)Монтажная среда Eppendorf3120000062
с DAPI - водная, флюорощитокabcamab104139
для нормального контроля IgG человекаR& D Systems1-001-A
OLYMPUS BX-UCBOlympus9217316
Пан-цитокератиновое моноклональное антитело (AE1/AE3), Alexa Fluor 488Invitrogen53-9003-82
PBS (фосфатно-солевой буферный раствор)Corning21-040CVC
Портативный пипеточный помощникDrummond4-000-201
Слайд-стеклоMarienfeld SuperiorHSU-1000612
Коробка для окрашивания StainTraySimportM920
Стерильная серологическая пипетка (10 мл)SPL91010
Triton  Решение X-100Sigma Aldrich93443
TWEEN  20Sigma AldrichP7949
Цельная кровьхранящаяся при температуре 4-8 °°; C путем сбора в ЭДТА или стабильную пробирку cfDNA: Если в цельной крови недостаточно 9 мл, добавьте PBS (фосфатно-солевой буфер) столько, сколько необходимо.
X-Cite 120Q (Осветитель люминесцентной лампы)Excelitas010-00157
,

Ссылки

  1. Babayan, A., Pantel, K. Advances in liquid biopsy approaches for early detection and monitoring of cancer. Genome Medicine. 10 (1), 21(2018).
  2. Crowley, E., Di Nicolantonio, F., Loupakis, F., Bardelli, A. Liquid biopsy: monitoring cancer-genetics in the blood. Nature Reviews Clinical Oncology. 10 (8), 472-484 (2013).
  3. Bardelli, A., Pantel, K. Liquid biopsies, what we do not know (yet). Cancer Cell. 31 (2), 172-179 (2017).
  4. Mattox, A. K., et al. Applications of liquid biopsies for cancer. Science Translational Medicine. 11 (507), (2019).
  5. Heitzer, E., Perakis, S., Geigl, J. B., Speicher, M. R. The potential of liquid biopsies for the early detection of cancer. NPJ Precision Oncology. 1 (1), 36(2017).
  6. Scudellari, M. Myths that will not die. Nature. 582 (7582), 322-326 (2015).
  7. Prasad, V., Fojo, T., Brada, M. Precision oncology: origins, optimism, and potential. The Lancet Oncology. 17 (2), 81-86 (2016).
  8. Prasad, V. Perspective: The precision-oncology illusion. Nature. 537 (7619), 63(2016).
  9. Siravegna, G., Marsoni, S., Siena, S., Bardelli, A. Integrating liquid biopsies into the management of cancer. Nature Reviews Clinical Oncology. 14 (9), 531-548 (2017).
  10. Bettegowda, C., et al. Detection of circulating tumor DNA in early-and late-stage human malignancies. Science Translational Medicine. 6 (224), 24(2014).
  11. Udomruk, S., Orrapin, S., Pruksakorn, D., Chaiyawat, P. Size distribution of cell-free DNA in oncology. Critical Reviews in Oncology/Hematology. 166, 103455(2021).
  12. Paterlini-Brechot, P., Benali, N. L. Circulating tumor cells (CTC) detection: clinical impact and future directions. Cancer Letters. 253 (2), 180-204 (2007).
  13. Loeian, M. S., et al. Liquid biopsy using the nanotube-CTC-chip: capture of invasive CTCs with high purity using preferential adherence in breast cancer patients. Lab on a Chip. 19 (11), 1899-1915 (2019).
  14. Rikkert, L. G., Van Der Pol, E., Van Leeuwen, T. G., Nieuwland, R., Coumans, F. A. W. Centrifugation affects the purity of liquid biopsy-based tumor biomarkers. Cytometry Part A. 93 (12), 1207-1212 (2018).
  15. Sharma, S., et al. Circulating tumor cell isolation, culture, and downstream molecular analysis. Biotechnology advances. 36 (4), 1063-1078 (2018).
  16. Bennett, C. W., Berchem, G., Kim, Y. J., El-Khoury, V. Cell-free DNA and next-generation sequencing in the service of personalized medicine for lung cancer. Oncotarget. 7 (43), 71013(2016).
  17. Lowes, L. E., et al. Circulating tumor cells (CTC) and cell-free DNA (cfDNA) workshop 2016: scientific opportunities and logistics for cancer clinical trial incorporation. International Journal of Molecular Sciences. 17 (9), 1505(2016).
  18. Bryzgunova, O. E., Konoshenko, M. Y., Laktionov, P. P. Concentration of cell-free DNA in different tumor types. Expert Review of Molecular Diagnostics. 21 (1), 63-75 (2021).
  19. Park, Y., et al. Circulating tumour cells as an indicator of early and systemic recurrence after surgical resection in pancreatic ductal adenocarcinoma. Scientific Reports. 11 (1), 1-12 (2021).
  20. Heidrich, I., Ačkar, L., Mossahebi Mohammadi, P., Pantel, K. Liquid biopsies: Potential and challenges. International Journal of Cancer. 148 (3), 528-545 (2021).
  21. Celec, P., Vlková, B., Lauková, L., Bábíčková, J., Boor, P. Cell-free DNA: the role in pathophysiology and as a biomarker in kidney diseases. Expert Reviews in Molecular Medicine. 20, 1(2018).
  22. Thierry, A. R., et al. Origin and quantification of circulating DNA in mice with human colorectal cancer xenografts. Nucleic Acids Research. 38 (18), 6159-6175 (2010).
  23. Moreira, V. G., de la Cera Martínez, T., Gonzalez, E. G., Garcia, B. P., Menendez, F. V. A. Increase in and clearance of cell-free plasma DNA in hemodialysis quantified by real-time PCR. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM). 44 (12), 1410-1415 (2006).
  24. Gauthier, V. J., Tyler, L. N., Mannik, M. Blood clearance kinetics and liver uptake of mononucleosomes in mice. Journal of Immunology. 156 (3), 1151-1156 (1996).
  25. Meng, S., et al. Circulating tumor cells in patients with breast cancer dormancy. Clinical Cancer Research. 10 (24), 8152-8162 (2004).
  26. Alix-Panabières, C., Pantel, K. Challenges in circulating tumour cell research. Nature Reviews Cancer. 14 (9), 623-631 (2014).
  27. Zhou, J., et al. Isolation of circulating tumor cells in non-small-cell-lung-cancer patients using a multi-flow microfluidic channel. Microsystems & Nanoengineering. 5 (1), 8(2019).
  28. Sajay, B. N. G., et al. Towards an optimal and unbiased approach for tumor cell isolation. Biomedical Microdevices. 15 (4), 699-709 (2013).
  29. Bailey, P. C., Martin, S. S. Insights on CTC biology and clinical impact emerging from advances in capture technology. Cells. 8 (6), 553(2019).
  30. Ahn, S. M., Simpson, R. J. Body fluid proteomics: Prospects for biomarker discovery. Proteomics-Clinical Applications. 1 (9), 1004-1015 (2007).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи