Микродиссекция глаза грызуна

K. Varsha Mohan; Prakriti Sinha; Bharati Swami; Abaranjitha Muniyasamy; Perumal Nagarajan; Pramod Upadhyay

doi:10.3791/64414

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Микродиссекция глаза грызуна

7.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/64414

⸱

21 апреля 2023 г.

K. Varsha Mohan¹ , Prakriti Sinha¹ , Bharati Swami¹ , Abaranjitha Muniyasamy¹ , Perumal Nagarajan¹ , Pramod Upadhyay¹

¹National Institute of Immunology

В этой статье

Краткое содержание

В данной работе представлен протокол микродиссекции глаза у грызунов. Процесс включает энуклеацию глазного яблока вместе с мигательной мембраной (т.е. третьим веком). Затем следует разделение заднего и переднего наглазников.

Аннотация

Глазное микрорассечение глаза грызуна включает сегментацию энуклеированного глазного яблока с прикрепленной мигательной мембраной или третьим веком для получения переднего и заднего наглазников. С помощью этого метода подчасти глаза, включая ткань роговицы, нервную ткань, ткань пигментного эпителия сетчатки (RPE) и хрусталик, могут быть получены для цельных суспензий, криосекций и/или одноклеточных суспензий конкретной ткани глаза. Наличие третьего века представляет собой уникальные и значительные преимущества, поскольку оно способствует поддержанию ориентации глаза, что важно для понимания физиологии глаза после любого локализованного вмешательства или в исследованиях, включающих глазной анализ, связанный с пространственной топографией глаза.

В этом методе мы энуклеировали глазное яблоко в глазнице вместе с третьим веком, осторожно и медленно разрезая экстраокулярные мышцы и разрывая зрительный нерв. Глазное яблоко было проткнуто через лимб роговицы с помощью микролезвия. Разрез был использован в качестве точки входа, что позволило разрезать вдоль роговицы-склерального соединения путем введения микроножниц через точку разреза. Небольшие и непрерывные надрезы по окружности делались до тех пор, пока чашечки не разошлись. Они могут быть дополнительно рассечены путем осторожного отслаивания полупрозрачного слоя нервной сетчатки с помощью щипцов для наложения швов Colibri для получения слоев нервной сетчатки и RPE. Далее от периферии перпендикулярно к зрительному центру делали три/четыре равноудаленных разреза до тех пор, пока не был достигнут зрительный нерв. Это открыло полусферические чашечки в форме цветка, так что они упали плашмя и могли быть легко установлены. Этот метод был использован в нашей лаборатории для целых срезов роговицы и сетчатки. Наличие третьего века очерчивает носово-временную ориентацию, что позволяет изучать различные вмешательства клеточной терапии после трансплантации и, таким образом, целенаправленную физиологическую валидацию, жизненно важную для визуализации и точного представления в таких исследованиях.

Введение

Вскрытие глаза является важным методом в офтальмологических исследованиях и позволило исследователям получить доступ к сегментам глаза для целевых исследований. Ранее офтальмологи полагались на глазную ткань больных людей для своих исследований. Однако постепенно растущее число штаммов офтальмологических моделей грызунов¹ с годами уменьшило потребность в глазной ткани человека. Эти штаммы мышей позволили глубже понять глазные заболевания и вмешательства. Тем не менее, они также породили потребность в инновационных методах микродиссекции глаза. Малый размер и ограниченная область операции серьезно ограничивают эффективный доступ к подразделению ....