Здесь мы описываем доклиническую ортотопическую модель мыши для GBM, созданную путем внутричерепной инъекции клеток, полученных из генетически модифицированных опухолей мыши. Эта модель отображает признаки заболевания ГБМ человека. Для трансляционных исследований опухоль головного мозга мыши отслеживается с помощью МРТ in vivo и гистопатологии.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Трансляционные ортотопические модели мультиформной глиобластомы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Генетически модифицированные мышиные модели (GEM) для мультиформной глиобластомы человека (GBM) имеют решающее значение для понимания развития и прогрессирования опухолей головного мозга. В отличие от опухолей ксенотрансплантата, в ГЭУ опухоли возникают в нативном микроокружении у иммунокомпетентной мыши. Тем не менее, использование GBM GEM в доклинических исследованиях лечения является сложной задачей из-за длительных латентных периодов опухоли, гетерогенности частоты новообразований и сроков развития опухоли поздней степени. Мыши, индуцированные с помощью внутричерепной ортотопической инъекции, более пригодны для доклинических исследований и сохраняют черты опухолей GEM. Мы создали ортотопическую модель опухоли головного мозга, полученную из модели GEM с аберрациями Rb, Kras и p53 (TRP), в которой развиваются опухоли GBM, демонстрирующие линейные очаги некроза опухолевыми клетками и плотную васкуляризацию, аналогичную GBM человека. Клетки, полученные из опухолей GEM GBM, вводят внутричерепно мышам-реципиентам дикого типа, соответствующим штамму, и воспроизводят опухоли IV степени, таким образом, обходя длительный латентный период опухоли у мышей GEM и позволяя создавать большие и воспроизводимые когорты для доклинических исследований. Высокопролиферативные, инвазивные и сосудистые особенности модели TRP GEM для GBM повторяются в ортотопических опухолях, а гистопатологические маркеры отражают подгруппы GBM человека. Рост опухоли контролируется серийными МРТ-сканированиями. Из-за инвазивного характера внутричерепных опухолей в иммунокомпетентных моделях тщательное следование описанной здесь процедуре инъекции имеет важное значение для предотвращения роста экстракраниальной опухоли.
Введение
Глиобластома (GBM; глиома IV степени) является наиболее распространенной и злокачественной опухолью головного мозга, и современные методы лечения неэффективны, что приводит к средней выживаемости 15 месяцев1. Надежные и точные доклинические модели, представляющие сложные сигнальные пути, участвующие в росте и патогенезе опухоли головного мозга, необходимы для ускорения прогресса в оценке новых терапевтических схем для ГБМ. Мышиные модели, в которых линии опухолевых клеток головного мозга человека имплантируются подкожно мышам с ослабленным иммунитетом, не отражают нативную иммунную среду опухолей головного мозга и не могут быть использованы для....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Протокол исследования, описанный здесь, был одобрен NCI в Комитете по уходу за животными и их использованию Фредерика. NCI-Frederick аккредитован AAALAC International и следует Политике службы общественного здравоохранения по уходу за лабораторными животными и их использованию. Уход за животными осуществлялся в соответствии с процедурами, изложенными в «Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных» (Национальный исследовательский совет, 2011; Издательство Национальной академии, Вашингтон, округ Колумбия).
1. Подготовка клеток к инъекции
ПРИМЕЧАНИЕ: Первичные клетки опухоли головного м....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Мышей, которым вводили опухолевые клетки головного мозга, следует ежедневно контролировать на наличие признаков роста опухоли, таких как судороги, атаксия или потеря веса. Рост опухоли головного мозга также можно контролировать с помощью МРТ-сканирования через регулярные промежутки времени. Еженедельное МРТ-сканирование позволяет визуализировать увеличение опухолевой нагрузки в головном мозге и измерения объема опухоли (рис. 1C). В частности, опухоли TRP демонстрируют агрессивный рост, а 3D-.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Доклинические модели необходимы для оценки новых терапевтических мишеней и новых стратегий лечения при ГБМ. Генетически модифицированные мышиные модели для GBM имеют преимущество возникновения опухоли в автохтонном участке, но часто с длительной латентностью и непредсказуемым ростом опухоли13. Опухоли модели GEM демонстрируют латентность 4-5 месяцев, а идеальное временное окно для визуализации, набора и лечения варьируется среди отдельных мышей. Ортотопическая модель имеет хорошо зарекомендовавший.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Благодарности
Мы благодарны г-ну Алану Э. Кулаге за прекрасную техническую помощь и г-же Мишель Л. Гумпрехт за совершенствование хирургических методов. Мы благодарим доктора Филипа Л. Мартина за анализ патологии, а также г-жу Лилию Илеву и доктора Джозефа Калена из Программы визуализации мелких животных Национальной лаборатории Фредерика за МРТ-сканирование.
Этот проект был полностью или частично профинансирован за счет федеральных средств Национального института рака, Национальных институтов здравоохранения по контракту No HHSN261201500003I. Содержание этой публикации не обязательно отражает взгляды или политику Министерства здравоохранения и социальных....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 5% метилцеллюлозы в 1X PBS, автоклавный | Millipore Sigma | M7027 | |
| 1мл Туберкулиновый шприц, скользящий наконечник | BD | 309659 | |
| 6 дюймов Аппликаторы с хлопковыми наконечниками | Puritan | S-18991 | |
| Регулируемая сценическая платформа | David Kopf Instruments | Model 901 | |
| Аэрозольный барьер Наконечники | Fisher Scientific | 02-707-33 | |
| Спиртовые салфетки стерильные, большие - 2,5 x 3 дюйма | PDI | C69900 | |
| B6D2 мышиный штамм (C57Bl/6J x DBA/2J) | Jackson Laboratory | Jax #10006 | |
| Костный воск | Хирургические специальности | 901 | |
| бупивакаин 0,25% | Henry Schein | 6023287 | |
| бупренорфинSR | ZooPharm | н/д | |
| Прозрачная виниловая трубка 1/8ID x 3/16OD | UDP | T10004001 | |
| CVS Смазка для глаз Мазь | CVS Pharmacy | 247881 | |
| одноразовые скальпели, лезвие #10 | Скальпель Miltex | 16-63810 | |
| Аппарат для газовой анестезии с кислородным подключением и боксом для анестезии | Somni Scientific | n/a | Исследователь может использовать оборудование<бр/> стандартное оборудование |
| Газ платформа для анестезии для мышей | David Kopf Instruments | Model 923-B | |
| GraphPad Prism | Graphpad Prism | 9 версия 9.4.1 | |
| Hamilton 30 g игла, ½ ", маленькая ступица, точка pst 3 | Hamilton | Special Order | |
| Hamilton прецизионный микролитровый шприц, 1701 RN, без иглы 10 &микро; L | Hamilton | 7653-01 | |
| Стерилизатор горячих шариков с шариками | Fine Science Tools | 18000-45 | |
| Invitrogen Countess 3 Автоматизированный счетчик клеток | Fisher Scientific | AMQAX2000 | |
| IsoFlurane | Piramal Critical Care | 29404 | |
| Прокладки для подготовки изопропилового спирта | PDI | C69900 | |
| ITK_SNAP (версия 36.X, 2011- Penn | Image Computing and Science Laboratory (PICSL) в Университете Пенсильвании и Научном институте вычислительной техники и визуализации (SCI) в Университете штата Юта | ||
| KOPF Стереотаксический инструмент для мелких животных с цифровой консолей-считывателем | David Kopf Instruments | Model 940 | |
| Masterflex Fitting, PVDF, прямой, шланговый редуктор, внутренний диаметр 1/4 дюйма x внутренний диаметр 1/8 дюйма | Masterflex | HV-30616-16 | |
| Нагревательная пластина для мыши | David Kopf Instruments | PH HP-4M | |
| Ректальный зонд для мыши | David Kopf Instruments | PH RET-3-ISO | |
| Nalgene Super Versi-Dry Протекторы | поверхности ThermoFisher Scientific | 74000-00 | |
| P20 пипетка | Gilson | F123600 | |
| Повидон йод хирургический скраб | Dynarex | 1415 | |
| Reflex 9 мм Аппликатор для раны | Fine Science Tools | 12031-09 | |
| Reflex 9 мм Clip Remover | для тонкой науки | 12033-00 | |
| Reflex 9 мм Зажимы для раны | Fine Science Tools | 12032-09 | |
| Щипцы Semken, изогнутые | Fine Science Tools | 11009-13 | |
| Регулятор температуры | David Kopf Instruments | PH TCAT-2LV | |
| Трипсин-ЭДТА (0,25%) | ThermoFisher Scientific | 25200056 | |
| Туберкулиновый шприц с иглой 25 г, скользящим наконечником | BD | 309626 | |
| UltraMicroPump 3 с контроллером Micro2T | Precision Instruments | модель UMP3T |
Ссылки
- Tamimi, A. F., Juweid, M. Epidemiology and Outcome of Glioblastoma. Glioblastoma. , (2017).
- Robertson, F. L., Marques-Torrejon, M. A., Morrison, G. M., Pollard, S. M. Experimental models and tools to tackle glioblastoma. Disease Models & Mechanisms. 12 (9), (2019).
- Wen, P. Y., Kesari, S.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
