Здесь мы представляем протокол внутрисердечной инъекции клеток рака предстательной железы человека для создания мышиной модели с поражениями метастазов в кости.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
* These authors contributed equally
Здесь мы представляем протокол внутрисердечной инъекции клеток рака предстательной железы человека для создания мышиной модели с поражениями метастазов в кости.
Как наиболее распространенное мужское злокачественное новообразование, рак предстательной железы (РПЖ) занимает второе место по смертности, в первую очередь из-за частоты метастазирования в кости 65-75%. Поэтому важно понимать процесс и связанные с ним механизмы метастазирования рака предстательной железы в кости для разработки новых терапевтических средств. Для этого животная модель метастазирования в кости является важным инструментом. Здесь мы сообщаем о подробных процедурах создания модели мышей с метастазами в кости с помощью внутрисердечной инъекции клеток рака предстательной железы. Система биолюминесцентной визуализации может определить, были ли клетки рака предстательной железы точно введены в сердце, и контролировать метастазирование раковых клеток, поскольку она имеет большие преимущества в мониторинге развития метастатического поражения. Эта модель воспроизводит естественное развитие диссеминированных раковых клеток с образованием микрометастазов в кости и имитирует патологический процесс метастазирования рака предстательной железы в кости. Он предоставляет эффективный инструмент для дальнейшего изучения молекулярных механизмов и терапевтических эффектов этого заболевания in vivo .
Рак предстательной железы является наиболее частым онкологическим заболеванием у мужчин в 112 странах и занимает второе место по смертности в странах с более высоким индексом человеческого развития 1,2. Большинство смертей у пациентов с раком предстательной железы вызваны метастазированием, и примерно в 65-75% случаев развиваются метастазы в кости 3,4. Поэтому профилактика и лечение метастазов рака предстательной железы в кости крайне необходимы для улучшения клинического исхода пациентов с раком предстательной железы. Животная модель метастазирования ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Шести-восьминедельные самцы атимических мышей BALB/c (n = 10) были размещены в индивидуально вентилируемых клетках для мышей (5 мышей/клетка) в помещении для животных без специфических патогенов (SPF) в условиях 12-часового цикла свет/темнота, со свободным доступом к корму SPF и стерильной воде. Мышей адаптивно кормили в течение недели перед экспериментами. Все эксперименты на животных были одобрены комитетом по благополучию животных Шанхайского университета традиционной китайской медицины.
1. Подготовка клеток
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Биолюминесцентная визуализация дает огромные преимущества в мониторинге развития метастатического поражения для внутрисердечной инъекционной модели. Вскоре после инъекции раковых клеток (в течение 24 часов) биолюминесцентная визуализация использовалась для визуализации раковых клеток, поступающих в общий кровоток (рис. 3А). Очевидная биолюминесцентная сигнализация по всему телу будет видна, когда раковые клетки будут введены в артериальное кровообращение должным образом. Данные мышей, демонс.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Внутрисердечная инъекция клеток рака предстательной железы человека для получения метастазов в кости является идеальной моделью мыши для изучения функций и механизмов метастазирования рака предстательной железы в кости и оценки терапевтической эффективности. Исследования показали, что повреждение костей, скорее всего, происходит в проксимальном отделе большеберцовой кости идистальном отделе бедренной кости 17, что может быть связано с их высокой васкуляризацией и метаболической активностью.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Все авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.
Эта работа поддерживается грантами Национальной программы ключевых исследований и разработок Китая (2018YFC1704300 и 2020YFE0201600), Национального фонда естественных наук (81973877 и 82174408), исследовательских проектов в рамках бюджета Шанхайского университета традиционной китайской медицины (2021LK047) и Шанхайского совместного инновационного центра промышленной трансформации подготовки больниц к ТКМ.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 1 мл шприцев и игл | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd | 20200411 | Клетки вводились в желудочки мышей |
| Наркозный аппарат | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | R500IP | Оборудование для анестезии мышей |
| Автоматический счетчик клеток | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Для подсчета клеток |
| BALB/c атимических мышей | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Самец | 6-8 недель, самец мышей |
| Биолюминесцентная система визуализации | Shanghai Baitai Technology Co., Ltd | Vieworks | Для отслеживания роста опухоли и метастазирования в легкие, если введенные клетки помечены люциферазой |
| Центрифуга в пробирке (15 мл, 50 мл) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | |
| EDTA solution | Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd | G1105 | Для декальцинации костной оболочки |
| среды F-12 | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 21700075, GIBCO | Среда для культивирования клеток |
| Раствор формалина | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | BL539A | Для фиксации образца каждой мыши |
| Isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Для анестезии |
| Липофектамин 2000 | Шанхай YueNian Biotechnology Co., Ltd | 11668027, Thermo fisher | Плазмидный реагент для трансфекции |
| PC-3 клеточная линия | Банк клеток Китайской академии наук | TCHu 158 | Клеточная линия рака предстательной железы |
| Фосфатно-солевой буфер | Beyotime Biotechnology | ST447 | Промыть клетки остеосаркомы человека |
| Трипсин (0,25%) | Шанхай YueNian Biotechnology Co. , Ltd | 25200056, Gibco | Для отделения клеток |
| Вектор (pLV-люцифераза) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | VL3613 | Плазмида для трансфекционной |
| рентгеновской визуализации Brook | (Beijing) Technology Co., Ltd | FX PRO | Для получения рентгеновских изображений для обнаружения роста опухоли |
| μ CT80 | Shenzhen Fraun Technology Service Co., Ltd | Scanco Medical AG, Швейцария | Для обнаружения разрушения костей. MICO-CT оснащен 3DCalc, реконструкцией конуса, и μ Программное обеспечение для визуализации моделей CT Ray V3.4A. |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.