Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Внутрисердечная инъекция клеток рака предстательной железы человека для создания мышиной модели ксенотрансплантата с метастазами в кости

6.8K просмотров

DOI:

10.3791/64589

4 ноября 2022 г.

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол внутрисердечной инъекции клеток рака предстательной железы человека для создания мышиной модели с поражениями метастазов в кости.

Аннотация

Как наиболее распространенное мужское злокачественное новообразование, рак предстательной железы (РПЖ) занимает второе место по смертности, в первую очередь из-за частоты метастазирования в кости 65-75%. Поэтому важно понимать процесс и связанные с ним механизмы метастазирования рака предстательной железы в кости для разработки новых терапевтических средств. Для этого животная модель метастазирования в кости является важным инструментом. Здесь мы сообщаем о подробных процедурах создания модели мышей с метастазами в кости с помощью внутрисердечной инъекции клеток рака предстательной железы. Система биолюминесцентной визуализации может определить, были ли клетки рака предстательной железы точно введены в сердце, и контролировать метастазирование раковых клеток, поскольку она имеет большие преимущества в мониторинге развития метастатического поражения. Эта модель воспроизводит естественное развитие диссеминированных раковых клеток с образованием микрометастазов в кости и имитирует патологический процесс метастазирования рака предстательной железы в кости. Он предоставляет эффективный инструмент для дальнейшего изучения молекулярных механизмов и терапевтических эффектов этого заболевания in vivo .

Введение

Рак предстательной железы является наиболее частым онкологическим заболеванием у мужчин в 112 странах и занимает второе место по смертности в странах с более высоким индексом человеческого развития 1,2. Большинство смертей у пациентов с раком предстательной железы вызваны метастазированием, и примерно в 65-75% случаев развиваются метастазы в кости 3,4. Поэтому профилактика и лечение метастазов рака предстательной железы в кости крайне необходимы для улучшения клинического исхода пациентов с раком предстательной железы. Животная модель метастазирования ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Шести-восьминедельные самцы атимических мышей BALB/c (n = 10) были размещены в индивидуально вентилируемых клетках для мышей (5 мышей/клетка) в помещении для животных без специфических патогенов (SPF) в условиях 12-часового цикла свет/темнота, со свободным доступом к корму SPF и стерильной воде. Мышей адаптивно кормили в течение недели перед экспериментами. Все эксперименты на животных были одобрены комитетом по благополучию животных Шанхайского университета традиционной китайской медицины.

1. Подготовка клеток

  1. В день инъекции клеток рака предстательной железы дважды вымойте 80%-90% сливающиеся клетки PC-3, меченн....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Биолюминесцентная визуализация дает огромные преимущества в мониторинге развития метастатического поражения для внутрисердечной инъекционной модели. Вскоре после инъекции раковых клеток (в течение 24 часов) биолюминесцентная визуализация использовалась для визуализации раковых клеток, поступающих в общий кровоток (рис. 3А). Очевидная биолюминесцентная сигнализация по всему телу будет видна, когда раковые клетки будут введены в артериальное кровообращение должным образом. Данные мышей, демонс.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Внутрисердечная инъекция клеток рака предстательной железы человека для получения метастазов в кости является идеальной моделью мыши для изучения функций и механизмов метастазирования рака предстательной железы в кости и оценки терапевтической эффективности. Исследования показали, что повреждение костей, скорее всего, происходит в проксимальном отделе большеберцовой кости идистальном отделе бедренной кости 17, что может быть связано с их высокой васкуляризацией и метаболической активностью.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Все авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Эта работа поддерживается грантами Национальной программы ключевых исследований и разработок Китая (2018YFC1704300 и 2020YFE0201600), Национального фонда естественных наук (81973877 и 82174408), исследовательских проектов в рамках бюджета Шанхайского университета традиционной китайской медицины (2021LK047) и Шанхайского совместного инновационного центра промышленной трансформации подготовки больниц к ТКМ.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1 мл шприцев и иглShandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd20200411Клетки вводились в желудочки мышей
Наркозный аппаратShenzhen RWD Life Technology Co., LtdR500IPОборудование для анестезии мышей
Автоматический счетчик клетокShanghai Simo Biological Technology Co., LtdIC1000  Для подсчета клеток
BALB/c атимических мышейShanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.Самец6-8 недель, самец мышей
Биолюминесцентная система визуализацииShanghai Baitai Technology Co., LtdVieworksДля отслеживания роста опухоли и метастазирования в легкие, если введенные клетки помечены люциферазой
Центрифуга в пробирке (15 мл, 50 мл)Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd  430790, Corning
EDTA solutionWuhan Xavier Biotechnology Co., LtdG1105  Для декальцинации костной оболочки
среды F-12Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd21700075, GIBCOСреда для культивирования клеток
Раствор формалинаShanghai YueNian Biotechnology Co., LtdBL539AДля фиксации образца каждой мыши
IsofluraneShenzhen RWD Life Technology Co., LtdVETEASYДля анестезии 
Липофектамин 2000Шанхай YueNian Biotechnology Co., Ltd11668027, Thermo fisherПлазмидный реагент для трансфекции
PC-3 клеточная линияБанк клеток Китайской академии наукTCHu 158Клеточная линия рака предстательной железы
Фосфатно-солевой буферBeyotime BiotechnologyST447Промыть клетки остеосаркомы человека
Трипсин (0,25%)Шанхай YueNian Biotechnology Co. , Ltd25200056, GibcoДля отделения клеток
Вектор (pLV-люцифераза)Shanghai YueNian Biotechnology Co., LtdVL3613Плазмида для трансфекционной
рентгеновской визуализации Brook(Beijing) Technology Co., LtdFX PROДля получения рентгеновских изображений для обнаружения роста опухоли
μ CT80Shenzhen Fraun Technology Service Co., LtdScanco Medical AG, ШвейцарияДля обнаружения разрушения костей. MICO-CT оснащен 3DCalc, реконструкцией конуса,   и μ Программное обеспечение для визуализации моделей CT Ray V3.4A.

Ссылки

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Fuchs, H. E., Jemal, A. Cancer Cancerstatistics, 2021. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (1), 7-33 (2021).
  2. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimat....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

клетки PC3биолюминесцентная визуализацияметастатические очагирентгенографиямикрокомпьютерная томографияокрашивание гематоксилином и эозином