Было установлено несколько типов животных моделей тиреоидита Хашимото, а также спонтанного аутоиммунного тиреоидита у мышей NOD. Мыши H-2h4 являются простой и надежной моделью для индукции HT. В этой статье описан этот подход и оценен патологический процесс для лучшего понимания мышиной модели SAT.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Генерация модели спонтанного аутоиммунного тиреоидита мыши
В этой статье
Уведомление об исправлении
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Краткое содержание
Аннотация
В последние годы тиреоидит Хашимото (ГТ) стал наиболее распространенным аутоиммунным заболеванием щитовидной железы. Характеризуется инфильтрацией лимфоцитов и выявлением специфических сывороточных аутоантител. Хотя потенциальный механизм до сих пор не ясен, риск тиреоидита Хашимото связан с генетическими факторами и факторами окружающей среды. В настоящее время существует несколько типов моделей аутоиммунного тиреоидита, включая экспериментальный аутоиммунный тиреоидит (EAT) и спонтанный аутоиммунный тиреоидит (SAT).
EAT у мышей является распространенной моделью ГТ, которая иммунизируется липополисахаридом (ЛПС) в сочетании с тиреоглобулином (Tg) или дополняется полным адъювантом Фройнда (CFA). Модель мыши EAT широко распространена на многих типах мышей. Однако прогрессирование заболевания, скорее всего, связано с ответом антител Tg, который может варьироваться в разных экспериментах.
SAT также широко используется при изучении ГТ в НОД. Мышь H-2h4. НОД. Мышь H2h4 - это новый штамм, полученный в результате скрещивания мыши с диабетом без ожирения (NOD) с B10. A (4R), который значительно индуцируется для ГТ с питанием йодом или без него. Во время индукции НОД. Мышь H-2h4 имеет высокий уровень TgAb, сопровождающийся инфильтрацией лимфоцитов в фолликулярной ткани щитовидной железы. Однако для этого типа мышиной модели существует мало исследований, позволяющих всесторонне оценить патологический процесс при индукции йода.
В этом исследовании установлена модель мыши SAT для исследования ГТ, и патологический процесс изменения оценивается после длительного периода индукции йода. С помощью этой модели исследователи могут лучше понять патологическое развитие ГТ и выявить новые методы лечения ГТ.
Введение
Тиреоидит Хашимото (ГТ), также известный как хронический лимфоцитарный тиреоидит или аутоиммунный тиреоидит, был впервые зарегистрирован в 1912 году1. ГТ характеризуется инфильтрацией лимфоцитов и повреждением фолликулярной ткани щитовидной железы. Лабораторные тесты в основном проявляются в повышении специфических антител к щитовидной железе, включая антитела к тиреоглобулину (TgAb) и антитела к тиреоидной пероксидазе (TPOAb)2. Заболеваемость ГТ находится в диапазоне 0,4-1,5%, что составляет 20-25% всех заболеваний щитовидной железы, и это значение увеличилось в последние годы3. Кроме того, в бол....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Протокол, описанный ниже, был одобрен руководящими принципами по уходу и использованию, установленными Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию Сычуаньского университета.
1. Подготовка
- Размещайте всех мышей в определенных условиях, свободных от патогенов, в течение 12-часовых циклов свет-темнота (начиная с 07:00 и 19:00 соответственно). Поддерживайте температуру в помещении на уровне 22 °C. Меняйте постельные принадлежности каждую неделю. Обеспечьте достаточное количество стандартного корма для грызунов и воды.
- При приготовлении исходного раствора NaI в воде взвесьте 2,5 г со....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Гистологические изменения разительно различались у женщин и мужчин, продолжительности приема йода и раствора NaI. Как показано на рисунке 1, ~ 10% NOD. У мышей H-2h4 развился SAT даже без индукции йода в возрасте 24 недель, и у всех мышей в конечном итоге развился тиреоидит. При регулярном приеме воды не было существенной разницы в гистологических изменениях между самцами и самками. Добавление NaI в питьевую воду ускоряло развитие тиреоидита. В растворах 0,005%, 0,05% и 0,5% SAT достигал мак.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
ГТ возникает из-за расстройства аутоиммунной системы, вызванного лимфоцитами, проникающими в щитовидную железу, что еще больше ухудшает функцию щитовидной железы, вырабатывая при этом специфические для щитовидной железы антитела. Уровни ТТГ, TgAb и TPOAb в сыворотке крови у пациентов с ГТ значительно повышены27. В настоящее время для изучения этиологии аутоиммунного тиреоидита широко используются два основных вида мышиных моделей: EAT и SAT29. Мышей EAT в основном иммунизир.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Все авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.
Благодарности
Мышиные моноклональные антитела к человеческому ТПО (используемые в качестве положительного контроля) были предоставлены доктором. Карайоном и доктором Ж. Руфом (Марсель, Франция). Авторы благодарят всех участников этого исследования и членов нашей исследовательской группы. Эта работа была частично поддержана грантами Фонда постдокторантуры Западно-Китайской больницы, Сычуаньский университет, Китай (2020HXBH057) и Программы научно-технической поддержки провинции Сычуань (проект No 2021YFS0166)
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Буторфанол тартрат | Supelco | L-044 | |
| Дексмедетомидина гидрохлорид | Sigma-Aldrich | 145108-58-3 | |
| Иммуноферментный анализ (ИФА) скважина | Sigma-Aldrich | M9410-1CS | |
| Этанол | маклин | 64-17-5 | |
| Фройнд s Адъювантный, Комплектный | Сигма-Олдрич | F5881 | |
| Фройнд Адъювантный, Неполный | Sigma-Aldrich | F5506 | |
| Козий антимышиный IgG | invitrogen | SA5-10275 | |
| Раствор мидазолама | Supelco | M-908 | |
| Тироксин мыши/крысы (Т4) ИФА | Calbiotech | DKO045 | |
| Параформальдегид | маклин | 30525-89-4 | |
| Йодид пропидия | Sigma-Aldrich | P4864 | |
| Йод натрия | Sigma-Aldrich | 7681-82-5 | |
| Тиреоглобулин | Сигма-Олдрич | T1126 | |
| Тиреоглобулин Набор ИФА | Thermo Scientific | EHTGX5 | |
| ТТШ ИФА | Calbiotech | DKO200 | |
| Ксилол | маклин | 1330-20-7 |
Ссылки
- Ralli, M., et al. Hashimoto's thyroiditis: An update on pathogenic mechanisms, diagnostic protocols, therapeutic strategies, and potential malignant transformation. Autoimmunity Reviews. 19 (10), 102649(2020).
- Zhang, Q. Y., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Исправление
Formal Correction: Erratum: Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model
Posted by JoVE Editors on 6/05/2023. Citeable Link.
An erratum was issued for: Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model. The Protocol section was updated.
Step 3.1.1 of the Protocol was updated from:
After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 µg/100 µL for sedation), medetomidine (7.5 µg/100 µL for sedation), and butorphanol tartrate (50 µg/100 µL for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS).
to
After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 µg/100 µL for sedation), medetomidine (7.5 µg/100 µL for sedation), and butorphanol tartrate (50 µg/100 µL for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS).
NOTE: The specific concentrations of each component in the anesthesia mixture are: midazolam 13.33µg/100µL, medetomidine 2.5µg/100µL, and butorphanol 16.7µg/100µL. For specific dosages used in mice, the doses are: midazolam 4µg/g, medetomidine 0.75µg/g, and butorphanol 1.67µg/g. Anesthesia depth was confirmed when the mouse's limb muscles relaxed, the whiskers had no touch response, and there was loss of pedal reflex.
Step 3.1.2 of the Protocol was updated from:
After the mice are anesthetized, cut off their whiskers with ophthalmic scissors to prevent blood from flowing down the whiskers and causing hemolysis. Fix the mouse with one hand and press the skin of the eye to make the eyeball protrude. Quickly remove the eyeball and draw 1 mL of blood into the microcentrifuge tube via a capillary tube.
to
After the mice are anesthetized, prepare the peripheral blood samples, by fixing the mouse with one hand and pressing the eye skin to protrude the eyeball. Then, insert the capillary tube into the inner corner of the eye and penetrate at a 30-45 degree angle to the plane of the nostril. Apply pressure while gently rotating the capillary tube. Blood will flow into the tube via capillary action.
Step 3.2.1 of the Protocol was updated from:
Dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.
to
Humanely euthanize the animal according to the institutional policies. Then, dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.
