Этот протокол описывает ортотопическую имплантацию раковых клеток пациента в стенку слепой кишки мышей с иммунодефицитом. Модель повторяет прогрессирующее метастатическое заболевание колоректального рака и позволяет оценивать новые терапевтические препараты в клинически значимом сценарии метастазов в легких и печени.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Ортотопическая имплантация раковых клеток, полученных от пациентов, у мышей повторяет прогрессирующий колоректальный рак
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
За последнее десятилетие были созданы более сложные доклинические модели колоректального рака (КРР) с использованием раковых клеток, полученных от пациентов, и 3D-опухолей. Поскольку органоиды опухоли, полученные от пациента, могут сохранять характеристики исходной опухоли, эти надежные доклинические модели позволяют проводить скрининг лекарств от рака и изучать механизмы лекарственной устойчивости. Тем не менее, смерть, связанная с КРР, у пациентов в основном связана с наличием метастатического заболевания. Поэтому важно оценить эффективность противораковой терапии в соответствующих моделях in vivo , которые действительно повторяют ключевые молекулярные особенности метастазирования рака у человека. Мы создали ортотопическую модель, основанную на инъекции раковых клеток, полученных от пациентов с КРР, непосредственно в стенку слепой кишки мышей. Эти опухолевые клетки развивают первичные опухоли в слепой кишке, которые метастазируют в печень и легкие, что часто наблюдается у пациентов с прогрессирующим КРР. Эта мышиная модель КРР может быть использована для оценки реакции на лекарственные препараты, контролируемые с помощью микрокомпьютерной томографии (мкКТ), клинически значимого метода мелкомасштабной визуализации, который может легко идентифицировать первичные опухоли или метастазы у пациентов. В этой статье мы опишем хирургическую процедуру и необходимую методологию для имплантации раковых клеток, полученных от пациентов, в стенку слепой кишки мышей с иммунодефицитом.
Введение
Колоректальный рак (КРР) является второй по значимости причиной смерти отрака во всем мире1. Способность генерировать модели опухолей in vitro или in vivo, полученные из отдельных опухолевых клеток пациента, позволила продвинуть прецизионную медицину в онкологии. За последнее десятилетие органоиды, полученные от пациентов (PDO) или ксенотрансплантаты (PDX), использовались многими исследовательскими группами по всему миру2. ЗОП представляют собой многоклеточные структуры in vitro, которые напоминают особенности исходной опухолевой ткани и могут самоорганизовываться и самооб....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
От всех пациентов было получено письменное информированное согласие. Проект был одобрен Комитетом по этике исследований Университетской больницы Валь д'Эброн, Барселона, Испания (идентификатор одобрения: PR(IR)79/2009 PR(AG)114/2014, PR(AG)18/2018). Образцы тканей толстой кишки человека состояли из биоптатов из некротических участков первичных аденокарцином или метастазов в печени, соответствующих пациентам с раком толстой и прямой кишки, перенесшим резекцию опухоли. Эксперименты проводились в соответствии с директивой Европейского Союза по уходу за животными (86/609/EEC) и были одобрены Этическим комитетом по экспериментам на животных VHIR - Научно-исследовательского....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Мышей, которым ортотопически имплантировали раковые клетки пациента, еженедельно проводили мониторинг с помощью μКТ-сканирования. По окончании эксперимента животных усыпили. Кишечник, слепую кишку (рис. 1А, Б), печень, легкие и любые другие возможные поражения собирали, помещали в кассету и фиксировали 4% формалином на ночь. В качестве контроля использовали ткань кишечника мыши без опухоли в слепой кишке (рис. 1С). Наконец, кассеты меняли на 70%.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
За последние несколько десятилетий было разработано и опробовано множество новых противоопухолевых методов лечения у пациентов с различными типами опухолей, включая колоректальный рак (КРР). Несмотря на то, что во многих случаях наблюдались многообещающие результаты на доклинических моделях, терапевтическая эффективность у пациентов с распространенным метастатическим КРР часто была ограничена. Поэтому существует острая необходимость в доклинических моделях, позволяющих тестировать эффективность новых терапевтических преп.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Выражаем признательность за поддержку Фонду Cellex, сети CIBERONC и Instituto de Salud Carlos III. Кроме того, мы также благодарим платформу доклинической визуализации в Научно-исследовательском институте Валь д'Эброн (VHIR), где проводились эксперименты.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| <сильно>РЕАГЕНТ | |||
| Апотрансферрин | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | T1147-500MG | |
| B27 Supplement | Life Technologies S.A (Испания) | 17504044 | |
| Водный раствор хлоргексидина 2% | DH МАТЕРИАЛ MÉ DICO, S.L. | ||
| коллагеназа | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | C0130-500MG | |
| D-(+)-глюкоза | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | G6152 | |
| DMEM /F12 | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | 21331-020 | |
| ДНКаза И | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | D4263-5VL | |
| EGF | PEPRO TECH EC LTD. | АФ-100-15-500 и микро; g | |
| FGF basic | PEPRO TECH EC LTD. | 100-18B | |
| Fungizone | Life Technologies S.A (Испания) | 15290026 | |
| Gentamycin | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| Гепариновая натриевая соль | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | H4784-250MG | |
| Инсулин | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | I9278-5ML | |
| Иопамиро | |||
| изофлуран | - | -Канамицин | |
| LIFE TECHNOLOGIES S.A. | |||
| L-глютамин | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| Matrigel Matrix | CULTEK, S.L.U. | 356235/356234/354234 | |
| Metacam, 5 мг/мл | - | - | |
| Заменимые аминокислоты | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| Нистатин | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | N4014-50MG | |
| Pen/Strep | Life Technologies S.A (Испания) | 15140122 | |
| Фосфатно-солевой буфер (PBS), стерильный | Labclinics S.A | L0615-500 | |
| Прогестерон | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | P0130-25G | |
| Путресцин | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | P5780-5G | |
| RBC Буфер для лизиса | Labclinics S.A | 00-4333-57 | |
| Пируват натрия | LIFE TECHNOLOGIES S.A. | ||
| Селенит натрия | MERCK LIFE SCIENCE S.L.U. | S5261-25G | |
| ESSENTIAL SUPPLIES | |||
| 8 недель. CB17-Prkdcscid/NcrCrl мыши | |||
| BD Micro-Fine 0,5 мл U 100 игла 0,33 мм (29G) x 12,7 мм | BECTON DICKINSON, S.A.U. | ||
| Лезвие #24 | - | ||
| Сетчатый фильтр 100 & микро; m | Cultek, SLU | 45352360 | |
| Щипцы и хирургические ножницы | - | - | |
| Грелка | - | ||
| -Lacryvisc, 3 мг/г, офтальмологический гель | - | ||
| -Surfasafe | - | - | |
| Шовный материал PROLENE 5-0 | ДЖОНСОН & ДЖОНСОН С., А. | 8720H | |
| ОБОРУДОВАНИЕ/ПРОГРАММНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ | |||
| Quantum FX и микро; Компьютерная томография | Perkin Elmer | Perkin Elmer | http://www.perkinelmer.com/es/product/quantum-gx-instrument-120-240-cls140083 |
Ссылки
- Sung, H., et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA: a Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).
- Puig, I., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
