Method Article

Анализ сырых и обработанных образцов корневища ципери методом жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии у крыс с первичной дисменореей

DOI:

10.3791/64691

⸱

December 23rd, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Chongqing Engineering Research Center of Pharmaceutical Evaluation of Chinese Medicine, Chongqing Academy of Chinese Materia Medica

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь представлен сравнительный анализ сырых и обработанных образцов корневища Cyperi (CR) с использованием сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии высокого разрешения (UPLC-MS/MS) у крыс с первичной дисменореей. Изменения уровня метаболитов в крови и компонентов образца были исследованы между крысами, получавшими CR, и CR, обработанным уксусом (CRV).

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Корневище ципери (КР) широко используется в гинекологии и является общим лекарством для лечения женских заболеваний в Китае. Поскольку обезболивающий эффект CR усиливается после обработки уксусом, CR, обработанный уксусом (CRV), обычно используется клинически. Однако механизм, с помощью которого обезболивающий эффект усиливается при обработке уксусом, неясен. В этом исследовании метод жидкостной хроматографии сверхвысокого давления тандемной масс-спектрометрии (UPLC-MS / MS) использовался для изучения изменений в уровнях экзогенных компонентов и метаболитов в крови между крысами, получавшими CR, и крысами, получавшими CRV, с дисменореей. Результаты показали различные уровни 15 компонентов и двух метаболитов в крови этих крыс. Среди них уровни (-)-миртенола и [(1R,2S,3R,4R)-3-гидрокси-1,4,7,7-тетраметилбицикло[2.2.1]гепт-2-ил]уксусной кислоты в группе CRV были значительно выше, чем в группе CR. CRV снижал уровень простаноидов 2-й серии и лейкотриенов 4-й серии с провоспалительной, агрегационной и вазоконстрикционной активностью и обеспечивал анальгезирующий эффект за счет модуляции метаболизма арахидоновой кислоты и линолевой кислоты и биосинтеза ненасыщенных жирных кислот. Это исследование показало, что обработка уксусом усиливает обезболивающий эффект CR и способствует нашему пониманию механизма действия CRV.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Первичная дисменорея (БП) является наиболее распространенным заболеванием в клинической гинекологии. Он характеризуется болью в спине, отеком, болью в животе или дискомфортом до или во время менструации без патологии органов малого таза в репродуктивной системе1. Отчет о его распространенности показал, что 85,7% студентов страдают от БП2. Низкие дозы оральных контрацептивов являются стандартной терапией, но их неблагоприятные побочные эффекты, такие как тромбоз глубоких вен, привлекают все большее внимание3. Распространенность тромбоза глубоких вен среди пользователей оральных контрацептивов составляет >1 на 1000 женщин, и риск наиболее высок в течение первых 6-12 месяцев и у пользователей старше 40 лет4.

Давно используемая в традиционной китайской медицине (ТКМ), корневище ципери (CR) получают из высушенного корневища Cyperus rotundus L. семейства Cyperaceae. CR регулирует нарушения менструального цикла и снимает депрессию и боль5. КР широко применяется в гинекологии и считается общим лекарством для лечения женскихболезней6. CR, обработанный уксусом (CRV), обычно используется клинически. По сравнению с CR, CRV показывает усиленную регуляцию менструации и облегчение боли. Современные исследования показали, что CR ингибирует циклооксигеназу-2 (ЦОГ-2) и последующий синтез простагландинов (ПГ), достигая таким образом противовоспалительного эффекта. Между тем, CR проявляет обезболивающий эффект без побочных эффектов7, что делает CR хорошим выбором для пациентов с дисменореей. Однако механизм, лежащий в основе регуляции менструации и обезболивания с помощью CRV, неясен. Исследования CR в основном были сосредоточены на изменениях в его активных химических компонентах и фармакологической активности, таких как его противовоспалительное, антидепрессивное и обезболивающее действие 8,9,10,11,12.

Хотя ингредиенты ТКМ сложны, они всасываются в кровь и должны достигать определенной концентрации в крови, чтобы быть эффективными13. Область скрининга активных ингредиентов ТКМ может быть сужена за счет использования стратегии определения компонентов в крови. Слепоты можно избежать при изучении химических компонентов in vitro, а односторонности можно избежать при изучении отдельных компонентов14. Сравнивая составы CR и CRV в крови, можно эффективно и быстро обнаружить изменения в активных ингредиентах обработанного CR. Эффективность лекарства - это процесс, посредством которого лекарство влияет на организм. Изменения компонентов препарата, обусловленные метаболическим ответом организма, которые могут быть связаны с механизмом действия препарата, могут быть определены с помощью метабономики. Метабономика направлена на измерение общих и динамических метаболических реакций, что согласуется с определением общей эффективности традиционной китайской медицины15. Кроме того, метаболиты являются конечным продуктом экспрессии генов, которая наиболее тесно связана с фенотипами16. Таким образом, метабономика может быть пригодна для изучения различий в метаболических путях между CR и CRV при лечении БП. Нецелевая метаболомика на основе жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии высокого разрешения (ЖХ-МС/МС) характеризуется высокой пропускной способностью, высокой чувствительностью и высоким разрешением и может использоваться для измерения множества различных низкомолекулярных компонентов17,18 . Этот метод позволяет одновременно определять эндогенные метаболиты и экзогенные составляющие, всасываемые в кровь. Метабономика широко используется в исследованиях ТКМ19, токсикологиилекарств 20, управления здоровьем21, спорта22, продуктов питания23 и других областях.

В этом исследовании различия в экзогенных компонентах, всасываемых в кровь, и эндогенных метаболитов были измерены между крысами-дисменореей, обработанными CR, и крысами, обработанными CRV, с использованием нецелевой метаболомики на основе LC-MS / MS, чтобы выявить механизмы анальгетических эффектов CRV.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты, связанные с животными, проводились с одобрения Комитета по этике экспериментов Чунцинского института ТКМ. В этом эксперименте использовались двадцать четыре самки крыс Sprague Dawley (SD) в возрасте 8-10 недель и весом 200 г ± 20 г.

1. Подготовка экстракции

  1. Вычисление
    1. Запланируйте введение экстракта CR или CRV группе лечения из шести крыс Sprague-Dawley (10 г / [кг ∙ день]) в течение 3 дней. Используйте концентрацию экстракта CR или CRV 1 г / мл (1 мл экстракта получают из 1 г трав).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Дозировка CR составляет 6-10 г. В этом исследовании в качестве дозировки использовалась максимальная доза 10 г. Поскольку средний вес взрослого человека составляет 60 кг, доза для взрослого человека составляет 0,1667 г / кг. Согласно алгоритмупреобразования веса 24, поскольку коэффициент преобразования дозы между человеком и крысами составляет 6,3, дозировка для крыс составляет 1,05 г / кг. Дозировка препарата была увеличена в 10 раз до 10,5 г/кг для крыс. Дозировка была установлена равной 10 г/кг для удобства расчета и фактического эксперимента. Например, по расчету, если необходимо в общей сложности 36 г CR или CRV, китайская фитотерапия должна быть приготовлена как минимум дважды. Таким образом, требовалось 200 г CR - 100 г CR использовали в качестве CR, а 100 г CR перерабатывали в CRV.
    2. Рассчитайте объем CR или CRV, который должен быть применен для одной крысы, используя уравнение (1):
      V = 10 г/(кг∙сут) × 200 г/(1 г/мл) = 2 мл (1)
  2. Обработка CRV
    1. Тщательно смешать 100 г CR и 20 г уксуса (>5,5 г уксусной кислоты/100 мл) и выдержать 12 ч.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы убедиться, что внутренняя часть CR была увлажнена уксусом через 12 часов, CR и уксус смешивали, хорошо перемешивали, а затем снова перемешивали до тех пор, пока внутренняя часть не стала влажной.
    2. Обжарьте смесь на железной сковороде в течение 10 минут при температуре 110-120 °C. Затем выньте смесь и дайте ей остыть при комнатной температуре.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы CR не подгорел, необходимо постоянно помешивать во время нагрева. Если обработанный CRV слишком влажный, его можно высушить при 60 °C. Когда поверхность CR станет сепией, жарку можно прекратить.
  3. Извлечение
    1. Экстракт CR
      1. Добавьте 10 раз (количество CR) чистой воды в CR и замочите на 2 часа. Следите за тем, чтобы лекарственные материалы были ниже уровня жидкости при замачивании.
        ПРИМЕЧАНИЕ: CR нужно разрезать только пополам перед экстракцией. Целью замачивания является более эффективное извлечение активных компонентов. Процесс замачивания имеет важное значение.
      2. Доведите смесь воды и лекарства до кипения на сильном огне и держите ее кипящей на слабом огне в течение 20 минут. Отфильтруйте фильтровальной тканью (100 меш) и соберите фильтрат.
        ПРИМЕЧАНИЕ: При отваривании перед кипячением использовался сильный огонь, а для поддержания кипения - слабый огонь.
      3. Повторите шаг 1.3.1.2 один раз и смешайте фильтраты.
      4. Концентратируют экстракт с помощью ротационного испарителя до 1 г/мл (исходя из оригинального препарата, температура концентрации должна быть ниже 60 °C).
        ПРИМЕЧАНИЕ: Активные компоненты CR летучи, поэтому температура концентрации не должна быть выше 60 °C.
    2. Экстракт CRV
      1. Выполните те же действия (1.3.1.1-1.3.1.3), что и для метода извлечения CR.
    3. Экстракт CR для тестирования
      1. Пипетку 500 мкл экстракта CR и 500 мкл метанола в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл и перемешивают в течение 30 с.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Смесь метанола и воды лучше извлекает активные компоненты. Экстракт не следует напрямую фильтровать для тестирования.
      2. Центрифугу каждого образца в течение 15 мин при 1,6502 × г при 4 °C. Отфильтруйте надосадочную жидкость, а затем перенесите ее во флакон с образцом для тестирования.
        ПРИМЕЧАНИЕ: После высокоскоростного центрифугирования смеси метанола и экстракта надосадочную жидкость можно непосредственно перенести в бутылку с образцом для определения без фильтрации. Из-за тепла, выделяемого в процессе центрифугирования, предпочтительно использовать криогенную центрифугу.
    4. Экстракт CRV для тестирования
      1. Выполните шаги 1.3.3.1-1.3.3.2, чтобы подготовить выписку CRV к тестированию.

2. Животные

  1. Вычисление
    1. Возьмите 50 мг бензоата эстрадиола и добавьте его к 50 мл оливкового масла, чтобы приготовить раствор 1 мг / мл. Возьмите 50 мг окситоцина и добавьте его к 50 мл физиологического раствора, чтобы приготовить раствор 1 мг / мл.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Доза внутрибрюшинной инъекции эстрадиола бензоата и окситоцина составляет 10 мг / (кг ∙ день). Эстрадиол бензоат растворяется в оливковом масле, а окситоцин растворяется в обычном физиологическом растворе. Бензоат эстрадиола нелегко растворить в оливковом масле, и его можно лечить ультразвуком для ускорения растворения. Растворы эстрадиола бензоата и окситоцина необходимо готовить ежедневно.
    2. Рассчитайте объем раствора эстрадиола бензоата, который будет применяться на одну крысу (т.е. V = 10 мг / [кг ∙ день] × 200 г / [1 г / мл] = 2 мл). Рассчитайте объем раствора окситоцина, который будет применяться на одну крысу (т.е. V = 10 мг / [кг ∙ день] × 200 г / [1 г / мл] = 2 мл).
  2. Группировка и введение животных
    ПРИМЕЧАНИЕ: Десять дней было отведено на администрирование25,26. Во время лечения крысы имели неограниченный доступ к стандартному корму и воде. В течение 30 минут после введения окситоцина отслеживалась извивающаяся активность каждой крысы. Модель крыс с болезнью Паркинсона была успешно разработана, о чем свидетельствуют скручивающие реакции модельных крыс, которые включали сокращение матки, вращение одной конечности, разгибание задней конечности, полое туловище и сокращение брюшной полости26.
    1. Распределите 24 самки крыс Sprague-Dawley (SD крысы, 8-10-недельный возраст, весом 200 г ± 20 г) на четыре группы случайного контроля, модельные, CR и CRV - и кормите их в течение 7 дней.
    2. Введение животных
      1. Внутрибрюшинно вводят крысам в группах модели, CR и CRV 2 мл раствора эстрадиола бензоата каждый день. Внутрибрюшинно вводят крысам контрольной группы 2 мл физиологического раствора.
      2. Начиная с 8-го дня, выполните шаг 2.2.2.1. Затем внутрижелудочно вводят 2 мл экстракта CRV крысам в группе CRV, 2 мл экстракта CR крысам в группе CR и 2 мл физиологического раствора крысам в контрольной и модельной группах.
      3. На 10-й день выполните шаг 2.2.2.2. Затем внутрибрюшинно вводят крысам в группах модели, CR и CRV 2 мл раствора окситоцина, а крысам в контрольной группе - 2 мл физиологического раствора.
    3. Запишите время извивания крыс в течение 30 минут после инъекции окситоцина.
  3. Сбор образцов
    1. Соберите образцы крови брюшной аорты, быстро и полностью иссеките матку и аккуратно отделите соединительную ткань и жир, прилипший к стенке матки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Кровь собирали в течение 1 часа после приема последней дозы.
    2. Используйте микроцентрифужные пробирки для сохранения и перевода тканей матки на жидкий азот. Храните образцы тканей при температуре −80 °C.
    3. Центрифугируют образцы крови в течение 10 мин при дозе 4 125 × г. Удалить надосадочную жидкость, содержащую сыворотку, и центрифугу при 16 502 × г в течение 10 мин при 4 °C. Центрифугируйте сыворотку, а затем храните ее в пробирке при температуре -80 °C для хранения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Образцы крови необходимо оставить при комнатной температуре на 1 час для повторной обработки.
  4. Обработка образцов
    1. Образцы сыворотки
      1. Поместите 400 мкл метанола и 200 мкл сыворотки в микроцентрифужную пробирку и перемешивайте в течение 30 с. Центрифугу каждого образца в течение 15 мин при 16 502 × г при 4 °C. Наполните бутылки с пробами надосадочной жидкостью после сбора и фильтрации. Смешайте все надосадочные жидкости из каждого образца с одинаковым объемом, чтобы подготовить образцы контроля качества для тестирования.
    2. Образцы тканей матки
      1. Возьмите 100 мг ткани матки из ипсилатерального сегмента и измельчите ее девятикратным объемом физиологического раствора. Центрифугируют гомогенат в течение 10 мин при концентрации 4,125 × г и собирают надосадочную жидкость. Поместите надосадочную жидкость в холодильник при температуре 4°С для проведения испытаний или при температуре -80°С, если она не будет проверена в тот же день.
      2. Поместите нормальный физиологический раствор, ткань и стальные шарики в микроцентрифужную пробирку объемом 2 мл, поместите микроцентрифужную пробирку в жидкий азот на 3-5 с, а затем поместите ткань в измельчитель тканей для измельчения.
  5. Тестирование образцов
    1. Используйте иммуноферментный анализ (ИФА) для измерения содержания PGF2α и PGE2 в тканях матки образцов крыс.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Набор для ИФА PGE 2 крысы использовался для измерения содержания PGE 2, а набор для ИФА PGF 2α крысы использовался для измерения уровня PGF2α. Подробные инструкции можно найти в инструкциях производителя. Подробная информация о комплекте приведена в Таблице материалов.
    2. Оцените образец сыворотки, экстракт CR и экстракт CRV, используя UPLC-MS / MS.
      1. Для ЭЖХ используйте колонку C18 (2,6 мкм, 2,1 мм x 100 мм) и метод бинарного градиента с подвижной фазой A, содержащей 0,1% муравьиной кислоты, и подвижной фазой B, содержащей ацетонитрил. Установите градиент элюирования следующим образом: от 0 мин до 1 мин, 15% B; от 1 мин до 8,5 мин, от 15% до 85% В; от 8,5 мин до 11,5 мин, 85% В; от 11,5 мин до 11,6 мин, от 99% до 1% В; и от 11,6 мин до 15 мин, 15% B. Установите скорость потока 0,35 мл / мин и объем впрыска 2 мкл.
      2. Для MS установите температуру 600 °C, расход завесного газа (CUR) на 0,17 МПа, а расход оболочки и вспомогательного газа на 0,38 МПа. Установите напряжение ионного распыления в режиме положительных ионов и режиме отрицательных ионов на 5,5 кВ и -4,5 кВ соответственно, напряжение потенциала декластеризации (DP) на 80 В или -80 В, энергию столкновения (CE) на 40 эВ или -25 эВ, а суперпозицию энергии столкновения (CES) на 35 эВ ± 15 эВ.
      3. Выполните испытание в соответствии с протоколом производителя с использованием UPLC-MS/MS. Выполните MS для диапазона масс 50-1,000 м/з.
      4. Получение результатов UPLC-MS/MS с помощью программы согласования рабочих станций в сочетании с информационно-зависимым сбором режима обнаружения, фильтром множественных массовых дефектов и динамическим фоновым выводом. Используйте образцы контроля качества объединенной сыворотки для проверки повторяемости и стабильности оборудования UPLC-MS/MS для проверки традиционного подхода. Перед исследуемыми образцами вводят образцы контроля качества в течение четырех последовательных запусков, а затем вводят их после каждых пяти образцов сыворотки.

3. Обработка данных

  1. Подготовка данных
    1. Используйте программное обеспечение для преобразования необработанных данных в формат mzXML. Нормализуйте данные об общем ионном токе (TIC) каждого образца.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Внутреннее приложение на основе R (www.lims2.com), построенное на XCMS, использовалось для анализа информации для интеграции, выравнивания, извлечения и обнаружения пиков27.
    2. Выполняйте аннотации метаболитов с использованием собственной базы данных MS2 (www.lims2.com). Установите порог аннотации на 0,328.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Эндогенные метаболиты были идентифицированы в каждой группе.
  2. Анализ главных компонент и ортогональный частичный дискриминантный анализ наименьших квадратов
    1. Используйте программное обеспечение для анализа для выполнения анализа главных компонент (PCA) и моделирования. Импортируйте стандартизированные данные о метаболитах в программное обеспечение для анализа. Затем используйте автоподбор для построения расчетной модели. Наконец, используйте score , чтобы получить точечную диаграмму оценки PCA.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Кластеризация каждой группы была получена с помощью диаграммы рассеяния баллов PCA. PCA - это неконтролируемый режим анализа, который в основном группирует образцы путем уменьшения размеров без вмешательства.
    2. Используйте программное обеспечение для анализа для выполнения ортогонального частичного дискриминантного анализа наименьших квадратов (OPLS-DA).
      1. Импортируйте стандартизированные данные о метаболитах в группах CR и CRV в программное обеспечение для анализа.
      2. Импортируйте данные из группы CR в созданную группу CR и импортируйте данные из группы CRV в созданную группу CRV.
        ПРИМЕЧАНИЕ: OPLS-DA - это контролируемый режим анализа, и необходима группировка образцов.
      3. Затем используйте автоподбор для построения расчетной модели и используйте оценку для получения точечной диаграммы оценок OPLS-DA. Наконец, используйте VIP для получения переменной значимости в значении проекции (VIP) в OPLS-DA.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Переменная значимость в проекционных (VIP) значениях метаболитов в группах CR и CRV была получена с помощью OPLS-DA.
  3. Идентификация метаболитов дифференциала потенциала
    1. Отсеивайте метаболиты со значениями VIP больше 1 на шаге 3.2.2.3.
    2. Используйте статистическое программное обеспечение для расчета значения P метаболитов, которые были отсеяны на шаге 3.3.1 с помощью t-критерия Стьюдента.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Значимые различия в потенциальном дифференциале метаболитов в группах CR и CRV были определены с помощью t-критерия Стьюдента. Потенциальными дифференциальными метаболитами были метаболиты с p-значением t-критерия Стьюдента < 0,05 и переменной значимостью в проекции (VIP) более 1. Представление было выполнено с использованием вулканического графика.
  4. Идентификация дифференциальных метаболитов
    1. Отсеивайте метаболиты с дифференциалом потенциалов на шаге 3.3. Используйте результаты шага 3.1.2 для идентификации этих дифференциальных метаболитов.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Было идентифицировано небольшое количество потенциальных дифференциальных метаболитов, и они стали кандидатами в дифференциальные метаболиты.
    2. Отсеивайте дифференциальные метаболиты, которые должны быть сопоставлены в базе данных KEGG. Покажите изменения дифференциальных метаболитов в группах CR и CRV, нарисовав тепловую карту.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Небольшое количество дифференциальных метаболитов-кандидатов было сопоставлено, и они стали дифференциальными метаболитами.
  5. Изучение потенциальных метаболических путей
    1. Загрузите различные метаболиты в базу данных Metaboanalyst (www.metaboanalyst.ca).
    2. Используйте анализ путей для получения потенциальных метаболических путей.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Потенциальные метаболические пути были получены в группах CR и CRV. Значение P и значение воздействия были двумя очень важными показателями при выборе критических путей. Значение P было более важным, чем значение воздействия. Значимость определялась значением P < 0,05; Более высокие значения воздействия были связаны с лучшими корреляциями.
    3. Проанализируйте потенциальные метаболические пути, загрузив различные метаболиты в базу данных KEGG (http://www.kegg.jp/kegg/pathway.html).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Также следует учитывать взаимосвязь между функцией метаболического пути и болезнью Паркинсона. Получены критические метаболические пути.
  6. Идентификация составляющих, всасываемых в кровь
    1. Определите химические компоненты в экстрактах CR и CRV, используя собственную базу данных MS2 (www.lims2.com), базу данных метаболома человека (HMDB), а также базы данных Massbank и Chemspider.
    2. Определите компоненты, всасываемые в кровь в группах CR и CRV, и сравните компоненты между группами CR и CRV.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Компоненты, всасываемые в кровь, должны быть обнаружены в группах CR или CRV, но не могут быть обнаружены в контрольной группе.
  7. Статистический анализ
    1. Анализируйте данные с помощью одномерного анализа (UVA) и многомерных статистических методов, включая дисперсионный анализ (ANOVA) и t-критерий Стьюдента.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Экспериментальная информация была представлена с использованием статистического программного обеспечения в виде среднего ± стандартного отклонения (±SD). P < 0,01 считался очень значимой разницей, а P < 0,05 представлял собой значимую разницу28.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Анализ модельного эксперимента по дисменорее
В контрольной группе в течение 30 минут не было кривого ответа, потому что этим крысам не вводили внутрибрюшинно окситоцин и бензоат эстрадиола, чтобы вызвать боль. Крысы в группах модели, CR и CRV показали значительные извивающиеся реакции после инъекции окситоцина. Эти результаты демонстрируют эффективность комбинации эстрадиола, бензоата и окситоцина для индукции дисменореи. Различия в уровнях PGF 2α, PGE 2 и PGF2α / PGE 2

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Из-за большого разнообразия и разной природы ТКМ эти травы иногда не работают в клинической практике, и это может быть связано с неправильной обработкой и отваром ТКМ. Механизмы ТКМ становятся все более очевидными с использованием современной науки и техники29,30. Это исследование показывает, что как CR, так и CRV оказывают терапевтическое действие на крыс модели БП и что терапевтический эффект CRV является более существенным. Механизм действия CRV может быть свя...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана Научно-техническим проектом китайской медицины Комиссии по здравоохранению и планированию семьи Чунцина (номер проекта: ZY201802297), Общим проектом Чунцинского фонда естественных наук (номер проекта: cstc2019jcyj-msxmX065), Характерным планом создания команды высокоэффективной системы инноваций в области сельскохозяйственных технологий для современной горной местности Чунцина на 2022 год [10] и Проектом строительства ключевой дисциплины Китайской материи муниципальной комиссии по здравоохранению Чунцина Медикаментозная обработка.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ацетонитрил Fisher Scientific, Питтсбург, Пенсильвания, США 197164
BECKMAN COULTER Microfuge 20Beckman  Коултер, Инк.
Эстрадиола бензоатShanghai Macklin Biochemical Co., LtdC10042616
муравьиной кислотойFisher Scientific, Питтсбург, Пенсильвания, США177799
системой LC 30AShimadzu, Киото, Япония228-45162-46
Оливковое маслоShanghai Yuanye Biotechnology Co., LtdH25A11P111909
Окситоцин синтетическийЧжэцзянская пептидная биология Co., Ltd 
Крыса PGF2α Набор ИФАShanghai lmai Bioengineering Co., Ltd202101
Rat PGFE2 Набор ИФАShanghai lmai Bioengineering Co., LtdEDL202006217
SPF Sprague-Dawley крысыHunan SJA Laboratory Animal Co., LtdНомер сертификата SCXK (Хунань) 2019-0004
Tecan Infinite 200 PRO   Tecan Austria GmbH, Австрия1510002987
системой Triple TOF 4600SCIEX, Фрамингем, Массачусетс, СШАBK20641402
водыFisher Scientific, Питтсбург, Пенсильвания, США152720
MRZ15K0472019092001

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Yu, W. Y., et al. Acupuncture for primary dysmenorrhea: A potential mechanism from an anti-inflammatory perspective. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 1907009(2021).
  2. Rafique, N., Al-Sheikh, M. H. Prevalence of primary dysmenorrhea and its relationship with body mass index. Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 44 (9), 1773-1778 (2018).
  3. Tong, H., et al. Bioactive constituents and the molecular mechanism of Curcumae Rhizoma in the treatment of primary dysmenorrhea based on network pharmacology and molecular docking. Phytomedicine. 86, 153558(2021).
  4. Ferries-Rowe, E., Corey, E., Archer, J. S. Primary dysmenorrhea: Diagnosis and therapy. Obstetrics & Gynecology. 136 (5), 1047-1058 (2020).
  5. Lu, J., et al. The association study of chemical compositions and their pharmacological effects of Cyperi Rhizoma (Xiangfu), a potential traditional Chinese medicine for treating depression. Journal of Ethnopharmacology. 287, 114962(2021).
  6. Lu, J., et al. Quality status analysis and intrinsic connection research of growing place, morphological characteristics, and quality of Chinese medicine: Cyperi Rhizoma (Xiangfu) as a case study. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2022, 8309832(2022).
  7. Taheri, Y., et al. Cyperus spp.: A review on phytochemical composition, biological activity, and health-promoting effects. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 4014867(2021).
  8. El-Wakil, E. A., Morsi, E. A., Abel-Hady, H. Phytochemical screening, antimicrobial evaluation and GC-MS analysis of Cyperus rotundus. World Journal Of Pharmacy And Pharmaceutical Sciences. 8 (9), 129-139 (2019).
  9. Rocha, F. G., et al. Preclinical study of the topical anti-inflammatory activity of Cyperus rotundus L. extract (Cyperaceae) in models of skin inflammation. Journal of Ethnopharmacology. 254, 112709(2020).
  10. Hao, G., Tang, M., Wei, Y., Che, F., Qian, L. Determination of antidepressant activity of Cyperus rotundus L extract in rats. Tropical Journal of Pharmaceutical Research. 16 (4), 867-871 (2017).
  11. Kakarla, L., et al. Free radical scavenging, α-glucosidase inhibitory and anti-inflammatory constituents from Indian sedges, Cyperus scariosus R.Br and Cyperus rotundus L. Pharmacognosy Magazine. 12 (47), 488-496 (2016).
  12. Shakerin, Z., et al. Effects of Cyperus rotundus extract on spatial memory impairment and neuronal differentiation in rat model of Alzheimer's disease. Advanced Biomedical Research. 9 (1), 17-24 (2020).
  13. Li, J., et al. Pharmacokinetics of caffeic acid, ferulic acid, formononetin, cryptotanshinone, and tanshinone IIA after oral Administration of naoxintong capsule in rat by HPLC-MS/MS. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2017, 9057238(2017).
  14. Zhang, A., et al. Metabolomics: Towards understanding traditional Chinese medicine. Planta Medica. 76 (17), 2026-2035 (2010).
  15. Li, L., Ma, S., Wang, D., Chen, L., Wang, X. Plasma metabolomics analysis of endogenous and exogenous metabolites in the rat after administration of Lonicerae Japonicae Flos. Biomedical Chromatography. 34 (3), 4773(2020).
  16. Guijas, C., Montenegro-Burke, J. R., Warth, B., Spilker, M. E., Siuzdak, G. Metabolomics activity screening for identifying metabolites that modulate phenotype. Nature Biotechnology. 36 (4), 316-320 (2018).
  17. Hu, L., et al. Functional metabolomics decipher biochemical functions and associated mechanisms underlie small-molecule metabolism. Mass Spectrometry Reviews. 39 (5-6), 417-433 (2020).
  18. Cui, L., Lu, H., Lee, Y. Challenges and emergent solutions for LC-MS/MS based untargeted metabolomics in diseases. Mass Spectrometry Reviews. 37 (6), 772-792 (2018).
  19. Liu, F., et al. Metabonomics study on the hepatoprotective effect of Panax notoginseng leaf saponins using UPLC/Q-TOF-MS analysis. The American Journal of Chinese Medicine. 47 (3), 559-575 (2019).
  20. Zhao, L., Hartung, T. Metabonomics and toxicology. Methods in Molecular Biology. 1277, 209-231 (2015).
  21. Martin, F. J., Montoliu, I., Kussmann, M. Metabonomics of ageing - Towards understanding metabolism of a long and healthy life. Mechanisms of Ageing and Development. 165, 171-179 (2017).
  22. Heaney, L. M., Deighton, K., Suzuki, T. Non-targeted metabolomics in sport and exercise science. Journal of Sports Sciences. 37 (9), 959-967 (2019).
  23. Yang, Y., et al. Metabonomics profiling of marinated meat in soy sauce during processing. Journal of the Science of Food and Agriculture. 98 (4), 1325-1331 (2018).
  24. Xu, S. Y. Methodology of Pharmacological Experiment. , People's Medical Publishing House. Beijing, China. (2002).
  25. Ma, B., et al. An integrated study of metabolomics and transcriptomics to reveal the anti-primary dysmenorrhea mechanism of Akebiae Fructus. Journal of Ethnopharmacology. 270, 113763(2021).
  26. Li, X., et al. Regulation of mild moxibustion on uterine vascular and prostaglandin contents in primary dysmenorrhea rat model. Evidence-Based Complementary and Alternative. 2021, 9949642(2021).
  27. Smith, C. A., Want, E. J., O'Maille, G., Abagyan, R., Siuzdak, G. XCMS: Processing mass spectrometry data for metabolite profiling using nonlinear peak alignment, matching, and identification. Analytical Chemistry. 73 (3), 779-787 (2006).
  28. Wang, D., et al. UPLC-MS/MS-based rat serum metabolomics reveals the detoxification mechanism of Psoraleae Fructus during salt processing. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2021, 5597233(2021).
  29. Wang, X., et al. Rhodiola crenulata attenuates apoptosis and mitochondrial energy metabolism disorder in rats with hypobaric hypoxia-induced brain injury by regulating the HIF-1α/microRNA 210/ISCU1/2(COX10) signaling pathway. Journal of Ethnopharmacology. 241, 111801(2019).
  30. Xie, H., et al. Raw and vinegar processed Curcuma wenyujin regulates hepatic fibrosis via bloking TGF-β/Smad signaling pathways and up-regulation of MMP-2/TIMP-1 ratio. Journal of Ethnopharmacology. 246, 111768(2020).
  31. Jung, S. H., et al. α-Cyperone, isolated from the rhizomes of Cyperus rotundus, inhibits LPS-induced COX-2 expression and PGE2 production through the negative regulation of NFkappaB signalling in RAW 264.7 cells. Journal of Ethnopharmacology. 147 (1), 208-214 (2013).
  32. Dantas, L. B. R., et al. Nootkatone inhibits acute and chronic inflammatory responses in mice. Molecules. 25 (9), 2181(2020).
  33. Xu, Y., et al. Nootkatone protects cartilage against degeneration in mice by inhibiting NF- κB signaling pathway. International Immunopharmacology. 100, 108119(2021).
  34. Heimfarth, L., et al. Characterization of β-cyclodextrin/myrtenol complex and its protective effect against nociceptive behavior and cognitive impairment in a chronic musculoskeletal pain model. Carbohydrate Polymers. 244, 116448(2020).
  35. Viana, A., et al. (-)-Myrtenol accelerates healing of acetic acid-induced gastric ulcers in rats and in human gastric adenocarcinoma cells. European Journal of Pharmacology. 854, 139-148 (2019).
  36. Bejeshk, M. A., et al. Anti-inflammatory and anti-remodeling effects of myrtenol in the lungs of asthmatic rats: Histopathological and biochemical findings. Allergologia et Immunopathologica. 47 (2), 185-193 (2019).
  37. Christie, W. W., Harwood, J. L. Oxidation of polyunsaturated fatty acids to produce lipid mediators. Essays in Biochemistry. 64 (3), 401-421 (2020).
  38. Wiktorowska-Owczarek, A., Berezinska, M., Nowak, J. Z. PUFAs: Structures, metabolism and functions. Advances in Clinical and Experimental. 24 (6), 931-941 (2015).
  39. Araujo, P., et al. The effect of omega-3 and omega-6 polyunsaturated fatty acids on the production of cyclooxygenase and lipoxygenase metabolites by human umbilical vein endothelial cells. Nutrients. 11 (5), 966(2019).
  40. Shahidi, F., Ambigaipalan, P. Omega-3 polyunsaturated fatty acids and their health benefits. Annual Review of Food Science and Technology. 9, 345-381 (2018).
  41. Meier, S., Ledgard, A. M., Sato, T. A., Peterson, A. J., Mitchell , M. D. Polyunsaturated fatty acids differentially alter PGF(2α) and PGE2 release from bovine trophoblast and endometrial tissues during short-term culture. Animal Reproduction Science. 111 (2), 353-360 (2009).
  42. Cheng, Z., et al. Altering n-3 to n-6 polyunsaturated fatty acid ratios affects prostaglandin production by ovine uterine endometrium. Animal Reproduction Science. 143 (1-4), 38-47 (2013).
  43. Sultan, C., Gaspari, L., Paris, F. Adolescent dysmenorrhea. Endocrine Development. 22, 171-180 (2012).
  44. Zeev, H. M. D., Craig, L. M. D., Suzanne, R. M. D., Rosalind, V. M. D., Jeffrey, D. M. D. Urinary leukotriene (LT) E4 in adolescents with dysmenorrhea: A pilot study. Journal of Adolescent Health. 27 (3), 151-154 (2000).
  45. Fajrin, I., Alam, G., Usman, A. N. Prostaglandin level of primary dysmenorrhea pain sufferers. Enfermería Clínica. 30, 5-9 (2020).
  46. Iacovides, S., Avidon, I., Baker, F. C. What we know about primary dysmenorrhea today: a critical review. Human Reproduction Update. 21 (6), 762-778 (2015).
  47. Barcikowska, Z., Rajkowska-Labon, E., Grzybowska, M. E., Hansdorfer-Korzon, R., Zorena , K. Inflammatory markers in dysmenorrhea and therapeutic options. International Journal of Environmental Research and Public Health. 17 (4), 1191(2020).
  48. Wang, T., et al. Arachidonic acid metabolism and kidney inflammation. International Journal of Molecular Science. 20 (15), 3683(2019).
  49. Szczuko, M., et al. The role of arachidonic and linoleic acid derivatives in pathological pregnancies and the human reproduction process. International Journal of Molecular Sciences. 21 (24), 9628(2020).
  50. Serrano-Mollar, A., Closa, D. Arachidonic acid signaling in pathogenesis of allergy: Therapeutic implications. Current Drug Targets-Inflammation and Allergy. 4 (2), 151-155 (2005).
  51. Toit, R. L., Storbeck, K. H., Cartwright, M., Cabral, A., Africander, D. Progestins used in endocrine therapy and the implications for the biosynthesis and metabolism of endogenous steroid hormones. Molecular and Cellular Endocrinology. 441, 31-45 (2017).
  52. Ghayee, H. K., Auchus, R. J. Basic concepts and recent developments in human steroid hormone biosynthesis. Reviews in Endocrine and Metabolic Disorders. 8 (4), 289-300 (2007).
  53. Liang, J. J., Rasmusson, A. M. Overview of the molecular steps in steroidogenesis of the GABAergic neurosteroids allopregnanolone and pregnanolone. Chronic Stress. 2, 2470547018818555(2018).
  54. Pettus, B. J., et al. The sphingosine kinase 1/sphingosine-1-phosphate pathway mediates COX-2 induction and PGE2 production in response to TNF-α. The FASEB Journal. 17 (11), 1411-1421 (2003).
  55. Zeidan, Y. H., et al. Acid ceramidase but not acid sphingomyelinase is required for tumor necrosis factor-α-induced PGE2 production. Journal of Biological Chemistry. 281 (34), 24695-24703 (2006).
  56. Kawamori, T., et al. Role for sphingosine kinase 1 in colon carcinogenesis. The FASEB Journal. 23 (2), 405-414 (2009).
  57. Hannun, Y. A., Obeid, L. M. Sphingolipids and their metabolism in physiology and disease. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 19 (3), 175-191 (2018).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cyperi RhizomaVinegar ProcessingPrimary DysmenorrheaLiquid ChromatographyTandem Mass SpectrometryMetabonomics AnalysisDifferential MetabolitesKEGG PathwayPrincipal Component AnalysisOrthogonal Partial Least Squares

Related Articles