$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
В последнее десятилетие были проведены интенсивные исследования роли внеклеточных везикул (ВВ) в качестве диагностических и прогностических биомаркеров, терапевтических мишеней, векторов доставки лекарств или даже в качестве кандидатов для репаративной или регенеративной медицины при множестве заболеваний. EV представляют собой композицию гетерогенных фосфолипидных бислой-окруженных частиц диаметром от 30 до 5000 нм, а именно экзосом, микровезикул и апоптотических тел, которые образуют единый кластер медиаторов межклеточной коммуникации благодаря своей селективной упаковке биоактивных молекул (таких как липиды, белки, РНК и метаболиты). Поскольку почти все клетки (прокариотические и эукариотические) выделяют EV, они могут быть вовлечены в патофизиологию практически всех заболеваний. По сути, молекулярный груз ВВ, высвобождаемый после определенного раздражителя, определяет механизм его действия и отражает состояние его родительской клетки.
Несмотря на все научные усилия и технический прогресс, исследования свойств, структуры, состава, патофизиологической активности и метаболизма/клиренса ВВ все еще технически затруднены методологией экстракции и очистки ВВ. В этом контексте данный сбор методов направлен на создание отчетов о методах изоляции и очистки электромобилей для дальнейшего применения в дальнейшем.
В этом выпуске Эль Итави и коллеги1 описывают выделение ВВ, полученного из спленоцитов, в мышиной модели инфекции Porphyromonas gingivalis. Авторы выделяют EV путем дифференциального центрифугирования из суспензии спленоцитов, а затем собирают EV для изучения его эффектов in vivo . Однако авторы заявляют, что их метод должен быть адаптирован для адгезивных клеток.
Jones и соавторы2, изолируют EV, полученные из культивируемых олигодендроцитов, сочетающих эксклюзионную хроматографию (SEC) и ультрафильтрацию 3-KDa, тем самым обеспечивая надлежащую чистоту EV с минимальным загрязнением белков в их экстрактах. Этот полуавтоматический метод может быть использован практически для всех последующих приложений, таких как функциональные анализы, молекулярная характеристика EV или визуализация EV.
SEC также предлагается Райаном и др. 3, выделить EV из Mycobacterium tuberculosis, чтобы понять физиологию бактерий, взаимодействие с хозяином и молекулярный груз EV. В данной методической рукописи авторы сравнивают производительность ультрацентрифугирования с градиентом плотности и SEC, и приходят к выводу, что восстановление EV и чистота EV улучшаются при выполнении SEC. Авторы также предполагают, что описанная методология может быть применена к другим EV, полученным из микобактерий.
Valle-Tamayo et al. На фиг.4 описан простой двухэтапный способ получения ВВ, полученного из астроцитов, путем преципитации и иммунозахвата на основе полимера антителом к поверхностному антигену астроцитарной клетки-1 (ACSA-1), конъюгированным с магнитными микрогранулами. Авторы предполагают, что иммунозахват может быть объединен с SEC вместо полимерного осаждения, и что магнитные микрогранулы могут быть конъюгированы с другими антителами для изоляции EV от других типов клеток. Извлечение этих ВВ из плазмы крови человека или других биожидкостей может иметь большое значение в области неврологических заболеваний или связанных с ними расстройств.
В последней рукописи выпуска Koh и коллеги5 предлагают метод ультрафильтрации для выделения малых EV (sEV) из культивируемых мезенхимальных стволовых клеток человека. Авторы утверждают, что изолированные ультрафильтрационно изолированные экстракты EV могут быть использованы для терапевтических применений и других последующих анализов. Несмотря на то, что это простой и быстрый метод, который может быть применен к другим биожидкостям и различным типам клеток, авторы признают, что он может не подходить в больших масштабах для промышленного применения.
В целом, в этом специальном выпуске представлены различные относительно простые и легкие лабораторные методы выделения EV из различных размеров и из различных образцов, таких как бактерии, органы животных и клетки человека. Выход экстракции и чистота различаются в зависимости от метода, и их следует учитывать при выборе наиболее экономичного и эффективного по времени метода в соответствии с конечным использованием изолированного электромобиля.
В заключение я хотел бы поблагодарить всех авторов и рецензентов за их вклад, а также редакцию журнала «Визуализированные эксперименты» за их неоценимую помощь в этом процессе. Я искренне надеюсь, что этот специальный выпуск будет полезен исследователям электромобилей в их будущих исследованиях.